中药新药研究的技术要求(附件一)
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2002年7月11日
附件一：有关安全性试验项目及要求
1.刺激性试验
(1)肌肉刺激性试验 方法：取体重2公斤以上健康的家兔2只，雌者应无孕，分别在其左右两腿股四头肌内以无菌操作法各注入供试品1毫升，注射后48小时处死动物，解剖取出股四头肌，纵向切开，观察注射局部刺激反应(必要时应做病理检查)并按下表换算相应的反应级。
┌───────┬──────────────────┐ │ 反 应 级 │ 刺 激 反 应 │ ├───────┼──────────────────┤ │ 0 │无明显变化 │ ├───────┼──────────────────┤ │ 1 │轻度充血，其范围在0.5×1.0厘米以下 │ ├───────┼──────────────────┤ │ 2 │中度充血，其范围在0.5×1.0厘米以上 │ ├───────┼──────────────────┤ │ 3 │重度充血，伴有肌肉变性 │ ├───────┼──────────────────┤ │ 4 │出现坏死，有褐色变性 │ ├───────┼──────────────────┤ │ 5 │出现广泛性坏死 │ └───────┴──────────────────┘
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然后算出4块股四头肌反应级的总和。如各股四头肌反应级的最高与最低组之差大于2时，应另取2只家兔重新试验。在初试或重试的2只家兔4块股四头肌反应级之和小于10时，则认为供试品的局部刺激试验符合规定；但连续注射在一周以上者，其总和应小于6。
(2)血管刺激性试验(静脉注射剂需检查项目)
方法：每日给家兔静脉注射一定量供试品(按临床用药量折算)，连续三次后，解剖动物血管作病理切片观察，应无组织变性或坏死等显著刺激反应。
2.过敏反应
(1)全身主动性过敏试验
(2)被动皮肤过敏试验
(3)根据药物的作用特点选择其他过敏反应的试验方法
, 百拇医药
3.溶血试验
(1)2%细胞混悬液的制备：取兔或羊血数毫升、放入盛有玻璃珠的三角瓶中振摇10分钟，或用玻璃棒搅动血液，除去纤维蛋白原、使成脱纤血液，加约10倍量的生理盐水，摇匀，离心，除去上清液，沉淀的红细胞再用生理盐水如法洗涤2～3次，至上清液不显红色为止。将所得红血球用生理盐水配成2%的悬液，供试验用。
(2)试验方法：取试管6只，按下表配比量依次加入2%红细胞悬液和生理盐水，混匀后，于37℃恒温箱放置半小时，然后分别加入不同量的药液(第6管为对照管)，摇匀后，置37℃恒温箱中。开始每隔15分钟观察一次，1小时后，每隔1小时观察一次，一般观察4小时，如溶液呈透明红色，即表示溶血，如溶液中有棕红色或红棕色絮状沉淀，表示有红细胞凝聚作用。
┌───────────┬───────────────┐ │ 试 管 编 号 │ 1 2 3 4 5 6 │ ├───────────┼───────────────┤ │ 2%红细胞混悬液(ml) │ 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 │ ├───────────┼───────────────┤ │ 生理盐水(ml) │ 2.0 2.1 2.2 2.3 2.4 2.5 │ ├───────────┼───────────────┤ │ 药液(ml) │ 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 │ └───────────┴───────────────┘
结果判断
①一般以0.3ml注射剂(第3管)，在2小时内不产生溶血作用者认为可供注射用。
②如有红细胞凝聚的现象，可按下法进一步判定是真凝聚还是假凝聚。若凝聚物在试管振荡后又能均匀分散，或将凝集物放在载玻片上，在盖玻片边缘滴加2滴生理盐水，在显微镜下观察，凝聚红细胞能被冲散者为假凝聚，供试品可供临床应用，若凝聚物不被摇散或在玻片上不被冲散者为真凝聚，供试品不宜供临床使用。, 百拇医药
1.刺激性试验
(1)肌肉刺激性试验 方法：取体重2公斤以上健康的家兔2只，雌者应无孕，分别在其左右两腿股四头肌内以无菌操作法各注入供试品1毫升，注射后48小时处死动物，解剖取出股四头肌，纵向切开，观察注射局部刺激反应(必要时应做病理检查)并按下表换算相应的反应级。
┌───────┬──────────────────┐ │ 反 应 级 │ 刺 激 反 应 │ ├───────┼──────────────────┤ │ 0 │无明显变化 │ ├───────┼──────────────────┤ │ 1 │轻度充血，其范围在0.5×1.0厘米以下 │ ├───────┼──────────────────┤ │ 2 │中度充血，其范围在0.5×1.0厘米以上 │ ├───────┼──────────────────┤ │ 3 │重度充血，伴有肌肉变性 │ ├───────┼──────────────────┤ │ 4 │出现坏死，有褐色变性 │ ├───────┼──────────────────┤ │ 5 │出现广泛性坏死 │ └───────┴──────────────────┘
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然后算出4块股四头肌反应级的总和。如各股四头肌反应级的最高与最低组之差大于2时，应另取2只家兔重新试验。在初试或重试的2只家兔4块股四头肌反应级之和小于10时，则认为供试品的局部刺激试验符合规定；但连续注射在一周以上者，其总和应小于6。
(2)血管刺激性试验(静脉注射剂需检查项目)
方法：每日给家兔静脉注射一定量供试品(按临床用药量折算)，连续三次后，解剖动物血管作病理切片观察，应无组织变性或坏死等显著刺激反应。
2.过敏反应
(1)全身主动性过敏试验
(2)被动皮肤过敏试验
(3)根据药物的作用特点选择其他过敏反应的试验方法
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3.溶血试验
(1)2%细胞混悬液的制备：取兔或羊血数毫升、放入盛有玻璃珠的三角瓶中振摇10分钟，或用玻璃棒搅动血液，除去纤维蛋白原、使成脱纤血液，加约10倍量的生理盐水，摇匀，离心，除去上清液，沉淀的红细胞再用生理盐水如法洗涤2～3次，至上清液不显红色为止。将所得红血球用生理盐水配成2%的悬液，供试验用。
(2)试验方法：取试管6只，按下表配比量依次加入2%红细胞悬液和生理盐水，混匀后，于37℃恒温箱放置半小时，然后分别加入不同量的药液(第6管为对照管)，摇匀后，置37℃恒温箱中。开始每隔15分钟观察一次，1小时后，每隔1小时观察一次，一般观察4小时，如溶液呈透明红色，即表示溶血，如溶液中有棕红色或红棕色絮状沉淀，表示有红细胞凝聚作用。
┌───────────┬───────────────┐ │ 试 管 编 号 │ 1 2 3 4 5 6 │ ├───────────┼───────────────┤ │ 2%红细胞混悬液(ml) │ 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 │ ├───────────┼───────────────┤ │ 生理盐水(ml) │ 2.0 2.1 2.2 2.3 2.4 2.5 │ ├───────────┼───────────────┤ │ 药液(ml) │ 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 │ └───────────┴───────────────┘
结果判断
①一般以0.3ml注射剂(第3管)，在2小时内不产生溶血作用者认为可供注射用。
②如有红细胞凝聚的现象，可按下法进一步判定是真凝聚还是假凝聚。若凝聚物在试管振荡后又能均匀分散，或将凝集物放在载玻片上，在盖玻片边缘滴加2滴生理盐水，在显微镜下观察，凝聚红细胞能被冲散者为假凝聚，供试品可供临床应用，若凝聚物不被摇散或在玻片上不被冲散者为真凝聚，供试品不宜供临床使用。, 百拇医药