维护血管内皮功能对心脑血管疾病的重要意义——系列研究之一 通心络、卡维地洛及缬沙坦对兔急性心肌梗死 晚期再灌注心肌保护作用的对
作者简介：杨跃进教授
男，44岁，现任中国医学科学院、中国协和医科大学阜外心血管病医院副院长，心内科副主任、教授、主任医师、博士生导师。曾在加拿大渥太华心脏病研究所和美国斯坦福大学医学院进修学习。擅长心脏病危重急症抢救，冠心病急救和介入治疗，在急性心肌梗死后心功能评价和心力衰竭的防治方面取得了显著成绩。他率先在国内冠心病急性心肌梗死心室重构防治、存活心肌识别和心肌微血管内皮功能和完整性保护等领域开展了研究工作，曾主持并完成了卫生部、国家教委、863分题等多项科研基金资助项目。已发表论文100余篇，1999年获美国赛克勒基金年度奖。
文章简介
目的：比较通心络、卡维地洛、缬沙坦对急性心肌梗死晚期再灌注心肌的保护作用。方法选用大耳白兔65只，随机分成：(1)假手术组；(2)对照组；(3)通心络组；(4)卡维地洛组；(5)缬沙坦组和(6)抵克力得+阿司匹林组。药物治疗组先灌药3天，术前1 h再灌药一次再结扎冠状动脉左前降支(LAD)2 h松解2 h，制作大耳白兔急性心肌梗死晚期再灌注模型，最终48例资料完整每组8只。观察心肌丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)活性、心肌梗死范围及心肌超微结构的变化。结果：与对照组比较各治疗组均能不同程度地增高心肌SOD水平，降低心肌MDA水平(P均<0.01)缩小心肌梗死面积(P均<0.01)减轻心肌组织超微结构损伤程度其中通心络增高心肌SOD和缩小梗死面积程度同其它治疗组相比无显著差异P均>0.05。结论：通心络、卡维地洛及缬沙坦在减轻兔心肌梗死晚期再灌注损伤方面作用相似。
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文章内容
众多研究表明氧自由基及脂质过氧化是导致心肌缺血再灌注损伤的重要因素之一，β受体阻滞剂卡维地洛、血管紧张素II受体拮抗剂缬沙坦对心肌的保护作用已成为共识，中药通心络胶囊对缺血再灌注损伤心肌有保护作用虽已有报道，但对急性心肌梗死(AMI)晚期再灌注时心肌损伤的保护作用以及与卡维地洛、缬沙坦等药物相对比尚未见报道。本研究通过观察中药通心络、第三代β受体阻滞剂卡维地洛及AT1受体阻滞剂缬沙坦等药物预处理对心肌丙二醛(makondiadehyde，MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)、心肌梗死面积、心肌超微结构的影响，比较上述药物对兔急性心肌梗死晚期心肌再灌注损伤的防治作用。
材料与方法
1. 实验动物与分组
, 百拇医药
选用健康大耳白兔65 只，雌雄不拘，体重2.5～3.0 kg，平均2.81±0.17 kg，购自北京阜外心血管病研究所北郊实验动物中心。随机分成6组：(1)假手术组；(2)对照组：不用药；(3)通心络组：1.0 g·kg-1·d-1；(4)卡维地洛组：5 mg·kg-1·d-1；(5)缬沙坦组：10 mg·kg-1·d-1；6抵克力得+阿司匹林组 抵克力得30 mg·kg-1·d-1，阿司匹林20 mg·kg-1·d-1。分别将各药物配成药液，灌胃3天，术前1 h再灌药一次；对照组及假手术组均以等量生理盐水灌胃。以Miura手术方式结扎冠状动脉前降支2 h松解2 h，制备急性心肌梗死晚期再灌注模型，最终取得完整资料者进入分析共48只，每组8只。
2. 药品
通心络原粉由石家庄以岭药业股份有限公司提供；卡维地洛由某公司提供(20 mg/片)；缬沙坦，由某公司提供(80 mg/粒)；抵克力得由某公司提供(250 mg/片)；阿司匹林由某公司提供(100 mg/片)。
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3. 观察指标与测定方法
(1)心肌组织MDA、SOD活性测定
实验结束时取缺血区心肌组织(结扎线下左室游离壁、前下壁的心肌组织)0.1 g 制成10%匀浆液，应用硫代巴比妥酸(TBA)比色法测定心肌丙二醛(MDA)含量；应用黄嘌呤氧化酶比色法测定心肌总超氧化物歧化酶(总SOD)活性；
(2)心肌梗死范围的测定
采用TTC方法测定。可见心肌片上存活的心肌被染为深红色 梗死心肌呈灰白色 然后用图像分析仪测定心肌梗死面积(infarction area，I)及心室面积(keft ventricukar area ，LV)，并计算I/LV。
(3)心肌超微结构
实验结束后立即取下新鲜心脏标本，分别于结扎线下缺血区近心尖处取1 mm×1 mm×2 mm同部位心肌标本，用6%戊二醛固定包埋，切片，在日本JEM-1010透射电镜下观察。
, 百拇医药
4. 统计学分析
本研究所有资料均用SPSS 10.0统计学软件进行统计学处理。数据以均数±标准差(x±s)表示，同组间比较用t检验，多组间比较用方差分析及q检验。
结果
1. 通心络、卡维地洛和缬沙坦对AMI晚期再灌注心肌MDA、SOD活性及梗死面积的影响
对照组心肌组织MDA含量较假手术组显著增高(P<0.01)；用药各组MDA均较对照组显著降低(P均<0.01)；对照组心肌组织总SOD活性较假手术组显著降低(P<0.05)，与对照组相比，各用药组心肌SOD活性均有提高，但未达到显著意义水平(P均>0.05)。另外，与对照组对比，通心络、卡维地洛、缬沙坦、抵克力得+阿司匹林组心肌梗死面积均明显缩小(P<0.01)，各治疗组间相比无明显差异(P>0.05)见表1。
, 百拇医药
表1 各组心肌组织MDA、SOD及梗死面积比较(x±s)
组别
MDA(nmol/mgprot)
SOD(NU/mgprot)
I/LV(%)
假手术组
1.25±0.28##
26.17±9.51
-
对照组
3.44±0.33
, 百拇医药
9.87±4.85*
24.86±5.91
通心络组##
2.52±0.54**##
15.92±4.03*
14.24±3.84
卡维地洛组##
2.39±0.26**##
14.57±5.87*
13.65±5.45
缬沙坦组##
, 百拇医药 2.46±0.33**##
14.37±6.49*
14.92±4.70
抵克力得+阿司匹林组##
2.68±0.35**##
13.63±4.99*
17.69±2.27
注：和假手术组比较*P<0.05,**P<0.01；和对照组比较：#P<0.05,##P<0.01。
2. 通心络、卡维地洛和缬沙坦对AMI晚期再灌注心肌的超微结构的影响
(1)假手术组：心肌细胞未见异常。
, 百拇医药
(2)对照组：心肌细胞肌膜肿胀、破损，可见肌浆凝集、较多收缩带。有的肌原纤维模糊不清或溶解；线粒体明显肿胀，线粒体嵴减少、断裂或消失或出现大小不等的空泡；细胞核的染色质有靠边和凝集现象，或染色质部分降解、消失。大部分核膜溶解消失。心肌间质毛细血管充血，可见内皮细胞蚓状突起突入管腔。
(3)通心络组、卡维地洛组、缬沙坦组：病变较对照组轻，肌丝排列较整齐、规则，线粒体基本完整、嵴清晰，部分线粒体肿胀，基质透亮，肌丝轻度溶解，少许肌浆凝集。毛细血管内皮细胞线粒体轻度空泡变性。
(4)抵克力得+阿司匹林组：心肌细胞改变较其他用药组稍重。
讨论
已知自由基介导的脂质过氧化反应是心肌缺血再灌注损伤的重要环节。缺血后再灌注时机体通过多种途径产生多种自由基引起脂质过氧化，造成心肌损害。测试血浆MDA的含量常常可反映机体内过氧化程度及氧自由基水平，间接反映细胞损伤程度。超氧化物歧化酶(SOD)是需氧生物体内的一种含金属离子的酶蛋白，其功能是催化超氧自由基的歧化作用，对机体起保护作用，其活性的高低间接反映机体清除氧自由基的能力。通过SOD含量的检测，可反映机体清除氧自由基的能力。
, 百拇医药
本实验显示心肌缺血再灌注后，对照组心肌组织MDA含量明显增高，总SOD 活性明显降低，提示AMI再灌注后心肌损伤程度较重。重要的是，用药各组MDA含量均较对照组明显降低，SOD活性较均对照组略有增高，提示各药物组均有保护AMI再灌注心肌损伤的作用，通心络也不例外，其保护作用与第三代β-受体阻滞剂卡维地洛和AT1受体阻滞剂缬沙坦相当。通心络保护心肌SOD活性，降低MDA含量与其具有抗血小板聚集、抗氧化作用有关。另一方面，本实验还显示，通心络等治疗组均能明显缩小梗死区面积，这与文献报道相符，证明中药通心络确有缩小梗死区面积的作用，且作用强度与卡维地洛、缬沙坦相当。通心络胶囊是吴以岭教授首创运用中医络病理论研制而成的中药复方制剂，其缩小梗死区面积的机制尚不清楚，可能是由于保护心肌SOD活性，减轻了自由基所介导的脂质过氧化反应，保护了AMI晚期再灌注后的心肌损伤，从而缩小了梗死面积。
本研究还显示对照组心肌缺血再灌注后心肌细胞超微结构病理改变较各治疗组严重，说明有较重的再灌注心肌损伤。通心络、卡维地洛、缬沙坦药物干预后超微结构病理改变较轻，证实这些药物特别是中药通心络对心肌有明显的保护作用。作用机制可能为这些药物有效地防止或抑制了AMI晚期再灌注期间氧自由基的产生和脂质过氧化反应从而维持了细胞膜的完整性，稳定了线粒体的功能。, 百拇医药
男，44岁，现任中国医学科学院、中国协和医科大学阜外心血管病医院副院长，心内科副主任、教授、主任医师、博士生导师。曾在加拿大渥太华心脏病研究所和美国斯坦福大学医学院进修学习。擅长心脏病危重急症抢救，冠心病急救和介入治疗，在急性心肌梗死后心功能评价和心力衰竭的防治方面取得了显著成绩。他率先在国内冠心病急性心肌梗死心室重构防治、存活心肌识别和心肌微血管内皮功能和完整性保护等领域开展了研究工作，曾主持并完成了卫生部、国家教委、863分题等多项科研基金资助项目。已发表论文100余篇，1999年获美国赛克勒基金年度奖。
文章简介
目的：比较通心络、卡维地洛、缬沙坦对急性心肌梗死晚期再灌注心肌的保护作用。方法选用大耳白兔65只，随机分成：(1)假手术组；(2)对照组；(3)通心络组；(4)卡维地洛组；(5)缬沙坦组和(6)抵克力得+阿司匹林组。药物治疗组先灌药3天，术前1 h再灌药一次再结扎冠状动脉左前降支(LAD)2 h松解2 h，制作大耳白兔急性心肌梗死晚期再灌注模型，最终48例资料完整每组8只。观察心肌丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)活性、心肌梗死范围及心肌超微结构的变化。结果：与对照组比较各治疗组均能不同程度地增高心肌SOD水平，降低心肌MDA水平(P均<0.01)缩小心肌梗死面积(P均<0.01)减轻心肌组织超微结构损伤程度其中通心络增高心肌SOD和缩小梗死面积程度同其它治疗组相比无显著差异P均>0.05。结论：通心络、卡维地洛及缬沙坦在减轻兔心肌梗死晚期再灌注损伤方面作用相似。
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文章内容
众多研究表明氧自由基及脂质过氧化是导致心肌缺血再灌注损伤的重要因素之一，β受体阻滞剂卡维地洛、血管紧张素II受体拮抗剂缬沙坦对心肌的保护作用已成为共识，中药通心络胶囊对缺血再灌注损伤心肌有保护作用虽已有报道，但对急性心肌梗死(AMI)晚期再灌注时心肌损伤的保护作用以及与卡维地洛、缬沙坦等药物相对比尚未见报道。本研究通过观察中药通心络、第三代β受体阻滞剂卡维地洛及AT1受体阻滞剂缬沙坦等药物预处理对心肌丙二醛(makondiadehyde，MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)、心肌梗死面积、心肌超微结构的影响，比较上述药物对兔急性心肌梗死晚期心肌再灌注损伤的防治作用。
材料与方法
1. 实验动物与分组
, 百拇医药
选用健康大耳白兔65 只，雌雄不拘，体重2.5～3.0 kg，平均2.81±0.17 kg，购自北京阜外心血管病研究所北郊实验动物中心。随机分成6组：(1)假手术组；(2)对照组：不用药；(3)通心络组：1.0 g·kg-1·d-1；(4)卡维地洛组：5 mg·kg-1·d-1；(5)缬沙坦组：10 mg·kg-1·d-1；6抵克力得+阿司匹林组 抵克力得30 mg·kg-1·d-1，阿司匹林20 mg·kg-1·d-1。分别将各药物配成药液，灌胃3天，术前1 h再灌药一次；对照组及假手术组均以等量生理盐水灌胃。以Miura手术方式结扎冠状动脉前降支2 h松解2 h，制备急性心肌梗死晚期再灌注模型，最终取得完整资料者进入分析共48只，每组8只。
2. 药品
通心络原粉由石家庄以岭药业股份有限公司提供；卡维地洛由某公司提供(20 mg/片)；缬沙坦，由某公司提供(80 mg/粒)；抵克力得由某公司提供(250 mg/片)；阿司匹林由某公司提供(100 mg/片)。
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3. 观察指标与测定方法
(1)心肌组织MDA、SOD活性测定
实验结束时取缺血区心肌组织(结扎线下左室游离壁、前下壁的心肌组织)0.1 g 制成10%匀浆液，应用硫代巴比妥酸(TBA)比色法测定心肌丙二醛(MDA)含量；应用黄嘌呤氧化酶比色法测定心肌总超氧化物歧化酶(总SOD)活性；
(2)心肌梗死范围的测定
采用TTC方法测定。可见心肌片上存活的心肌被染为深红色 梗死心肌呈灰白色 然后用图像分析仪测定心肌梗死面积(infarction area，I)及心室面积(keft ventricukar area ，LV)，并计算I/LV。
(3)心肌超微结构
实验结束后立即取下新鲜心脏标本，分别于结扎线下缺血区近心尖处取1 mm×1 mm×2 mm同部位心肌标本，用6%戊二醛固定包埋，切片，在日本JEM-1010透射电镜下观察。
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4. 统计学分析
本研究所有资料均用SPSS 10.0统计学软件进行统计学处理。数据以均数±标准差(x±s)表示，同组间比较用t检验，多组间比较用方差分析及q检验。
结果
1. 通心络、卡维地洛和缬沙坦对AMI晚期再灌注心肌MDA、SOD活性及梗死面积的影响
对照组心肌组织MDA含量较假手术组显著增高(P<0.01)；用药各组MDA均较对照组显著降低(P均<0.01)；对照组心肌组织总SOD活性较假手术组显著降低(P<0.05)，与对照组相比，各用药组心肌SOD活性均有提高，但未达到显著意义水平(P均>0.05)。另外，与对照组对比，通心络、卡维地洛、缬沙坦、抵克力得+阿司匹林组心肌梗死面积均明显缩小(P<0.01)，各治疗组间相比无明显差异(P>0.05)见表1。
, 百拇医药
表1 各组心肌组织MDA、SOD及梗死面积比较(x±s)
组别
MDA(nmol/mgprot)
SOD(NU/mgprot)
I/LV(%)
假手术组
1.25±0.28##
26.17±9.51
-
对照组
3.44±0.33
, 百拇医药
9.87±4.85*
24.86±5.91
通心络组##
2.52±0.54**##
15.92±4.03*
14.24±3.84
卡维地洛组##
2.39±0.26**##
14.57±5.87*
13.65±5.45
缬沙坦组##
, 百拇医药 2.46±0.33**##
14.37±6.49*
14.92±4.70
抵克力得+阿司匹林组##
2.68±0.35**##
13.63±4.99*
17.69±2.27
注：和假手术组比较*P<0.05,**P<0.01；和对照组比较：#P<0.05,##P<0.01。
2. 通心络、卡维地洛和缬沙坦对AMI晚期再灌注心肌的超微结构的影响
(1)假手术组：心肌细胞未见异常。
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(2)对照组：心肌细胞肌膜肿胀、破损，可见肌浆凝集、较多收缩带。有的肌原纤维模糊不清或溶解；线粒体明显肿胀，线粒体嵴减少、断裂或消失或出现大小不等的空泡；细胞核的染色质有靠边和凝集现象，或染色质部分降解、消失。大部分核膜溶解消失。心肌间质毛细血管充血，可见内皮细胞蚓状突起突入管腔。
(3)通心络组、卡维地洛组、缬沙坦组：病变较对照组轻，肌丝排列较整齐、规则，线粒体基本完整、嵴清晰，部分线粒体肿胀，基质透亮，肌丝轻度溶解，少许肌浆凝集。毛细血管内皮细胞线粒体轻度空泡变性。
(4)抵克力得+阿司匹林组：心肌细胞改变较其他用药组稍重。
讨论
已知自由基介导的脂质过氧化反应是心肌缺血再灌注损伤的重要环节。缺血后再灌注时机体通过多种途径产生多种自由基引起脂质过氧化，造成心肌损害。测试血浆MDA的含量常常可反映机体内过氧化程度及氧自由基水平，间接反映细胞损伤程度。超氧化物歧化酶(SOD)是需氧生物体内的一种含金属离子的酶蛋白，其功能是催化超氧自由基的歧化作用，对机体起保护作用，其活性的高低间接反映机体清除氧自由基的能力。通过SOD含量的检测，可反映机体清除氧自由基的能力。
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本实验显示心肌缺血再灌注后，对照组心肌组织MDA含量明显增高，总SOD 活性明显降低，提示AMI再灌注后心肌损伤程度较重。重要的是，用药各组MDA含量均较对照组明显降低，SOD活性较均对照组略有增高，提示各药物组均有保护AMI再灌注心肌损伤的作用，通心络也不例外，其保护作用与第三代β-受体阻滞剂卡维地洛和AT1受体阻滞剂缬沙坦相当。通心络保护心肌SOD活性，降低MDA含量与其具有抗血小板聚集、抗氧化作用有关。另一方面，本实验还显示，通心络等治疗组均能明显缩小梗死区面积，这与文献报道相符，证明中药通心络确有缩小梗死区面积的作用，且作用强度与卡维地洛、缬沙坦相当。通心络胶囊是吴以岭教授首创运用中医络病理论研制而成的中药复方制剂，其缩小梗死区面积的机制尚不清楚，可能是由于保护心肌SOD活性，减轻了自由基所介导的脂质过氧化反应，保护了AMI晚期再灌注后的心肌损伤，从而缩小了梗死面积。
本研究还显示对照组心肌缺血再灌注后心肌细胞超微结构病理改变较各治疗组严重，说明有较重的再灌注心肌损伤。通心络、卡维地洛、缬沙坦药物干预后超微结构病理改变较轻，证实这些药物特别是中药通心络对心肌有明显的保护作用。作用机制可能为这些药物有效地防止或抑制了AMI晚期再灌注期间氧自由基的产生和脂质过氧化反应从而维持了细胞膜的完整性，稳定了线粒体的功能。, 百拇医药