卵巢上皮癌的肿瘤内T淋巴细胞与肿瘤复发和病人生存率(论著)
图1.卵巢癌T淋巴细胞浸润的类型
图A显示，双重免疫荧光检测细胞角蛋白(荧光素；绿色)及CD3(德克萨斯红；红色)显示，在边界清晰的肿瘤小岛内有细胞角蛋白阳性肿瘤细胞的组织，还显示在肿瘤小岛内和肿瘤周围基质中均存在CD3+肿瘤浸润T淋巴细胞。图B显示，T淋巴细胞存在于肿瘤小岛内以及肿瘤基质中；肿瘤组织内有大量T淋巴细胞。图C中，没有检测到肿瘤组织内T淋巴细胞：在这一份标本中，T淋巴细胞只分布在肿瘤周围基质中。在图D中，在16份含有T淋巴细胞的肿瘤组织以及10份没有T淋巴细胞的肿瘤组织中，T淋巴细胞受体构成成分CD3ε链的实时定量聚合酶链反应分析显示，前者有CD3ε的过度表达，反映T淋巴细胞数较多。Y轴代表了与甘油醛-3-磷酸脱氢酶信使RNA(mRNA)相关的CD3ε表达。图E和F显示了，采用抗CD3、CD4、和CD8单克隆抗体，对来自Ⅲ期卵巢癌新鲜组织的T淋巴细胞进行四色流式细胞仪分析的结果。对活的CD45+白细胞进行了选通(gating)，在对实体肿瘤结节进行机械分离和酶消化后所收获的所有细胞中，CD45+白细胞占35%。T淋巴细胞是最常见的肿瘤浸润免疫细胞。CD3+CD4+T淋巴细胞的定量情况见图E，CD8+CD8+T淋巴细胞的定量情况见图F。图G、H和I显示了卵巢癌组织中CD4+和CD8+T淋巴细胞的免疫组化分析。图G显示了根据对含T淋巴细胞的肿瘤组织与不含T淋巴细胞的肿瘤组织进行的免疫组化分析结果，CD4+T淋巴细胞数与CD8+T淋巴细胞数的相关性。同时计数了肿瘤组织内及肿瘤周围的T淋巴细胞。发现他们密切相关(R2＝0.66)。在图H所示的标本中，肿瘤组织内及肿瘤周围均可见到CD4+T淋巴细胞。在图I显示的连接部分中有肿瘤组织内及肿瘤周围CD8+T淋巴细胞。APC指别藻蓝素。
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图2.根据有或没有肿瘤内T淋巴细胞，对卵巢癌病人进行的生存率分析
图A和图B显示的是，在174例Ⅲ期或Ⅳ期卵巢上皮癌并在治疗后病情完全缓解、部分缓解或无效的病人中，根据肿瘤内T淋巴细胞存在与否进行分析的，无进展生存时间及总生存时间的Kapkan-Meier生存曲线。图C和图D显示的是，在74例Ⅲ期或Ⅳ期卵巢上皮癌并在治疗后完全缓解的病人中，根据肿瘤内T淋巴细胞存在与否分析的，无进展生存时间及总生存时间的Kapkan-Meier生存曲线。图E和图F显示的是，根据肿瘤内T淋巴细胞存在与否，按照治疗后完全缓解的74例病人的残余肿瘤程度进行分层的生存曲线。最佳减积手术定义为残余肿瘤直径<1 cm，次最佳减积手术定义为残余肿瘤直径≥1 cm。采用对数秩检验得出P值。
图3.在有和没有T淋巴细胞的肿瘤组织中的淋巴细胞趋化因子和血管内皮生长因子的表达
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在没有T淋巴细胞的卵巢癌标本中，免疫组化分析没有检测到由γ干扰素诱导的单核因子(图A)、巨噬细胞衍生的趋化因子(图G)或次级淋巴样组织趋化因子蛋白(图J)。在一份没有T淋巴细胞的卵巢癌标本中，免疫组化分析检测到血管内皮生长因子的高度表达(图D)。在含有T淋巴细胞的卵巢癌标本中，免疫组化分析检测到由γ干扰素诱导的单核因子(图B)、巨噬细胞衍生的趋化因子(图H)或次级淋巴样组织趋化因子蛋白(图K)的高度表达。在含有T淋巴细胞的卵巢癌标本中，检测到血管内皮生长因子低表达(图E)。实时定量聚合酶链(PCR)分析显示，含T淋巴细胞的肿瘤与不含T淋巴细胞的肿瘤相比，前者由γ干扰素诱导的单核因子(图C)、巨噬细胞衍生的趋化因子(图I)或次级淋巴样组织趋化因子(图L)的表达显著较高。实时定量聚合酶链(PCR)分析显示，没有T淋巴细胞的肿瘤与有T淋巴细胞的肿瘤相比，前者中血管内皮生长因子的表达较高(图F)。P值是肿瘤内无T淋巴细胞的组与肿瘤内有T淋巴细胞的两组之间的比较。
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表1.无进展及总生存率
组别
进展生存率
无总生存率
病人数
4年生存率(%)
生存时间中位数(月)
P值
病人数
5年生存率(%)
生存时间中位数(月)
P值
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完全或部分缓解
142#
22.2
12.3
174
25.3
30.6
所有病人
<0.001
<0.001
肿瘤内T淋巴细胞
55
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8.7
5.8
72
4.5
18.0
没有
87
31.0
22.4
102
38.0
50.3
有
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完全缓解
所有病人
74
41.8
32.4
74
51.9
63.1
肿瘤内T淋巴细胞
<0.001
<0.001
没有
31
, 百拇医药
14.8
7.6
31
11.9
27.5
有
43
61.4
74.5
43
73.9
NA
次最佳减积手术
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<0.001
<0.001
肿瘤内无T淋巴细胞
22
0.0
7.0
22
6.5
29.5
肿瘤内有T淋巴细胞
14
31.3
32.0
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14
52.8
63.8
最佳减积手术
0.003
<0.001
肿瘤内无T淋巴细胞
9
44.4
7.6
9
44.4$
23.7
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肿瘤内有T淋巴细胞
29
76.3
74.5
29
82.9
NA
*
P值是用秩和检验得出的亚组间比较的值。NA表示没有(表示小于50%的病人死亡)。
# 32例无效的病人从该分析中剔除。
$ 这是48个月时的生存率。
表2.治疗后病情完全缓解病人的临床特征
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特征
肿瘤内无T淋巴细胞
(N=31)
肿瘤内有T淋巴细胞
(N=43)
P值
年龄-岁
0.34
平均值
59.5
57.1
范围
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37～80
组织学类型-例数(%)
0.24
浆液、黏液或子宫内膜样
26(84)
31(72)
清亮细胞或未分化
5(160
12(28)
分级-例数(%)
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1
2(6)
6(14)
2
7(23)
9(210
3
22(71)
28(65)
残余肿瘤-例数(%)
0.001
最佳(≤1 cm)
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9(29)
29(76)
次最佳(>1 cm)
22(71)
14(33)
一线化疗-例数(%)
0.21
顺铂
5(160
14(33)
顺铂加环磷酰胺
5(160
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8(19)
顺铂加紫杉醇
21(68)
21(49)
表3.无进展生存率及总生存率的多变量Cox比例风险分析
变量
病人数
无进展生存率
风险比(95%CI)*
总生存率
肿瘤内T淋巴细胞
有
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43
0.17(0.08～0.36)
没有
31
1.00
残余肿瘤
最佳(≤1 cm)
38
0.31(0.15～0.67)
0.40(0.17～0.95)
次最佳(>1 cm)
36
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1.00
1.00
组织学类型
清亮细胞或未分化
17
1.00
1.00
浆液、黏液或子宫内膜样
57
0.79(0.35～1.75)
0.36(0.15~0.91)
肿瘤分级
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1
8
0.27(0.04～2.17)
0.37(0.40～3.14)
2
16
0.84(0.40～1.80)
0.51(0.21～1.27)
3
50
1.00
1.00
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紫杉醇治疗
接受
42
1.16(0.60～2.25)
1.84(0.80～4.21)
没有接受
32
1.00
1.00
年龄
<55岁
27
1.00
1.00
≥55岁
47
0.83(0.42～1.65)
0.83(0.38～1.81), 百拇医药(茅培英译)