Eto转录抑制结构域的分析与鉴定
急性髓系白血病(AML)-M2b是一种常见的白血病亚型，AML1-ETO融合基因是其基因标志。AML1是一种DNA结合蛋白，能与具有组蛋白乙酰基转移酶活性的p300结合而激活转录，促进造血干细胞分化成熟。AML1-ETO显著抑制AML1靶基因的转录，干扰AML1的功能，阻断造血干/祖细胞分化，并能导致造血细胞扩增。通过基因突变研究发现，AML1-ETO抑制基因转录的活性区域位于ETO(MTG8a)部分。ETO的锌指结构与核受体辅助抑制因子(N-CoR)/mSin3/组蛋白脱乙酰化酶(HDAC)结合，在AML1-ETO抑制基因转录中发挥重要作用。为了进一步明确E鄄TO抑制基因转录的活性部位及其是否依赖于与ETO锌指结构结合的HDAC，中国协和医科大学血液学研究所、血液病医院血液内科进行了该项研究。方法：以位点诱变法使ETO的两个锌指结构分别突变，使用聚合酶链反应扩增ETO突变体，克隆入真核细胞表达质粒pFA-CMV中。通过基因转染、报告基因转录活性分析，确定ETO的不同区段对基因转录调节的作用。结果：成功构建出锌指突变和不同区段的ETO表达载体，并发现ETO存在两个抑制转录的区域，分别位于羧基末端的两个锌指结构和第275～487位氨基酸残基。结论：ETO通过2个区域抑制转录，并且与组蛋白脱乙酰化酶密切相关，后者可能会用作急性髓系白血病M2b的治疗靶点。, 百拇医药