双管聚合酶链反应技术在检测Rhd基因中的应用
Rh血型D抗原(RhD)是导致新生儿溶血病的主要血型抗原。如果能预知胎儿的RhD血型，则可以避免给孕妇造成不必要的损伤。以往RHD基因合子型主要是根据父亲的RhD抗原表型估计，或检测RHD基因的量，或检测RHD相邻基因鉴别RHD的杂合性。2000年Wagn鄄er，Flegel揭示了RhD抗原阴性单倍体RHD缺失的原理，并据此建立了限制性片段长度多态性(RFLP)方法直接测定RHD基因数目，但较为复杂。深圳市输血医学研究所根据这一原理和美国基因序列数据库中的基因序列，设计简易的双管聚合酶链反应(PCR)技术，检测人体的RHD基因纯合子和杂合子。
方法：按美国基因序列数据库中的RHD盒子序列设计两对引物，分别检测RHD基因下游盒子和融合盒子，并引入一对内对照引物，建立双管聚合酶链反应(PCR)技术用于检测RHD基因合子型。同时以经典的限制性片段长度多态性(RFLP)方法作对照。共检测30份Rh血型D抗原(RhD)阳性、阴性及弱D表型个体的全血DNA样品。结果：30份血DNA样品中，29份样品双管PCR法和RFLP法检测结果完全一致，并分别与样品的血清学血型相吻合；对其中的1例弱D表型血DNA样品，PCR和RFLP法均鉴定为RHD阴性纯合型(RHD-/RHD-)，显示该个体拥有一条RHD-单倍体，但RHD下游盒子检测出现假阴性。
结论：双管PCR法是简易而有效的基因检测方法，可用于RHD合子型鉴定，在临床上可以预测胎儿的RhD血型。
摘自《中华妇产科杂志》2003年第38卷第4期, http://www.100md.com
方法：按美国基因序列数据库中的RHD盒子序列设计两对引物，分别检测RHD基因下游盒子和融合盒子，并引入一对内对照引物，建立双管聚合酶链反应(PCR)技术用于检测RHD基因合子型。同时以经典的限制性片段长度多态性(RFLP)方法作对照。共检测30份Rh血型D抗原(RhD)阳性、阴性及弱D表型个体的全血DNA样品。结果：30份血DNA样品中，29份样品双管PCR法和RFLP法检测结果完全一致，并分别与样品的血清学血型相吻合；对其中的1例弱D表型血DNA样品，PCR和RFLP法均鉴定为RHD阴性纯合型(RHD-/RHD-)，显示该个体拥有一条RHD-单倍体，但RHD下游盒子检测出现假阴性。
结论：双管PCR法是简易而有效的基因检测方法，可用于RHD合子型鉴定，在临床上可以预测胎儿的RhD血型。
摘自《中华妇产科杂志》2003年第38卷第4期, http://www.100md.com