基于α-病毒复制酶的高效小鼠P815肿瘤疫苗的构建和表达
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第三军医大学全军免疫学研究所 重庆400038 倪兵；吴玉章；李艳秋；唐 艳；邹丽云；林治华
α-病毒|P815|PSMaRT|RT-PCR|克隆
参见附件。
第三军医大学全军免疫学研究所 重庆400038 倪兵；吴玉章；李艳秋；唐 艳；邹丽云；林治华
关键词：α-病毒；P815；pSMART；RT-PCR；克隆
摘要：目的 克隆小鼠肥大细胞瘤P815细胞株的肿瘤特异P1A基因于含α-病毒复制酶的真核表达载体pSMART中,以制备P815肿瘤DNA疫苗。方法RT-PCR方法扩增P1A基因,以含α-病毒复制酶的哺乳细胞高效表达质粒pSMART为载体,构建重组肿瘤DNA疫苗。重组体经酶切和测序后,再用脂质体转化293人胚肾细胞,ECL western-blot法和免疫组化法鉴定转化细胞中P1A基因的表达。结果 正确构建了P1A/pSMART重组质粒,并且在转化此质粒的293细胞中检测出了P1A的表达。结论 成功构建了重组P1A/pSMART肿瘤DNA疫苗,可以进行下一步的肿瘤动物模型的疫苗接种及疗效观察。
第三军医大学全军免疫学研究所 重庆400038 倪兵；吴玉章；李艳秋；唐 艳；邹丽云；林治华
关键词：α-病毒；P815；pSMART；RT-PCR；克隆
摘要：目的 克隆小鼠肥大细胞瘤P815细胞株的肿瘤特异P1A基因于含α-病毒复制酶的真核表达载体pSMART中,以制备P815肿瘤DNA疫苗。方法RT-PCR方法扩增P1A基因,以含α-病毒复制酶的哺乳细胞高效表达质粒pSMART为载体,构建重组肿瘤DNA疫苗。重组体经酶切和测序后,再用脂质体转化293人胚肾细胞,ECL western-blot法和免疫组化法鉴定转化细胞中P1A基因的表达。结果 正确构建了P1A/pSMART重组质粒,并且在转化此质粒的293细胞中检测出了P1A的表达。结论 成功构建了重组P1A/pSMART肿瘤DNA疫苗,可以进行下一步的肿瘤动物模型的疫苗接种及疗效观察。
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