口腔链球菌丙酮酸氧化酶基因缺陷型变异株的构建
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四川大学华西口腔医学院 610041 庞若愚；张蓉；章锦才；张蕴惠；俞少杰
口腔链球菌|丙酮酸氧化酶|同源重组|过氧化氢|变异
参见附件(45kb)。
四川大学华西口腔医学院 610041 庞若愚；张蓉；章锦才；张蕴惠；俞少杰
关键词：口腔链球菌；丙酮酸氧化酶；同源重组；过氧化氢；变异
摘要：目的 :利用口腔链球菌丙酮酸氧化酶基因 (sopox)的克隆序列 ,重组构建新的不能产生H2 O2 的口腔链球菌变异株。方法 :口腔链球菌株ATCC10 5 5 7经培养后用酚-氯仿法抽提细菌染色体基因组DNA ,经PCR扩增sopox基因 ,用BamHI进行限制酶切 ;参照Chris方法进行电转化 ,挑选阳性菌落测定其上清液中H2 O2 的含量 ;将细菌传 3～4代后再次重复上述检测。结果 :转化子经筛选后得到 1株阳性菌落 ,测定上清液中H2 O2 含量 ,第 1次检测表明变异株产生H2 O2 的量仅有所下降 (介于阳性对照ATCC 10 5 5 7和阴性对照大肠杆菌JM10 9之间 ) ,经 3～ 4次传代后变异株中上清...
四川大学华西口腔医学院 610041 庞若愚；张蓉；章锦才；张蕴惠；俞少杰
关键词：口腔链球菌；丙酮酸氧化酶；同源重组；过氧化氢；变异
摘要：目的 :利用口腔链球菌丙酮酸氧化酶基因 (sopox)的克隆序列 ,重组构建新的不能产生H2 O2 的口腔链球菌变异株。方法 :口腔链球菌株ATCC10 5 5 7经培养后用酚-氯仿法抽提细菌染色体基因组DNA ,经PCR扩增sopox基因 ,用BamHI进行限制酶切 ;参照Chris方法进行电转化 ,挑选阳性菌落测定其上清液中H2 O2 的含量 ;将细菌传 3～4代后再次重复上述检测。结果 :转化子经筛选后得到 1株阳性菌落 ,测定上清液中H2 O2 含量 ,第 1次检测表明变异株产生H2 O2 的量仅有所下降 (介于阳性对照ATCC 10 5 5 7和阴性对照大肠杆菌JM10 9之间 ) ,经 3～ 4次传代后变异株中上清...
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