应用抑制性消减杂交方法构建斑秃毛乳头差异表达基因文库
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第三军医大学第一附属医院皮肤科 400038重庆 杨希川；郝飞；程波；宋志强；杨卫兵；向明明
参见附件(107kb)。
第三军医大学第一附属医院皮肤科 400038重庆 杨希川；郝飞；程波；宋志强；杨卫兵；向明明
关键词：斑秃；基因；杂交
摘要：目的 构建斑秃区与正常毛囊毛乳头细胞 (DPC)差异表达的cDNA正向和反向消减杂交文库 ,为从中克隆鉴定出斑秃特异性表达和生长期DPC特异性表达的基因奠定基础。方法 应用抑制性消减杂交技术 ,分别从斑秃区DPC及正常头皮DPC提取总mRNA ;依次合成单链及双链cDNA ,分别与 2种不同的接头连接 ,再进行正向和反向的 2次消减杂交及 2次抑制性PCR ;将产物与T/A载体连接构建cDNA消减文库。结果 构建成功具有高消减效率的斑秃区及正常头皮DPCcDNA消减文库 ,文库扩增后得到 12 0个阳性克隆 ,其中 90个克隆含有 10 0～ 5 0 0bp插入片段。结论 应用抑制性消减杂交...
第三军医大学第一附属医院皮肤科 400038重庆 杨希川；郝飞；程波；宋志强；杨卫兵；向明明
关键词：斑秃；基因；杂交
摘要：目的 构建斑秃区与正常毛囊毛乳头细胞 (DPC)差异表达的cDNA正向和反向消减杂交文库 ,为从中克隆鉴定出斑秃特异性表达和生长期DPC特异性表达的基因奠定基础。方法 应用抑制性消减杂交技术 ,分别从斑秃区DPC及正常头皮DPC提取总mRNA ;依次合成单链及双链cDNA ,分别与 2种不同的接头连接 ,再进行正向和反向的 2次消减杂交及 2次抑制性PCR ;将产物与T/A载体连接构建cDNA消减文库。结果 构建成功具有高消减效率的斑秃区及正常头皮DPCcDNA消减文库 ,文库扩增后得到 12 0个阳性克隆 ,其中 90个克隆含有 10 0～ 5 0 0bp插入片段。结论 应用抑制性消减杂交...
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