外周血造血干细胞的采集与加工(2)
二、外周血造血干祖细胞的采集
目前临床上，所采集外周血造血干祖细胞为经血细胞分离机去除了红细胞后的单个核白细胞。然而，与采集骨髓造血干细胞相比，使用一台血液分选机与供者相连， 采集和浓缩过程变为自动化了，简便了造血干细胞分选过程。尽管这种功能的机器有很多种，它们的作用原理是一致的。经化疗药物和/重组人细胞生长因子动员的供者血液抽取后，经过抗凝，泵入旋转的淘洗池内，根据细胞大小、比重，血液被分离成各种基本成分，在容器里形成不同的层次，收集富集白细胞的那层后，其余的成分回输给患者。这种过程或是连续进行，或是分次完成(不连续地流动)直至达到需要的造血干细胞数。有人认为，采集过程本身也可使造血干祖细胞 进入外周循环，这种说法有争论，然而，以上采集的干祖细胞主要归因于充分地动员。
关于评价采集是否充足的标准，不同的中心有各自的标准，为了估计是否需要另外再进行采集，只能根据在数小时内就可完成的检测结果才会决定是否需要另外再进行采集。这种有效的检测包括测定有核细胞总数含量和/或CD34+细胞总数。在大多数情况下，一个中心检测CD34+细胞及与其相连的粒单集落形成细胞(CFU-GM)及长期培养的起始细胞(LTC-IC)含量，并评价它们细胞数量与植活时间之间的关系。
, 百拇医药
在自体移植时，每种经分选采集细胞均需进行冷冻保护，以便患者继续接受高剂量治疗。一般情况下，采集细胞不需额外处理既可冷冻，如果自体移植物中含有大量肿瘤细胞时，就须进行净化或用抗体正选择法富集CD34+细胞。 在异基因移植的正常供体采集中，消除移植物中T细胞的做法越来越受到重视。
移植物的深低温保存，一是采用程序降温冷冻法，即首先加入10%的二甲基亚砜(DMSO)作为冷冻剂，使用可调控降温速度的冷冻仪来完成冷冻， 然后细胞保存于液氮中。第二种方法是加入5%的二甲基亚砜，6%羟乙基淀粉和白蛋白，细胞冷存于-80℃冷柜中。输注时，在病人床旁快速融化后不用洗涤， 通过输血器很快输入患者体内。
1.供者的准备
本书第四章较详细的描述了供者的动员过程， 自体外周血干细胞移植时，患者通常使用化疗药物及细胞生长因子联合动员，在白细胞数从最低点回升达到1 ×109/L开始采集，有时也可延误到2×10^9/L时开始进行采集。有一些中心采取监测循环中CD34+细胞的浓度，细胞数一开始回升 (CD34+细胞只要超过15/μl)时采集。对于外周血祖细胞移植中选择供体的标准，一些研究所已做了一些规定，包括英国BCSH血液移植工作协会，美国血库协会[34]、美国与加拿大的干细胞治疗基金会，它们首先制定了必要的防治感染性疾病的隔离措施、HLA 配型和常规查体的时间、方法，并指出自体移植与异体移植在采集方面的不同之处，下面是一些FAHCT研究的标准摘要。
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⑴捐献者必须预测血液细胞分离术时各种危险因素，建立包括有医疗史、体检、实验室检查结果，病历记录文件包括可能需要行中心静脉插管及造血干细胞动员的方案。
⑵每次采集前必须进行临时的健康检查。
⑶要有第一次采集前的72小时之内的全血细胞计数，包括血小板计数。此后每次采集前24小时重复检查。
⑷对于异体供者，一定要记录他的医疗史(包括接种、输血史、妊娠史，鉴定是否有感染或传播HIV病毒的高危性)，查体和实验室检查一定要进行(包括HLA-A、B和DR位点，红细胞ABO血型及Rh血型，HIV-抗原、抗体,,乙肝表面抗原,，丙肝抗体和血细胞病毒抗体，血浆梅毒检查等)，并将检查结果详细记录。
⑸自体移植时，不需HLA配型，但⑷项中其余检查可在采集前完成。
⑹如果发现有异常情况一定要告知供者，不合标准的供者也可被利用，但选择这样一位供者的理由一定要建成文件，并且要有供者及受者双方的知情同意。, http://www.100md.com(陈虎)
目前临床上，所采集外周血造血干祖细胞为经血细胞分离机去除了红细胞后的单个核白细胞。然而，与采集骨髓造血干细胞相比，使用一台血液分选机与供者相连， 采集和浓缩过程变为自动化了，简便了造血干细胞分选过程。尽管这种功能的机器有很多种，它们的作用原理是一致的。经化疗药物和/重组人细胞生长因子动员的供者血液抽取后，经过抗凝，泵入旋转的淘洗池内，根据细胞大小、比重，血液被分离成各种基本成分，在容器里形成不同的层次，收集富集白细胞的那层后，其余的成分回输给患者。这种过程或是连续进行，或是分次完成(不连续地流动)直至达到需要的造血干细胞数。有人认为，采集过程本身也可使造血干祖细胞 进入外周循环，这种说法有争论，然而，以上采集的干祖细胞主要归因于充分地动员。
关于评价采集是否充足的标准，不同的中心有各自的标准，为了估计是否需要另外再进行采集，只能根据在数小时内就可完成的检测结果才会决定是否需要另外再进行采集。这种有效的检测包括测定有核细胞总数含量和/或CD34+细胞总数。在大多数情况下，一个中心检测CD34+细胞及与其相连的粒单集落形成细胞(CFU-GM)及长期培养的起始细胞(LTC-IC)含量，并评价它们细胞数量与植活时间之间的关系。
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在自体移植时，每种经分选采集细胞均需进行冷冻保护，以便患者继续接受高剂量治疗。一般情况下，采集细胞不需额外处理既可冷冻，如果自体移植物中含有大量肿瘤细胞时，就须进行净化或用抗体正选择法富集CD34+细胞。 在异基因移植的正常供体采集中，消除移植物中T细胞的做法越来越受到重视。
移植物的深低温保存，一是采用程序降温冷冻法，即首先加入10%的二甲基亚砜(DMSO)作为冷冻剂，使用可调控降温速度的冷冻仪来完成冷冻， 然后细胞保存于液氮中。第二种方法是加入5%的二甲基亚砜，6%羟乙基淀粉和白蛋白，细胞冷存于-80℃冷柜中。输注时，在病人床旁快速融化后不用洗涤， 通过输血器很快输入患者体内。
1.供者的准备
本书第四章较详细的描述了供者的动员过程， 自体外周血干细胞移植时，患者通常使用化疗药物及细胞生长因子联合动员，在白细胞数从最低点回升达到1 ×109/L开始采集，有时也可延误到2×10^9/L时开始进行采集。有一些中心采取监测循环中CD34+细胞的浓度，细胞数一开始回升 (CD34+细胞只要超过15/μl)时采集。对于外周血祖细胞移植中选择供体的标准，一些研究所已做了一些规定，包括英国BCSH血液移植工作协会，美国血库协会[34]、美国与加拿大的干细胞治疗基金会，它们首先制定了必要的防治感染性疾病的隔离措施、HLA 配型和常规查体的时间、方法，并指出自体移植与异体移植在采集方面的不同之处，下面是一些FAHCT研究的标准摘要。
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⑴捐献者必须预测血液细胞分离术时各种危险因素，建立包括有医疗史、体检、实验室检查结果，病历记录文件包括可能需要行中心静脉插管及造血干细胞动员的方案。
⑵每次采集前必须进行临时的健康检查。
⑶要有第一次采集前的72小时之内的全血细胞计数，包括血小板计数。此后每次采集前24小时重复检查。
⑷对于异体供者，一定要记录他的医疗史(包括接种、输血史、妊娠史，鉴定是否有感染或传播HIV病毒的高危性)，查体和实验室检查一定要进行(包括HLA-A、B和DR位点，红细胞ABO血型及Rh血型，HIV-抗原、抗体,,乙肝表面抗原,，丙肝抗体和血细胞病毒抗体，血浆梅毒检查等)，并将检查结果详细记录。
⑸自体移植时，不需HLA配型，但⑷项中其余检查可在采集前完成。
⑹如果发现有异常情况一定要告知供者，不合标准的供者也可被利用，但选择这样一位供者的理由一定要建成文件，并且要有供者及受者双方的知情同意。, http://www.100md.com(陈虎)