外周血造血干细胞的采集与加工(4)
在V50血细胞分离机中，血液进入一个象钟表状的密封的旋转容器中分离出血浆层和红细胞层，白细胞通过血液逐步泵入容器中获得。(白细胞)被压入顶层，然后在可视控制器监控下，离开(下面的容器)升到容器的高层，容器中剩余的成份回输给患者。对于一名成人患者，整个程序通常需要重复8-10次。采好的白细胞需重新提纯以减少红细胞成份，即将全部收集物重新置入容器中，收集富含单个核的细胞成份，红细胞成份回输给患者。由于这种不连续的采集过程需时较长，每次回输后患者都会接受红细胞，常常引起对ACD-A产生过敏反应。
CS3000和CS3000 plus分离机是把血液泵入一个固定结构有柔韧性的袋子里，在一套分离器的控制下，进行了血液分层，在反离心机中，单个核细胞层和血浆泵入第二个集合器，细胞从这里分离以后，血浆及红细胞一起回输给供者。可以通过一个小体积收集容减少血小板污染。更多的血进入分离机，分离过程逐步进行。采集的全过程是自动的，由一套系统传感器控制。CS3000设有旋转封印，如果有损坏，将导致血液流入离心机容器而发生泄漏。
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BCT Spectra 是在一个旋转的、有伸缩性的、可以任意放置的带形物中进行分离，(细胞带中)白细胞层的高度可以通过控制血浆流动来人工调节，细胞的收集是通过把交界面放置到细胞离开容器时要经过的收集流出通道来完成的，细胞层不断地形成和收集，在这套系统的单核细胞层， 操作者可以控制采集高度。 一套全自动的Spectra程序最近已有描述。对于Fresenius AS104来说，分离是在一套两腔容器，由4种状态逐步完成的。在分离过程中，第一套管子开始形成分层，血小板和血浆， 则继续泵入第二套管腔并到达空间检测器，在那里，它们加入第一套管子中流出的红细胞，然后血流减少，以得到浓缩白细胞。在溢出阶段，白细胞被拉回第二套管腔，在那里它们利用休息阶段被浓缩，在最后的采集阶段，白细胞移动到收集袋中。
通常情况下，在3-4小时的采集过程中可处理2到3倍的血液容量(10-12升)。因为绝大多数细胞分离器都有相当大的死腔，在较小的儿童(15-20Kg )行血细胞采集时，需准备红细胞以补充死腔中的丢失。如果要采集大量的白细胞，常需用20- 25升的血容量(血液加上抗凝剂)。
, 百拇医药
总的来说，通过用新机器分选采集的样本，按新的产品协议书约定。无论采用何种机器，所分选的移植细胞数应是相似的，最终分选采集的样本体积从50ml(使用CS3000小体积采集空间)、(150-400)ml(使用Spectra)、250ml (AS104)到V50至少300- 800ml(每次传递30-50ml)。然而这些分选后的移植物与骨髓来源的移植物在细胞组成上存有差异。阿姆斯特丹的尼德兰红十字会分析了16种经化疗和细胞因子动员剂得到的样本，其中约含40%(±22%)的淋巴细胞，31%(±15%)单核细胞，26%(±19%)髓性细胞(包括杆状细胞、晚幼粒细胞、中幼粒细胞和早幼粒细胞)，2.7%(±1.5%)CD34+细胞。每计数100个白细胞中还含有15±11个有核红细胞，21±15个血小板。如果因为血小板和骨髓细胞给使用这种“产品”(移植物)带来麻烦，需接着冷存和解冻。血小板可被速度较慢的离心机清除，或被当作自动采集的一种产物。
采集的细胞数
临床经验表明，以受者的体重为准，所移植的细胞液中有核细胞要达到(1-2)×10^8/kg以上。如果需要在体外加工和处理操作，采集的细胞应为移植量的2到3 倍，来补偿在处理过程中的细胞丢失量。另外，确定采集细胞的特性和细胞数量对移植的成功与否有决定性意义。通常评价采集移植物是否足够常用的参数有三种：有核细胞总数、细胞集落形成检测和CD34+细胞数。近来接合DNA,揭示了细胞集落单位含量也与单核细胞数有关。细胞集落形成的检测需要12到14天的时间，也就是说，不能用它们来确定停止采集的准确时间，因此，CD34+细胞数的测定已广泛用作检测采集移植细胞量的标准参数，其标准为从1×10^7/kg下降到1.5-2.0×10^6/kg。这些数据必须谨慎解释，实验室检测CD34+细胞的结果有较大的变异性，影响因素较多，如抗CD34单克隆抗体的选择、结合点的选择、流式细胞仪的工作条件以及所采用的对照标准等。国内外多中心研究，通过相互交流染色和非染色细胞样本的抽样检查，发现其结果变异极大，以至有的中心认为应停止采集而另一些中心的结果却认为需要增加采集次数，因此，严格的检测标准和方法有待更多中心的统一探索。下面是国际造血干细胞学会关于血液治疗和移植学的一些有进展的策略概述。, http://www.100md.com(陈虎)
CS3000和CS3000 plus分离机是把血液泵入一个固定结构有柔韧性的袋子里，在一套分离器的控制下，进行了血液分层，在反离心机中，单个核细胞层和血浆泵入第二个集合器，细胞从这里分离以后，血浆及红细胞一起回输给供者。可以通过一个小体积收集容减少血小板污染。更多的血进入分离机，分离过程逐步进行。采集的全过程是自动的，由一套系统传感器控制。CS3000设有旋转封印，如果有损坏，将导致血液流入离心机容器而发生泄漏。
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BCT Spectra 是在一个旋转的、有伸缩性的、可以任意放置的带形物中进行分离，(细胞带中)白细胞层的高度可以通过控制血浆流动来人工调节，细胞的收集是通过把交界面放置到细胞离开容器时要经过的收集流出通道来完成的，细胞层不断地形成和收集，在这套系统的单核细胞层， 操作者可以控制采集高度。 一套全自动的Spectra程序最近已有描述。对于Fresenius AS104来说，分离是在一套两腔容器，由4种状态逐步完成的。在分离过程中，第一套管子开始形成分层，血小板和血浆， 则继续泵入第二套管腔并到达空间检测器，在那里，它们加入第一套管子中流出的红细胞，然后血流减少，以得到浓缩白细胞。在溢出阶段，白细胞被拉回第二套管腔，在那里它们利用休息阶段被浓缩，在最后的采集阶段，白细胞移动到收集袋中。
通常情况下，在3-4小时的采集过程中可处理2到3倍的血液容量(10-12升)。因为绝大多数细胞分离器都有相当大的死腔，在较小的儿童(15-20Kg )行血细胞采集时，需准备红细胞以补充死腔中的丢失。如果要采集大量的白细胞，常需用20- 25升的血容量(血液加上抗凝剂)。
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总的来说，通过用新机器分选采集的样本，按新的产品协议书约定。无论采用何种机器，所分选的移植细胞数应是相似的，最终分选采集的样本体积从50ml(使用CS3000小体积采集空间)、(150-400)ml(使用Spectra)、250ml (AS104)到V50至少300- 800ml(每次传递30-50ml)。然而这些分选后的移植物与骨髓来源的移植物在细胞组成上存有差异。阿姆斯特丹的尼德兰红十字会分析了16种经化疗和细胞因子动员剂得到的样本，其中约含40%(±22%)的淋巴细胞，31%(±15%)单核细胞，26%(±19%)髓性细胞(包括杆状细胞、晚幼粒细胞、中幼粒细胞和早幼粒细胞)，2.7%(±1.5%)CD34+细胞。每计数100个白细胞中还含有15±11个有核红细胞，21±15个血小板。如果因为血小板和骨髓细胞给使用这种“产品”(移植物)带来麻烦，需接着冷存和解冻。血小板可被速度较慢的离心机清除，或被当作自动采集的一种产物。
采集的细胞数
临床经验表明，以受者的体重为准，所移植的细胞液中有核细胞要达到(1-2)×10^8/kg以上。如果需要在体外加工和处理操作，采集的细胞应为移植量的2到3 倍，来补偿在处理过程中的细胞丢失量。另外，确定采集细胞的特性和细胞数量对移植的成功与否有决定性意义。通常评价采集移植物是否足够常用的参数有三种：有核细胞总数、细胞集落形成检测和CD34+细胞数。近来接合DNA,揭示了细胞集落单位含量也与单核细胞数有关。细胞集落形成的检测需要12到14天的时间，也就是说，不能用它们来确定停止采集的准确时间，因此，CD34+细胞数的测定已广泛用作检测采集移植细胞量的标准参数，其标准为从1×10^7/kg下降到1.5-2.0×10^6/kg。这些数据必须谨慎解释，实验室检测CD34+细胞的结果有较大的变异性，影响因素较多，如抗CD34单克隆抗体的选择、结合点的选择、流式细胞仪的工作条件以及所采用的对照标准等。国内外多中心研究，通过相互交流染色和非染色细胞样本的抽样检查，发现其结果变异极大，以至有的中心认为应停止采集而另一些中心的结果却认为需要增加采集次数，因此，严格的检测标准和方法有待更多中心的统一探索。下面是国际造血干细胞学会关于血液治疗和移植学的一些有进展的策略概述。, http://www.100md.com(陈虎)