外周血造血干细胞的采集与加工(7)
异基因采集
从已获得应用异基因外周血HPC的经验表明，尽管在这种移植物中的有接近10倍多的T细胞负荷，急性GVHD的发生率却没有想到会很低，这可能会导致付出提高了慢性GVHD发生率的代价。需考虑消除T细胞的付作用。多种方法(包括阳性和阴性选择)因为这个目的，而得到了发展，虽然他们在骨髓移植上受到严格限制，有报导认为他们可以成功地适应血液来源移植物的清除，然而现仍需要找到去除所采集的移植中所含的大量T细胞及其它不同种类的细胞的夏位的或最优化的方法。通过更进一步净化HPC中肿瘤细胞和减少T淋巴细胞，可引起其内一些有潜在活性的细胞数的损失，这些细胞有助于促进植入和/或提供积极的移植物抗疾病作用。通过接受了血液抗骨髓移植后的淋巴瘤病人其移植成功率的增加，说明了外周血移植物中存有免疫活性物质，HPC将被爱到越来越多的重视。冷冻保护和储存虽然有一些报导，分离产物可成功地在液态储存几天，通常还是在每次采集后进行冷冻保护。这需要加入细胞保护剂来保持细胞完整，调控储存温度。下面概括介绍一下，有两种广泛使用的方法，在其它地方提到过它们，所有的标本都需小心地贴好标签，由于低温箱内贮存及解冻时很难发现标签，而现在很容易买到冷藏，可将标签对于其顶部的小袋子内。
, 百拇医药
DMSO冷冻方法
第一种方法[28]为单独使用DMSO为细胞保护剂，用速控降温的冰箱来冷冻细胞， 细胞可保存于自体血浆或含有血浆蛋白的生理盐水或血浆蛋白浓度为0.5%的保护液中，最终细胞浓度在3×107/ml到8×108/ml之间。细胞液被分装在冷藏袋内(如Baxter细胞冷冻箱)其体积不能超过容器所能容纳能力的一半。然后慢慢地加入含有临床应用20%浓度的DMSO的冷却的生理盐水。袋子经过热合并很快放置到金属罐，罐内有薄层细胞悬浮结构，在冷冻和溶化过程中保护袋子。金属罐放置到一个可调节冷冻速率冰箱里，在-50℃之内，每分钟下降-1~-2℃，有熔点补偿，在- 90℃之内，每分钟下降-5℃。然后放置于液氮中长期保存，在我们的实验室里，已用简化的方法来处理，即是将采集液分装于四个6ml冷冻袋内，每个袋内加未稀释的DMSOml。这项技术发展很快，在浴解时仍保持很多有活性的细胞。近来细胞在10%DMSO里冷冻然后储存在-80℃，或在甲醇中冷冻中的变化已被描述出来。
, 百拇医药 DMSO，淀粉和“dump”冷冻
第二种方法是，DMSO的浓度最后减至5%V/V，加入6%羟基淀粉[HES]来保存细胞，这也包括HAS，在140ml Normosol中加入42g HES(美国FDA研究的新药不同于Dupont药品公司，分子量约250000)。溶液要高压消毒20分钟后，冷却，然后无菌条件下补充100ml25%HAS和70ml 50%DMSO，然后在300ml的溶液中加入等体积的细胞(细胞最终浓度不超过1×10^8℃，避免凝结)然后分装于冷藏袋内，冷藏袋水平地放置在-80℃冰箱里，以备细胞的保护及储存，虽然这种方法常被用于没有速控条件下的冷冻，事实上这种冷冻方法可在准备台上进行重复操作。
储存
长期储存的最佳条件还是有很多争论，在液氮中储存了至少5年的HPC-可以成功地被植入，而在-80℃机械冰箱储存的时间最长为2年半，在液氮中储存提供了稳定安全的温度，然而氮的提供遇到了困难，同时也增加了移植之间的交叉感染机会。在存储和移动过程中，冷冻袋可吸收大量的热量。交叉感染的危险因素可通过袋子之间如用双腔袋、冷存时液氮蒸发以及带有液氮储备支持设备的机械冰箱里而引起或增加。所有这些问题，储存设备应装置24小时警备系统，温度应连续记录(机械和蒸气态冰箱)或定时检查(液态冰箱)。
冷冻的标签可在不同的中心之间不断传递，这种活性因为使冷冻的产品在不同的中心之间不断传递，这种活性因为使用了同基因异体外周血HPC而得到提高。液氮被运送罐上的物质吸收，温度还是可保持数天，也就是说可通过“干装”达到上述效果。无论如何，运送都要有向导伴随，虽然很多特殊的传递服务会接受这些运送，运送还会有可能发生暂时的差错，如样本的温度不会维持，因为这个原因，温度控制指示器应在所有运送过程中做长期的记录。, http://www.100md.com(陈虎)
从已获得应用异基因外周血HPC的经验表明，尽管在这种移植物中的有接近10倍多的T细胞负荷，急性GVHD的发生率却没有想到会很低，这可能会导致付出提高了慢性GVHD发生率的代价。需考虑消除T细胞的付作用。多种方法(包括阳性和阴性选择)因为这个目的，而得到了发展，虽然他们在骨髓移植上受到严格限制，有报导认为他们可以成功地适应血液来源移植物的清除，然而现仍需要找到去除所采集的移植中所含的大量T细胞及其它不同种类的细胞的夏位的或最优化的方法。通过更进一步净化HPC中肿瘤细胞和减少T淋巴细胞，可引起其内一些有潜在活性的细胞数的损失，这些细胞有助于促进植入和/或提供积极的移植物抗疾病作用。通过接受了血液抗骨髓移植后的淋巴瘤病人其移植成功率的增加，说明了外周血移植物中存有免疫活性物质，HPC将被爱到越来越多的重视。冷冻保护和储存虽然有一些报导，分离产物可成功地在液态储存几天，通常还是在每次采集后进行冷冻保护。这需要加入细胞保护剂来保持细胞完整，调控储存温度。下面概括介绍一下，有两种广泛使用的方法，在其它地方提到过它们，所有的标本都需小心地贴好标签，由于低温箱内贮存及解冻时很难发现标签，而现在很容易买到冷藏，可将标签对于其顶部的小袋子内。
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DMSO冷冻方法
第一种方法[28]为单独使用DMSO为细胞保护剂，用速控降温的冰箱来冷冻细胞， 细胞可保存于自体血浆或含有血浆蛋白的生理盐水或血浆蛋白浓度为0.5%的保护液中，最终细胞浓度在3×107/ml到8×108/ml之间。细胞液被分装在冷藏袋内(如Baxter细胞冷冻箱)其体积不能超过容器所能容纳能力的一半。然后慢慢地加入含有临床应用20%浓度的DMSO的冷却的生理盐水。袋子经过热合并很快放置到金属罐，罐内有薄层细胞悬浮结构，在冷冻和溶化过程中保护袋子。金属罐放置到一个可调节冷冻速率冰箱里，在-50℃之内，每分钟下降-1~-2℃，有熔点补偿，在- 90℃之内，每分钟下降-5℃。然后放置于液氮中长期保存，在我们的实验室里，已用简化的方法来处理，即是将采集液分装于四个6ml冷冻袋内，每个袋内加未稀释的DMSOml。这项技术发展很快，在浴解时仍保持很多有活性的细胞。近来细胞在10%DMSO里冷冻然后储存在-80℃，或在甲醇中冷冻中的变化已被描述出来。
, 百拇医药 DMSO，淀粉和“dump”冷冻
第二种方法是，DMSO的浓度最后减至5%V/V，加入6%羟基淀粉[HES]来保存细胞，这也包括HAS，在140ml Normosol中加入42g HES(美国FDA研究的新药不同于Dupont药品公司，分子量约250000)。溶液要高压消毒20分钟后，冷却，然后无菌条件下补充100ml25%HAS和70ml 50%DMSO，然后在300ml的溶液中加入等体积的细胞(细胞最终浓度不超过1×10^8℃，避免凝结)然后分装于冷藏袋内，冷藏袋水平地放置在-80℃冰箱里，以备细胞的保护及储存，虽然这种方法常被用于没有速控条件下的冷冻，事实上这种冷冻方法可在准备台上进行重复操作。
储存
长期储存的最佳条件还是有很多争论，在液氮中储存了至少5年的HPC-可以成功地被植入，而在-80℃机械冰箱储存的时间最长为2年半，在液氮中储存提供了稳定安全的温度，然而氮的提供遇到了困难，同时也增加了移植之间的交叉感染机会。在存储和移动过程中，冷冻袋可吸收大量的热量。交叉感染的危险因素可通过袋子之间如用双腔袋、冷存时液氮蒸发以及带有液氮储备支持设备的机械冰箱里而引起或增加。所有这些问题，储存设备应装置24小时警备系统，温度应连续记录(机械和蒸气态冰箱)或定时检查(液态冰箱)。
冷冻的标签可在不同的中心之间不断传递，这种活性因为使冷冻的产品在不同的中心之间不断传递，这种活性因为使用了同基因异体外周血HPC而得到提高。液氮被运送罐上的物质吸收，温度还是可保持数天，也就是说可通过“干装”达到上述效果。无论如何，运送都要有向导伴随，虽然很多特殊的传递服务会接受这些运送，运送还会有可能发生暂时的差错，如样本的温度不会维持，因为这个原因，温度控制指示器应在所有运送过程中做长期的记录。, http://www.100md.com(陈虎)