前列腺癌基因治疗的实验研究进展(1)
与多数内脏组织的肿瘤相比，前列腺癌接近体表，组织浸润性强，易早期转移。现行治疗方法包括手术切除、化疗、放疗、激素干预及免疫疗法等，虽有一定的疗效，但也明显的局限性。例如，根治性手术和放疗后组织癌细胞残留率可分别高达40%和87%，全身大剂量应用细胞因子等免疫增强剂转移前列腺癌，也因效果差，副作用严重和费用昂贵而逐渐停用。因此，寻求新的有效的方法治疗前列腺癌特别是晚期转移患者成为泌尿外科的迫切任务之一。
近5年以来，随着DNA重组技术的进步以及对肿瘤发生、发展分子机理的逐步阐明，应用基因转移技术治疗恶性肿瘤的研究已取得了长足的进步，目前，国内外已有近百个基因方案进入了临床实验阶段，可以预测，今后10年内高效、简便的基因治疗方法取代现行的治疗前列腺癌等泌尿系统恶性肿瘤将成为现实。
基因转移治疗肿瘤的基本原理，是将一种或数种外源基因经载体导入肿瘤细胞，改变癌细胞的恶性增生表型，加速肿瘤细胞的死亡，因此，治疗性外源基因、载体和接受细胞是基因治疗三个基本成份，在具体实施前须精心选择。目前常用的基因转移技术主要有①病毒：包括RNA和DNA病毒载体；②化学方法：如磷酸钙介导的DNA吸收；③前列腺特异抗原启动子基因(PSA-P)：利用包被DNA分子的膜性载体，如脂质体、原生质体等；④物理方法：包括显微注射、电和激光打孔导入、高速基因枪导入等。从临床应用角度看，理想的基因转移方法应是：①高转染率；②程序简便；③费用低廉；④安全性高。目前在前列腺癌等泌尿系统恶性肿瘤的基因治疗中，最常用的载体为逆转录病毒，其次为腺病毒载体。
, 百拇医药
构建逆转录病毒载体基本方法是：将逆转录病毒前病毒DNA序列的三个复制所必须的基因删除，产生缺陷型病毒，这种病毒只具有完整的控制感染和整合的DNA序列，不能复制。将此种病毒插入到带有抗药性基因(AmpR和TetR)的质粒中，此外，载体质粒还带有在哺乳动物细胞进行选择的标志基因(Neo.Lac.TK.HPRT.DHER等基因)，缺陷型的病毒载体 须信赖于包装细胞(Packing Cell)产生的蛋白质才能完成包装，成为携带外源基因的感染性病毒粒子，用这种病毒粒子感染受体细胞，病毒载体的DNA将依靠其LTR整合入受体细胞，在逆转录酶作用下将病毒RNA逆转录成DNA并随机整合到肿瘤细胞的基因，编码病毒蛋白和所携带的外源基因蛋白。一般情况下，逆转录病毒载体对离体肾和前列腺癌细胞的率可高达70%；若同时携带前列特异抗原起动子基因，在体内可将外源基因特异整合到前列腺上皮细胞，逆转录病毒主要缺点是只能转染分裂状态的细胞，不能转染原代培养的肿瘤细胞；其次是容量小，一般不到10kb，使较长外源基因插入带来困难；最后是体内转染率较低。近来，在体内和体外具有高转染率的腺病毒辣和腺联病毒载体已构建成功，这些病毒颗粒不仅可转染非分裂的细胞，更重要的是经纯化的浓缩后仍能长期保持活性，后外源基因可长期稳定的表达，从而避免了反复转染所带来的困难，在肿瘤基因治疗中具有较为广阔的应用前景。按基因治疗前列膛癌所依据的理论基础和技术路线，现任基因治疗可分为三类，现分述如下：
, http://www.100md.com
一、 纠正性和替代性基因疗法，主要应用于由细胞内功能异常所导致前列组织细胞的癌变。
1.纠正性基因疗法 大量研究已经证实，正常细胞中原癌基因 辊是c-myc,k-ras和c-ab1的点突变，重排和扩增是肿瘤发生发展的重要原因，若选择性地抑制或修饰殿堂原癌基因的过度表达，可使肿瘤细胞恶性表型得以逆转。反义RNA或DNA分子能特异性与靶基因mRNA结合，从而干扰靶基因的表达，从而抑制癌细胞的增生，但由于反义寡核苷酸易肿瘤细胞释放的核酸酶降解而难以进入细胞内，并且随着细胞代谢而逐渐耗尽，因此，只有不断补充才能维持其稳定的抑制效应；而携带反义外源DNA的逆转录病毒载体，可高效感染肿瘤细胞，并在细胞内大量持续表达反义RNA，直接抑制癌基因的表达，成为肿瘤基因治疗的有效手段之一，Mitchell等(1)应用上述方法，将反义c-myc Mrnal转染至人前列腺癌转移细胞株(DU-145)，虽然在离休一对癌细胞增殖无明显影响，但可使种植于裸鼠的肿瘤明显缩小甚至消失，组织学检查发现癌细胞分化程度提高，组织侵润力下降，表明可用于晚期转移性前列癌的治疗(1)。, 百拇医药(郭应禄 张志文)
近5年以来，随着DNA重组技术的进步以及对肿瘤发生、发展分子机理的逐步阐明，应用基因转移技术治疗恶性肿瘤的研究已取得了长足的进步，目前，国内外已有近百个基因方案进入了临床实验阶段，可以预测，今后10年内高效、简便的基因治疗方法取代现行的治疗前列腺癌等泌尿系统恶性肿瘤将成为现实。
基因转移治疗肿瘤的基本原理，是将一种或数种外源基因经载体导入肿瘤细胞，改变癌细胞的恶性增生表型，加速肿瘤细胞的死亡，因此，治疗性外源基因、载体和接受细胞是基因治疗三个基本成份，在具体实施前须精心选择。目前常用的基因转移技术主要有①病毒：包括RNA和DNA病毒载体；②化学方法：如磷酸钙介导的DNA吸收；③前列腺特异抗原启动子基因(PSA-P)：利用包被DNA分子的膜性载体，如脂质体、原生质体等；④物理方法：包括显微注射、电和激光打孔导入、高速基因枪导入等。从临床应用角度看，理想的基因转移方法应是：①高转染率；②程序简便；③费用低廉；④安全性高。目前在前列腺癌等泌尿系统恶性肿瘤的基因治疗中，最常用的载体为逆转录病毒，其次为腺病毒载体。
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构建逆转录病毒载体基本方法是：将逆转录病毒前病毒DNA序列的三个复制所必须的基因删除，产生缺陷型病毒，这种病毒只具有完整的控制感染和整合的DNA序列，不能复制。将此种病毒插入到带有抗药性基因(AmpR和TetR)的质粒中，此外，载体质粒还带有在哺乳动物细胞进行选择的标志基因(Neo.Lac.TK.HPRT.DHER等基因)，缺陷型的病毒载体 须信赖于包装细胞(Packing Cell)产生的蛋白质才能完成包装，成为携带外源基因的感染性病毒粒子，用这种病毒粒子感染受体细胞，病毒载体的DNA将依靠其LTR整合入受体细胞，在逆转录酶作用下将病毒RNA逆转录成DNA并随机整合到肿瘤细胞的基因，编码病毒蛋白和所携带的外源基因蛋白。一般情况下，逆转录病毒载体对离体肾和前列腺癌细胞的率可高达70%；若同时携带前列特异抗原起动子基因，在体内可将外源基因特异整合到前列腺上皮细胞，逆转录病毒主要缺点是只能转染分裂状态的细胞，不能转染原代培养的肿瘤细胞；其次是容量小，一般不到10kb，使较长外源基因插入带来困难；最后是体内转染率较低。近来，在体内和体外具有高转染率的腺病毒辣和腺联病毒载体已构建成功，这些病毒颗粒不仅可转染非分裂的细胞，更重要的是经纯化的浓缩后仍能长期保持活性，后外源基因可长期稳定的表达，从而避免了反复转染所带来的困难，在肿瘤基因治疗中具有较为广阔的应用前景。按基因治疗前列膛癌所依据的理论基础和技术路线，现任基因治疗可分为三类，现分述如下：
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一、 纠正性和替代性基因疗法，主要应用于由细胞内功能异常所导致前列组织细胞的癌变。
1.纠正性基因疗法 大量研究已经证实，正常细胞中原癌基因 辊是c-myc,k-ras和c-ab1的点突变，重排和扩增是肿瘤发生发展的重要原因，若选择性地抑制或修饰殿堂原癌基因的过度表达，可使肿瘤细胞恶性表型得以逆转。反义RNA或DNA分子能特异性与靶基因mRNA结合，从而干扰靶基因的表达，从而抑制癌细胞的增生，但由于反义寡核苷酸易肿瘤细胞释放的核酸酶降解而难以进入细胞内，并且随着细胞代谢而逐渐耗尽，因此，只有不断补充才能维持其稳定的抑制效应；而携带反义外源DNA的逆转录病毒载体，可高效感染肿瘤细胞，并在细胞内大量持续表达反义RNA，直接抑制癌基因的表达，成为肿瘤基因治疗的有效手段之一，Mitchell等(1)应用上述方法，将反义c-myc Mrnal转染至人前列腺癌转移细胞株(DU-145)，虽然在离休一对癌细胞增殖无明显影响，但可使种植于裸鼠的肿瘤明显缩小甚至消失，组织学检查发现癌细胞分化程度提高，组织侵润力下降，表明可用于晚期转移性前列癌的治疗(1)。, 百拇医药(郭应禄 张志文)