环磷酰胺诱导移植免疫耐受的研究进展(2)
6、联合使用其它(如照射，抗血清，单克隆抗体等)诱导方法
Colson 等[11]研究发现全身照射700cGy并输入供体骨髓可接受供体骨髓，形成嵌合体并对供体耐受。而在骨髓细胞输入后2天注入环磷酰胺可使照射剂量减至500cGy。Omoto [5]则发现联合使用aCD4单抗，可使CP用量由200mg/kg减少至100mg/kg。在Mayumi 等[7]诱导MHC+mHC完全不同皮肤耐受的方案中，mAb，SC，BMC，CP缺少任何一种均不能诱导出长期耐受。
7、其它免疫抑制剂(如CsA)的影响
在细胞输入之前或同时使用CsA[23]或激素[24]会影响耐受诱导。这是因为CsA和激素影响了供体反应细胞的活化与增殖，使随后使用的CP不能杀死针对供体的反应细胞，所以当与CsA或激素合用时，它们应在CP使用之后使用[25-26]。
, 百拇医药 三、Cells-followed-by-CP system诱导耐受的机理虽然针对Cells-followed-by-CP system诱导耐受机理作了大量的研究，但其机理仍未最终阐明。这可能因为不同动物品系组合其耐受机理不同，对某一个确定的组合，也不是单一机理在起作用。主要耐受机理如下：
1、克隆破坏(Clonal destruction) 这是这种方案最重要的机理。输入供体抗原后，受体中针对供体反应的克隆被活化增殖，而这些增殖的母细胞中的DNA对烷化剂CP高度敏感，因此这些克隆被选择性破坏了[27]。Maeda 等[27]在多位点mHC不同的AKR→C3H(Mls-la)皮肤移植耐受诱导中发现，当输入AKR脾细胞后，受体内的T淋巴母细胞以及针对供体Mls-la抗原反应的Vβ6 T细胞急剧增长，给予CP后又急剧下降。研究表明这些克隆的死亡更可能是由于凋亡而不是坏死[2]。体外研究表明这种克隆破坏不依赖于骨髓或胸腺，且仅作用于成熟的T(B)细胞[28，29]。进一步的体内[14，30-31]和体外[28-29]研究发现有部分受体的成熟T细胞对抗原刺激很少发生增殖，却在CP处理之前很快成熟，在CP处理之后能逃避CP的杀伤作用成为记忆细胞。供受体间抗原差异愈大，这种细胞比例就越高[5，14，30]。所以有时经Cells-followed-by-CP处理过的受体表现为分离性耐受(Split tolerance)：供体皮肤呈现加速排斥，肿瘤却可耐受[31]。这正由于这种细胞的存在，所以SC+CP系统不能诱导MHC+mHC完全不同皮肤的耐受，需要联合使用ALS，mAb，照射等去除这些剩余的反应细胞才能诱导耐受。
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2、克隆排除(Clonal deletion)当输入供体脾细胞和骨髓细胞后，其中的干细胞可发生增殖，形成包括中枢嵌合体在内的混合嵌合体[7，32]。胸腺内嵌合体导致对供体抗原反应的受体细胞发生胸腺内克隆排除，外周嵌合体也可造成外周性克隆排除[33]。
3、嵌合体形成
采用Cells-followed-by-CP方案，常能在受体中建立起供体细胞的"小嵌合体" 或微嵌合体，这些嵌合体常随移植物的排斥而消失[7，32]。按照Starzl[35]的嵌合体理论，在受体内存在着移植物抗宿主(GVH)和宿主抗移植物(HVG)两种反应，两种反应在免疫抑制剂的存在下达到平衡，就达到了稳定的耐受状态。
四、临床应用前景及展望
到目前为止环磷酰胺诱导的耐受主要集中在鼠类，成功的在MHC完全不同的品系间诱导了皮肤的长期耐受。由于鼠类是比较容易耐受的模型，且单独SC+CP方案仅能诱导的出较浅的耐受，只有与其他耐受方法联合使用才能达到较深的耐受程度，所以单独采用Cells-followed-by-CP方案在临床取得成功的可能性较小，可能会联合其它诱导方法，作为方案的一部分在临床取得成功。在此之前，大动物的研究是必要的，目前国外正在进行这方面的研究。, http://www.100md.com(王国良)
Colson 等[11]研究发现全身照射700cGy并输入供体骨髓可接受供体骨髓，形成嵌合体并对供体耐受。而在骨髓细胞输入后2天注入环磷酰胺可使照射剂量减至500cGy。Omoto [5]则发现联合使用aCD4单抗，可使CP用量由200mg/kg减少至100mg/kg。在Mayumi 等[7]诱导MHC+mHC完全不同皮肤耐受的方案中，mAb，SC，BMC，CP缺少任何一种均不能诱导出长期耐受。
7、其它免疫抑制剂(如CsA)的影响
在细胞输入之前或同时使用CsA[23]或激素[24]会影响耐受诱导。这是因为CsA和激素影响了供体反应细胞的活化与增殖，使随后使用的CP不能杀死针对供体的反应细胞，所以当与CsA或激素合用时，它们应在CP使用之后使用[25-26]。
, 百拇医药 三、Cells-followed-by-CP system诱导耐受的机理虽然针对Cells-followed-by-CP system诱导耐受机理作了大量的研究，但其机理仍未最终阐明。这可能因为不同动物品系组合其耐受机理不同，对某一个确定的组合，也不是单一机理在起作用。主要耐受机理如下：
1、克隆破坏(Clonal destruction) 这是这种方案最重要的机理。输入供体抗原后，受体中针对供体反应的克隆被活化增殖，而这些增殖的母细胞中的DNA对烷化剂CP高度敏感，因此这些克隆被选择性破坏了[27]。Maeda 等[27]在多位点mHC不同的AKR→C3H(Mls-la)皮肤移植耐受诱导中发现，当输入AKR脾细胞后，受体内的T淋巴母细胞以及针对供体Mls-la抗原反应的Vβ6 T细胞急剧增长，给予CP后又急剧下降。研究表明这些克隆的死亡更可能是由于凋亡而不是坏死[2]。体外研究表明这种克隆破坏不依赖于骨髓或胸腺，且仅作用于成熟的T(B)细胞[28，29]。进一步的体内[14，30-31]和体外[28-29]研究发现有部分受体的成熟T细胞对抗原刺激很少发生增殖，却在CP处理之前很快成熟，在CP处理之后能逃避CP的杀伤作用成为记忆细胞。供受体间抗原差异愈大，这种细胞比例就越高[5，14，30]。所以有时经Cells-followed-by-CP处理过的受体表现为分离性耐受(Split tolerance)：供体皮肤呈现加速排斥，肿瘤却可耐受[31]。这正由于这种细胞的存在，所以SC+CP系统不能诱导MHC+mHC完全不同皮肤的耐受，需要联合使用ALS，mAb，照射等去除这些剩余的反应细胞才能诱导耐受。
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2、克隆排除(Clonal deletion)当输入供体脾细胞和骨髓细胞后，其中的干细胞可发生增殖，形成包括中枢嵌合体在内的混合嵌合体[7，32]。胸腺内嵌合体导致对供体抗原反应的受体细胞发生胸腺内克隆排除，外周嵌合体也可造成外周性克隆排除[33]。
3、嵌合体形成
采用Cells-followed-by-CP方案，常能在受体中建立起供体细胞的"小嵌合体" 或微嵌合体，这些嵌合体常随移植物的排斥而消失[7，32]。按照Starzl[35]的嵌合体理论，在受体内存在着移植物抗宿主(GVH)和宿主抗移植物(HVG)两种反应，两种反应在免疫抑制剂的存在下达到平衡，就达到了稳定的耐受状态。
四、临床应用前景及展望
到目前为止环磷酰胺诱导的耐受主要集中在鼠类，成功的在MHC完全不同的品系间诱导了皮肤的长期耐受。由于鼠类是比较容易耐受的模型，且单独SC+CP方案仅能诱导的出较浅的耐受，只有与其他耐受方法联合使用才能达到较深的耐受程度，所以单独采用Cells-followed-by-CP方案在临床取得成功的可能性较小，可能会联合其它诱导方法，作为方案的一部分在临床取得成功。在此之前，大动物的研究是必要的，目前国外正在进行这方面的研究。, http://www.100md.com(王国良)