免疫印迹法测定乳腺肿瘤患者胸苷激酶(2)
结果
一、特异性
1 对照实验:取1份TK1阳性血清,分别设立TK1单抗、Bio anti M及avidin HRP空白对照,经点免疫印迹发光法测定,发现三者对照点均不显色。
2 TK1分子量验证:取10份TK1阳性和5份TK1阴性血清,40%硫酸铵沉淀,取上清液透析,再进行Western Immunoblottinhg,结果TK1阳性血清在分子量25000处均有显色条带,TK1阴性血清无显色。
二、标准曲线的制作不同含量标准品(0、5、10、20、40、80、160pmol/L),经过点免疫印迹发光法测定后,用GS 700图像扫描仪测定各斑点的A值,以标准品浓度值为横坐标,A值为纵坐标制作标准曲线(图1)。
三、重复性试验
两份乳腺肿瘤患者血清,应用点免疫印迹发光法在同一NCM上重复测定20次,结果:病例1的TK1含量为194pmol/L,标准差为12;病例2血清的TK1含量为49pmol/L,标准差为2 1,两者的批内CV分别为0.062和0.043。
四、标本检测各组人群血清TK1的含量比较见表1;用点免疫印迹发光法检测血清的X线片结果见图2。
五、乳腺肿瘤患者术后TK1的动态变化 对1例乳腺良性肿瘤患者手术后0、26、37d的血清进行检测,TK1分别为9.1、2.5、4.9pmol/L;而另1例淋巴结未转移的乳腺癌患者术后0、21、28、65、77、92d的血清TK1分别为91.8、39.7、50.7、20.2、17.5、3.8pmol/L。结果表明,当患者完全康复时,TK1呈明显下降趋势。, http://www.100md.com(李艳 张平安 邹力 何其敏)
一、特异性
1 对照实验:取1份TK1阳性血清,分别设立TK1单抗、Bio anti M及avidin HRP空白对照,经点免疫印迹发光法测定,发现三者对照点均不显色。
2 TK1分子量验证:取10份TK1阳性和5份TK1阴性血清,40%硫酸铵沉淀,取上清液透析,再进行Western Immunoblottinhg,结果TK1阳性血清在分子量25000处均有显色条带,TK1阴性血清无显色。
二、标准曲线的制作不同含量标准品(0、5、10、20、40、80、160pmol/L),经过点免疫印迹发光法测定后,用GS 700图像扫描仪测定各斑点的A值,以标准品浓度值为横坐标,A值为纵坐标制作标准曲线(图1)。
三、重复性试验
两份乳腺肿瘤患者血清,应用点免疫印迹发光法在同一NCM上重复测定20次,结果:病例1的TK1含量为194pmol/L,标准差为12;病例2血清的TK1含量为49pmol/L,标准差为2 1,两者的批内CV分别为0.062和0.043。
四、标本检测各组人群血清TK1的含量比较见表1;用点免疫印迹发光法检测血清的X线片结果见图2。
五、乳腺肿瘤患者术后TK1的动态变化 对1例乳腺良性肿瘤患者手术后0、26、37d的血清进行检测,TK1分别为9.1、2.5、4.9pmol/L;而另1例淋巴结未转移的乳腺癌患者术后0、21、28、65、77、92d的血清TK1分别为91.8、39.7、50.7、20.2、17.5、3.8pmol/L。结果表明,当患者完全康复时,TK1呈明显下降趋势。, http://www.100md.com(李艳 张平安 邹力 何其敏)