血友病携带者及产前检验诊断进展和评价(1)
一、血友病A携带者与产前分子诊断
以前主要是根据VIII:C 、vWF:Ag两项指标以及它们的比例结果进行判别。文献报道HA携带者的VIII:C水平常低于50%，但相当一部分携带者的FVIII:C水平与正常范围重叠，而vWF:Ag较高或高于正常，故单独测定VIII:C的检出率不高，而同时测定VIII:C 和vWF:Ag，使检出率上升至80%以上。随着分子生物学技术的发展，目前主要是利用有缺陷的基因内或其旁与其紧密连锁的限制性内切酶片段长度多态性(RFLP)位点为标记，进行携带者和产前诊断。根据所采用方法的不同，携带者和产前诊断可分为直接基因诊断和间接基因诊断。
1.直接基因诊断 由于近一半的重型HA患者存在FVIII基因内含子22倒位，可以利用这一分子缺陷，对这一部分家系作携带者检测和产前诊断。上海第二医科大学瑞金医院目前采用长距离PCR(LD-PCR)，取代了以往的Southern blot检测内含子22倒位，24h就可以报告检测结果，且不需要使用放射性同位素，给临床检测带来极大的方便。除倒位外，其他患者的分子生物学异常多为点突变，目前采用变性梯度凝胶电泳(DGGE)和单链构象多态性分析(SSCP)几乎能检测全部轻、中型和50%重型HA患者的点突变。利用点突变的检测可为少数家系提供遗传咨询。
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2、间接基因诊断
(1)限制性内切酶片段长度多态性(restriction fragment length polymorphisms, RFLP) 主要包括外显子18外侧的Bcl I，内含子22中的Xba I，以及内含子19中的Hind I等位点。但因为这些位点均处于连锁不平衡状态，因此只能分析Bcl I和Xba I位点。
(2)可变数目的串联重复(variable number of tandem repeat，VNTR) DXS 52(ST14)是位于FVIII基因外与FVIII基因紧密连锁的VNTR。目前可用PCR方法检测不同长度片段的复等位基因，因其呈高度多态性，因此可以用于产前诊断及携带者的诊断。
(3)短重复顺序(short tandem repeat，STR) FVIII基因内有两个STR，分别位于内含子13及内含子22中，可利用PCR的方法联合对这两个多态标志进行检测。间接诊断的方法必须有先证者的DNA，患者的母亲必须是该分析位点的杂合子。对于血友病A家系的遗传咨询，一般首先进行直接诊断即检测内含子22倒位，若结果呈阳性则诊断可以成立；对内含子22倒位阴性的家系，则可以进一步采取间接诊断的策略。瑞金医院联合应用上述直接、间接诊断方法，使血友病A的携带者诊断和产前诊断的可诊断率达100%。
, 百拇医药
二、血友病B的携带者与产前分子诊断。
导致HB的基因缺陷类型十分繁多，目前HB的遗传咨询可以通过直接诊断或间接诊断来进行。
1、直接基因诊断 由于母亲或祖辈X染色体变异,部分血友病B患者无明确家族史，加之因子IX基因较小，因此在携带者或产前诊断时可对突变类型进行直接检测。
2、间接基因诊断 由于血友病B的基因缺陷具有明显异质性，几乎每一个血友病B的家系都存在其独自的缺陷类型。且三分之二患者有明确家族史，而临床只需进行携带者诊断，无需确定突变性质。因而利用基因连锁分析间接诊断仍是目前HB最行之有效的方法。随着基因诊断技术的不断发展，DNA标志的增多，杂合性增强，诊断率明显上升。, http://www.100md.com(王学锋)
以前主要是根据VIII:C 、vWF:Ag两项指标以及它们的比例结果进行判别。文献报道HA携带者的VIII:C水平常低于50%，但相当一部分携带者的FVIII:C水平与正常范围重叠，而vWF:Ag较高或高于正常，故单独测定VIII:C的检出率不高，而同时测定VIII:C 和vWF:Ag，使检出率上升至80%以上。随着分子生物学技术的发展，目前主要是利用有缺陷的基因内或其旁与其紧密连锁的限制性内切酶片段长度多态性(RFLP)位点为标记，进行携带者和产前诊断。根据所采用方法的不同，携带者和产前诊断可分为直接基因诊断和间接基因诊断。
1.直接基因诊断 由于近一半的重型HA患者存在FVIII基因内含子22倒位，可以利用这一分子缺陷，对这一部分家系作携带者检测和产前诊断。上海第二医科大学瑞金医院目前采用长距离PCR(LD-PCR)，取代了以往的Southern blot检测内含子22倒位，24h就可以报告检测结果，且不需要使用放射性同位素，给临床检测带来极大的方便。除倒位外，其他患者的分子生物学异常多为点突变，目前采用变性梯度凝胶电泳(DGGE)和单链构象多态性分析(SSCP)几乎能检测全部轻、中型和50%重型HA患者的点突变。利用点突变的检测可为少数家系提供遗传咨询。
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2、间接基因诊断
(1)限制性内切酶片段长度多态性(restriction fragment length polymorphisms, RFLP) 主要包括外显子18外侧的Bcl I，内含子22中的Xba I，以及内含子19中的Hind I等位点。但因为这些位点均处于连锁不平衡状态，因此只能分析Bcl I和Xba I位点。
(2)可变数目的串联重复(variable number of tandem repeat，VNTR) DXS 52(ST14)是位于FVIII基因外与FVIII基因紧密连锁的VNTR。目前可用PCR方法检测不同长度片段的复等位基因，因其呈高度多态性，因此可以用于产前诊断及携带者的诊断。
(3)短重复顺序(short tandem repeat，STR) FVIII基因内有两个STR，分别位于内含子13及内含子22中，可利用PCR的方法联合对这两个多态标志进行检测。间接诊断的方法必须有先证者的DNA，患者的母亲必须是该分析位点的杂合子。对于血友病A家系的遗传咨询，一般首先进行直接诊断即检测内含子22倒位，若结果呈阳性则诊断可以成立；对内含子22倒位阴性的家系，则可以进一步采取间接诊断的策略。瑞金医院联合应用上述直接、间接诊断方法，使血友病A的携带者诊断和产前诊断的可诊断率达100%。
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二、血友病B的携带者与产前分子诊断。
导致HB的基因缺陷类型十分繁多，目前HB的遗传咨询可以通过直接诊断或间接诊断来进行。
1、直接基因诊断 由于母亲或祖辈X染色体变异,部分血友病B患者无明确家族史，加之因子IX基因较小，因此在携带者或产前诊断时可对突变类型进行直接检测。
2、间接基因诊断 由于血友病B的基因缺陷具有明显异质性，几乎每一个血友病B的家系都存在其独自的缺陷类型。且三分之二患者有明确家族史，而临床只需进行携带者诊断，无需确定突变性质。因而利用基因连锁分析间接诊断仍是目前HB最行之有效的方法。随着基因诊断技术的不断发展，DNA标志的增多，杂合性增强，诊断率明显上升。, http://www.100md.com(王学锋)