病毒性肝炎检验诊断进展与评价(上)(3)
但标志物常是联合存在的，在感染中的变动也有相互关联性(表2)。
(三)丙肝病毒抗体检测
1、抗HCV 第一代试剂盒含有C-100(NS3区)抗原；第二代试剂盒包括C-100、C-22(C区)、C33(NS3)，抗体检出较第一代早32-90天，检出率增加20%；第三代试剂增加了NS5抗原成分，并相应降低了核心区抗原成分，这在提高灵敏度及降低低危人群的非特异反应确实起了很大作用。但有些研究证实，核心区抗原减少可能太多了，因此在检测中可能产生一定的漏检。所以，有必要在新一代试剂中提高核心区抗原成分。其临床意义：
(1)抗HCV-IgG 于发病后1-3个月阳转，急性丙肝不能早期发现，一次阴性不能否定HCV感染，是慢性丙肝诊断的主要标志。
, 百拇医药 (2)抗HCV-IgM 急、慢性丙肝中均可测到阳性，有人认为可作为评价抗病毒药物治疗丙肝的参考指标。
2、重组免疫印迹试验(RIBA) RIBA即重组免疫印迹分析(recombinant immunoblot assay)，是作为一种旁证实验(suplement test)随着第一代HCV抗体检测试剂而产生的。当时，由于C100是HCV基因与SOD基因融合增加一起表达的重组蛋白，在实际检测中经常产生与SOD蛋白的非特异性反应。为验证实验结果的特异性， Chiron公司推出了RIBA实验方法，做为一种旁证实验应用于HCV的临床检测。
第一代的RIBA是将C100，5-1-1及SOD抗原共同点在一张膜上，将此膜与被检血清反应，两种抗原均呈阳性，且SOD带为阴性，则判为阳性反应。仅有一种抗原阳性判为可疑。第二代的RIBA实验又增加了C33c和C22抗原，两种或两种以上呈阳性反应则判为阳性。只对其中一种抗原呈阳性反应则判为可疑。目前发展的第三代RIBA试剂包括核心区的C22p，NS3区的C33c，NS4区的5-1-1p和C100p及酵母表达的NS5抗原。
, 百拇医药
作为HCV抗体的确诊试验，RIBA能检测HCV不同成分多肽的相应抗体，并可排除非特异性所致的假阳性，其中C33和C22与PCR检测HCV RNA有较好符合率；C33和C22为早期抗体，C-100和5-1-1为晚期抗体。RIBA实验提高了抗体检测的特异性，但其灵敏度稍逊，不适于常规检测。
二、病毒核酸检测
病毒核酸是病毒感染的直接证据，是反映体内病毒复制的良好指标，也是反映血液有否传染性的重要标志，亦是抗病毒药物疗效评价的重要指标。
斑点杂交可检出2～10pg/ml或105～6拷贝/ml的HBV DNA，大多数感染者的血清病毒水平较此为高，少数患者及抗病毒治疗后期可低于这一的检出水平。
聚合酶链反应(polymerase chain reaction PCR)又称无细胞分子克隆法，只需数小时即可用电泳法检出0.1mg基因组DNA中仅含数个拷贝的模板序列，较斑点杂交又大大增加了敏感性，随着研究工作不断深入，PCR的方法也不断改进，相继建立了有探针杂交的PCR-ELISA、荧光PCR等方法，检测灵敏度可达102拷贝/ml。
随着抗病毒药物的临床使用，人们越来越关注病毒水平与疗效的关系，认识到从基因定量角度作病情分析的重要性。定量检测病毒基因有多种方法，从技术类型分有两大类，即分子杂交和PCR法。前者包括：①分支链DNA信号扩增试验(branched DNA，bDNA，Bayer)，②杂交捕获试验(Hybrid Capture Ⅱ，Digene)，③液相杂交(Liquid hybridization，Abbott)；后者有④PCR-Amplicor(Roche)和⑤实时荧光PCR(Molecular Beacons)等。, 百拇医药(张东华 陆志礞)
(三)丙肝病毒抗体检测
1、抗HCV 第一代试剂盒含有C-100(NS3区)抗原；第二代试剂盒包括C-100、C-22(C区)、C33(NS3)，抗体检出较第一代早32-90天，检出率增加20%；第三代试剂增加了NS5抗原成分，并相应降低了核心区抗原成分，这在提高灵敏度及降低低危人群的非特异反应确实起了很大作用。但有些研究证实，核心区抗原减少可能太多了，因此在检测中可能产生一定的漏检。所以，有必要在新一代试剂中提高核心区抗原成分。其临床意义：
(1)抗HCV-IgG 于发病后1-3个月阳转，急性丙肝不能早期发现，一次阴性不能否定HCV感染，是慢性丙肝诊断的主要标志。
, 百拇医药 (2)抗HCV-IgM 急、慢性丙肝中均可测到阳性，有人认为可作为评价抗病毒药物治疗丙肝的参考指标。
2、重组免疫印迹试验(RIBA) RIBA即重组免疫印迹分析(recombinant immunoblot assay)，是作为一种旁证实验(suplement test)随着第一代HCV抗体检测试剂而产生的。当时，由于C100是HCV基因与SOD基因融合增加一起表达的重组蛋白，在实际检测中经常产生与SOD蛋白的非特异性反应。为验证实验结果的特异性， Chiron公司推出了RIBA实验方法，做为一种旁证实验应用于HCV的临床检测。
第一代的RIBA是将C100，5-1-1及SOD抗原共同点在一张膜上，将此膜与被检血清反应，两种抗原均呈阳性，且SOD带为阴性，则判为阳性反应。仅有一种抗原阳性判为可疑。第二代的RIBA实验又增加了C33c和C22抗原，两种或两种以上呈阳性反应则判为阳性。只对其中一种抗原呈阳性反应则判为可疑。目前发展的第三代RIBA试剂包括核心区的C22p，NS3区的C33c，NS4区的5-1-1p和C100p及酵母表达的NS5抗原。
, 百拇医药
作为HCV抗体的确诊试验，RIBA能检测HCV不同成分多肽的相应抗体，并可排除非特异性所致的假阳性，其中C33和C22与PCR检测HCV RNA有较好符合率；C33和C22为早期抗体，C-100和5-1-1为晚期抗体。RIBA实验提高了抗体检测的特异性，但其灵敏度稍逊，不适于常规检测。
二、病毒核酸检测
病毒核酸是病毒感染的直接证据，是反映体内病毒复制的良好指标，也是反映血液有否传染性的重要标志，亦是抗病毒药物疗效评价的重要指标。
斑点杂交可检出2～10pg/ml或105～6拷贝/ml的HBV DNA，大多数感染者的血清病毒水平较此为高，少数患者及抗病毒治疗后期可低于这一的检出水平。
聚合酶链反应(polymerase chain reaction PCR)又称无细胞分子克隆法，只需数小时即可用电泳法检出0.1mg基因组DNA中仅含数个拷贝的模板序列，较斑点杂交又大大增加了敏感性，随着研究工作不断深入，PCR的方法也不断改进，相继建立了有探针杂交的PCR-ELISA、荧光PCR等方法，检测灵敏度可达102拷贝/ml。
随着抗病毒药物的临床使用，人们越来越关注病毒水平与疗效的关系，认识到从基因定量角度作病情分析的重要性。定量检测病毒基因有多种方法，从技术类型分有两大类，即分子杂交和PCR法。前者包括：①分支链DNA信号扩增试验(branched DNA，bDNA，Bayer)，②杂交捕获试验(Hybrid Capture Ⅱ，Digene)，③液相杂交(Liquid hybridization，Abbott)；后者有④PCR-Amplicor(Roche)和⑤实时荧光PCR(Molecular Beacons)等。, 百拇医药(张东华 陆志礞)