促甲状腺激素受体在Graves眼病发病中的作用研究进展(2)
虽然在眼球后组织中检测到TSHR转录产物，但这些转录产物能否被翻译成有功能活性和(或)有免疫学意义的相关蛋白尚有争议的。曾有研究者应用放射免疫方法，在猪的眼球后结缔组织膜上检测到低亲和力的、能被125I标记的猪TSH可逆性结合的位点，此位点能被GO患者血清中的IgG优先识别[1]。Burch等用对应[[[[TSHR 3 52 3 67]]]]]氨基酸的多克隆抗体在GO患者的眼球后成纤维细胞培养物中检测到了THSR。
Spitzwe G等[10]采用高度敏感的免疫标记技术和对应hTSHR不同抗原决定簇的单克隆及多克隆抗体，在甲醇固定的眼球后成纤维细胞和结缔组织中发现了独特的细胞浆TSHR样免疫活性，这种免疫活性在腹部成纤维细胞中未有发现 ;在GO患者的眼外肌肌束膜成纤维细胞中可以发现TSHR样免疫活性，而眼外肌则没有;在2%多聚甲醛固定的成纤维细胞显示出特异的细胞膜相关的TSHR样免疫活性。上述试验结果是用多种分别针对TSHR不同抗原决定簇的抗体所获得，表明编码TSHR的RNA能够被眼球后成纤维细胞翻译成有免疫活性的TSHR样蛋白。并且，Bahn等[9]使用免疫组化方法直接显示了GO患者眼球后脂肪-结缔组织切片中有TSHR的表达，而正常个体没有表达;在培养的早期传代(第一、二代)眼球后前脂肪细胞成纤维细胞可以检测到TSHR的表达，这种培养物中包含部分脂肪细胞，但是这些细胞在以后的传代过程中丧失了TSHR的表达和脂肪细胞特异性染色，表明受体的表达和GO眼球后脂肪组织的积聚是由人体内的某种体液因子所刺激。他们还发现TSHR在眼球后的表达受TSH或其他TSHR配体的刺激，因为眼球后成纤维细胞培养物用TSH处理后72h，完整的TSHRmRNA(2.4kb)及其片段(1.3kb)的表达量都有所增加[15]。但是，有人发现TSH对球后成纤维细胞合成葡糖胺聚糖(GAG)并无刺激作用，而GAG对GO的发病相当重要[1],也未能检测出放射性标记的TSH结合到眼球后脂肪细胞膜上[1,10]。
, 百拇医药
2.2 TSHR基因突变与GO Bahn等[9]报告在2例患严重GO、胫前粘液性水肿、指端粗厚和高TSAb水平的患者中，存在TSHR第 52位密码子第一个碱基的突变，即C52→A52，导致苏氨酸转变为脯氨酸。这种替代可导致TSHR胞外区域的构象发生改变，使该受体蛋白的免疫原性或功能发生改变，有可能TSHR的突变形式免疫原性特别强，导致对抗TSHR的自身免疫反应也特别强，从而产生高TSAb及显著的临床表现。他们的研究还发现患者的TSHR基因 187位密码子第3位碱基存在多态性。另外，在7名严重GO患者中，发现其中一名患者眼球后成纤维细胞的TSHRmRNA有点突变，这个突变导致在TSHR公认的抗原性决定区内发生了单个氨基酸的置换，导致TSHR对TSH刺激的反应性增强[1,9]。Cuddihy等[16]发现TSHR基因 52位密码子突变比例，单纯Graves病为15%,Graves病伴GO为17%,Graves病伴GO和胫前粘液性水肿为 40%,Graves病伴GO，胫前粘液性水肿和指端粗厚则达到60%。其它的点突变也有报道[7,17]。但Watson等[18]未发现编码区的多态性与Graves病和GO有关。分析其原因可能是参与GO发病的因素很多，如人类白细胞抗原 (HLA)分型、遗传背景、环境因素等，因此在部分GO患者就检测不出TSHR基因的突变[9]。
, http://www.100md.com
2.3 TSAb与GO 一般认为Graves病的发病是由于TSAb的存在，它结合到TSHR上，模拟TSH的作用，导致甲状腺滤泡细胞膜上的TSH受体过度兴奋，引起甲亢及甲状腺肿大[1,8,10]。临床资料显示8%～12%的GO患者甲状腺功能正常，血循环中甲状腺激素水平没有升高，也无治疗甲亢的历史，但检测患者血液可发现部分患者的TSAb增高[1]。在伴发眼病的Graves病患者中，TSAb阳性率较不伴发眼病的患者高，严重的GO患者常有高滴度的TSAb[1,10]。患者TSAb的改变程度可反映眼部的病变程度[16],在Graves患者血清中可检测到能够刺激培养的皮肤成纤维细胞合成胶原的单克隆TSHR抗体[1,3]。Bartalena等发现因Graves甲亢而行放射治疗的患者中，GO的发生率增高达15%(药物治疗为3%)。探讨其原因可能有:
①131I治疗导致甲状腺释放的甲状腺—眼眶组织共同抗原增加。
②131I治疗引起甲减，TSH升高，促进眼球后成纤维细胞GAG合成增加。
到目前为止，尽管在眼球后细胞上检测到了TSHR转录物以及TSHR样免疫活性的存在，但是要阐明TSHR在GO发病中的作用仍有许多问题有待解决，如TSHR究竟是在成纤维细胞、脂肪细胞还是眼外肌细胞上表达 ?在人体内TSHR如何与TSH、TSAb结合以及结合后的信号传导等。相信随着技术的发展，GO发病的研究一定会走向一个新台阶。, http://www.100md.com(朱显军 安振梅)
Spitzwe G等[10]采用高度敏感的免疫标记技术和对应hTSHR不同抗原决定簇的单克隆及多克隆抗体，在甲醇固定的眼球后成纤维细胞和结缔组织中发现了独特的细胞浆TSHR样免疫活性，这种免疫活性在腹部成纤维细胞中未有发现 ;在GO患者的眼外肌肌束膜成纤维细胞中可以发现TSHR样免疫活性，而眼外肌则没有;在2%多聚甲醛固定的成纤维细胞显示出特异的细胞膜相关的TSHR样免疫活性。上述试验结果是用多种分别针对TSHR不同抗原决定簇的抗体所获得，表明编码TSHR的RNA能够被眼球后成纤维细胞翻译成有免疫活性的TSHR样蛋白。并且，Bahn等[9]使用免疫组化方法直接显示了GO患者眼球后脂肪-结缔组织切片中有TSHR的表达，而正常个体没有表达;在培养的早期传代(第一、二代)眼球后前脂肪细胞成纤维细胞可以检测到TSHR的表达，这种培养物中包含部分脂肪细胞，但是这些细胞在以后的传代过程中丧失了TSHR的表达和脂肪细胞特异性染色，表明受体的表达和GO眼球后脂肪组织的积聚是由人体内的某种体液因子所刺激。他们还发现TSHR在眼球后的表达受TSH或其他TSHR配体的刺激，因为眼球后成纤维细胞培养物用TSH处理后72h，完整的TSHRmRNA(2.4kb)及其片段(1.3kb)的表达量都有所增加[15]。但是，有人发现TSH对球后成纤维细胞合成葡糖胺聚糖(GAG)并无刺激作用，而GAG对GO的发病相当重要[1],也未能检测出放射性标记的TSH结合到眼球后脂肪细胞膜上[1,10]。
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2.2 TSHR基因突变与GO Bahn等[9]报告在2例患严重GO、胫前粘液性水肿、指端粗厚和高TSAb水平的患者中，存在TSHR第 52位密码子第一个碱基的突变，即C52→A52，导致苏氨酸转变为脯氨酸。这种替代可导致TSHR胞外区域的构象发生改变，使该受体蛋白的免疫原性或功能发生改变，有可能TSHR的突变形式免疫原性特别强，导致对抗TSHR的自身免疫反应也特别强，从而产生高TSAb及显著的临床表现。他们的研究还发现患者的TSHR基因 187位密码子第3位碱基存在多态性。另外，在7名严重GO患者中，发现其中一名患者眼球后成纤维细胞的TSHRmRNA有点突变，这个突变导致在TSHR公认的抗原性决定区内发生了单个氨基酸的置换，导致TSHR对TSH刺激的反应性增强[1,9]。Cuddihy等[16]发现TSHR基因 52位密码子突变比例，单纯Graves病为15%,Graves病伴GO为17%,Graves病伴GO和胫前粘液性水肿为 40%,Graves病伴GO，胫前粘液性水肿和指端粗厚则达到60%。其它的点突变也有报道[7,17]。但Watson等[18]未发现编码区的多态性与Graves病和GO有关。分析其原因可能是参与GO发病的因素很多，如人类白细胞抗原 (HLA)分型、遗传背景、环境因素等，因此在部分GO患者就检测不出TSHR基因的突变[9]。
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2.3 TSAb与GO 一般认为Graves病的发病是由于TSAb的存在，它结合到TSHR上，模拟TSH的作用，导致甲状腺滤泡细胞膜上的TSH受体过度兴奋，引起甲亢及甲状腺肿大[1,8,10]。临床资料显示8%～12%的GO患者甲状腺功能正常，血循环中甲状腺激素水平没有升高，也无治疗甲亢的历史，但检测患者血液可发现部分患者的TSAb增高[1]。在伴发眼病的Graves病患者中，TSAb阳性率较不伴发眼病的患者高，严重的GO患者常有高滴度的TSAb[1,10]。患者TSAb的改变程度可反映眼部的病变程度[16],在Graves患者血清中可检测到能够刺激培养的皮肤成纤维细胞合成胶原的单克隆TSHR抗体[1,3]。Bartalena等发现因Graves甲亢而行放射治疗的患者中，GO的发生率增高达15%(药物治疗为3%)。探讨其原因可能有:
①131I治疗导致甲状腺释放的甲状腺—眼眶组织共同抗原增加。
②131I治疗引起甲减，TSH升高，促进眼球后成纤维细胞GAG合成增加。
到目前为止，尽管在眼球后细胞上检测到了TSHR转录物以及TSHR样免疫活性的存在，但是要阐明TSHR在GO发病中的作用仍有许多问题有待解决，如TSHR究竟是在成纤维细胞、脂肪细胞还是眼外肌细胞上表达 ?在人体内TSHR如何与TSH、TSAb结合以及结合后的信号传导等。相信随着技术的发展，GO发病的研究一定会走向一个新台阶。, http://www.100md.com(朱显军 安振梅)