我国神经药理学研究的主要进展(下)(1)
三、新技术、新方法
药理实验方法和模型是进行药物筛选、药物作用机制研究和定量构效关系以及疾病本质探讨所不可缺少的方法，科学发展的历史已证明，无论是理论的创立还是突破，常常是昆跟在技术革新之后出现的，采用和创新药理实验方法的重要性自不待言。现简要介绍国内新技术、新方法的应用情况。
1.行为学方法 药物对人体和动物的作用，现已可在分子和基因水平上进行观测，但是行为学方法仍被广泛采用，而且有很大发展，行为学方法的意义在于：人的思维、认知、精神活动不能直接观察，通过动物的行为表现，可以了解药物对神经精神活动的影响和在药物作用下机体对外界刺激的应答与适应的改变。另外，药物未造成结构改变或病理损伤之前，行为学已发生变化，说明它是一种灵敏的方法。
学习记忆实验方法及模型已跟上国际先进水平，一是因为我国已采用国际上常用的模型和方法，再是所有仪器设备均由自己研制并实现了全部自动化。经验告诉我们：建立记忆障碍模型来观察药物作用是十分必要的，常用的许多实验方法，正常动物经一次学习即可记住和巩固下来。在采用这类实验方法的情况下，应用记忆障碍模型尤为必要。
, 百拇医药
近几年发展起来的“失望(despair)或不动(immobility)”行为实验用于研究抗抑郁药有较高选择性。种种冲突行为(conflict behavior)是筛选抗焦虑药的较特异的方法。操作性条件反射与经典性条件反射的主要区别是：“强化”控制行为，而不用“条件刺激”控制行为，动物的操作取决于强化的程序，而强化再分为正性(水及食物)和负性(电击)，使程序控制模式多种多样，可用于研究学习、记忆、焦虑、抑制、成瘾和鉴别药物作用性质、分类和作用机制。
2.递质和受体测定 80年代我国几个单位同时开展了HPLC-电化学检测器分析，测定生物样品的NE、DA、5-HT及其代谢产物DOPAC、HVA和5-HIAA，一般在20min之内即可完成，乙酰胆碱的测定除采用放免盒，还可采用HPLC-ED和GCMS等仪器设备进行检测，检测范围可达pmol水平，已逐渐取代了生物测定。
利用放射配基结合法测定受体的技术已被广泛应用，除用于筛选，观察药物对受体的亲和力，还用于探索新的受体、亚型和内源性配体以及纯化受体，近几年积累起来的一个经验是：许多中药对某些受体无特异性结合，但给药物数日或数周后，可使受体上调或下调，最近，有些研究工作者正在采用非放射配基的方法测定受体或受体的表达。
, 百拇医药
3.电生理技术 膜钳压技术用于记录细胞膜离子通道电流，是近十几年来在技术方法上的一项突出成就，它广泛用于生物学和医药学各研究领域，而且日前边成为神经药理学研究重要手段，利用膜片钳技术可以进行四种形式的离子通道电流记录，即细胞帖附式，膜外面向外，内面向外和全细胞记录，由于它们形成结构不同，各有其实际应用价值，前三种方式对研究单通道特性，确定通道类型非常重要，第四种方式由于细胞受损较小，基本上保持原有的生理功能，因而某种离子通道的变化或药物对某类通道的影响可直接通过细胞的功能表现出来，国内目前用这一技术进行检测的离子通道有Na+通道、Ca2+通道、K+通道和Cl-通道等。
突触功能的可塑性是学习记忆的神经基础，海马突触效应的长时程增强(LTP)是指用高频电脉冲对传入纤维进行短暂刺激引起该神经通路上突触传递效能明显增强，且这一效应在停止刺激后可维持较长时间，国内已建立三种类型的LTP测定技术：一是从成年哺乳动物脑区制备厚约100-700μm，能在体外存活数小时的海马薄片，其神经环路较完整，可研究原有神经环路不同神经元间的相互作用，脑片排除了血脑屏障，可在解剖镜直视下将电极插到特定部位，不需立体定位仪；二是在麻醉情况下将刺激和记录电极借助立体定位仪插入海马特定部位记录群峰电位(PS)和LTP；三是预先在大鼠脑内埋藏电极，其后，在动物清醒情况下观察不同途径给药对LTP的影响。目前，研究药物对学习记忆的影响，往往把行为试验和LTP试验结合起来，这样更有助于对药物的作用做出确切评价。, http://www.100md.com(张均田)
药理实验方法和模型是进行药物筛选、药物作用机制研究和定量构效关系以及疾病本质探讨所不可缺少的方法，科学发展的历史已证明，无论是理论的创立还是突破，常常是昆跟在技术革新之后出现的，采用和创新药理实验方法的重要性自不待言。现简要介绍国内新技术、新方法的应用情况。
1.行为学方法 药物对人体和动物的作用，现已可在分子和基因水平上进行观测，但是行为学方法仍被广泛采用，而且有很大发展，行为学方法的意义在于：人的思维、认知、精神活动不能直接观察，通过动物的行为表现，可以了解药物对神经精神活动的影响和在药物作用下机体对外界刺激的应答与适应的改变。另外，药物未造成结构改变或病理损伤之前，行为学已发生变化，说明它是一种灵敏的方法。
学习记忆实验方法及模型已跟上国际先进水平，一是因为我国已采用国际上常用的模型和方法，再是所有仪器设备均由自己研制并实现了全部自动化。经验告诉我们：建立记忆障碍模型来观察药物作用是十分必要的，常用的许多实验方法，正常动物经一次学习即可记住和巩固下来。在采用这类实验方法的情况下，应用记忆障碍模型尤为必要。
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近几年发展起来的“失望(despair)或不动(immobility)”行为实验用于研究抗抑郁药有较高选择性。种种冲突行为(conflict behavior)是筛选抗焦虑药的较特异的方法。操作性条件反射与经典性条件反射的主要区别是：“强化”控制行为，而不用“条件刺激”控制行为，动物的操作取决于强化的程序，而强化再分为正性(水及食物)和负性(电击)，使程序控制模式多种多样，可用于研究学习、记忆、焦虑、抑制、成瘾和鉴别药物作用性质、分类和作用机制。
2.递质和受体测定 80年代我国几个单位同时开展了HPLC-电化学检测器分析，测定生物样品的NE、DA、5-HT及其代谢产物DOPAC、HVA和5-HIAA，一般在20min之内即可完成，乙酰胆碱的测定除采用放免盒，还可采用HPLC-ED和GCMS等仪器设备进行检测，检测范围可达pmol水平，已逐渐取代了生物测定。
利用放射配基结合法测定受体的技术已被广泛应用，除用于筛选，观察药物对受体的亲和力，还用于探索新的受体、亚型和内源性配体以及纯化受体，近几年积累起来的一个经验是：许多中药对某些受体无特异性结合，但给药物数日或数周后，可使受体上调或下调，最近，有些研究工作者正在采用非放射配基的方法测定受体或受体的表达。
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3.电生理技术 膜钳压技术用于记录细胞膜离子通道电流，是近十几年来在技术方法上的一项突出成就，它广泛用于生物学和医药学各研究领域，而且日前边成为神经药理学研究重要手段，利用膜片钳技术可以进行四种形式的离子通道电流记录，即细胞帖附式，膜外面向外，内面向外和全细胞记录，由于它们形成结构不同，各有其实际应用价值，前三种方式对研究单通道特性，确定通道类型非常重要，第四种方式由于细胞受损较小，基本上保持原有的生理功能，因而某种离子通道的变化或药物对某类通道的影响可直接通过细胞的功能表现出来，国内目前用这一技术进行检测的离子通道有Na+通道、Ca2+通道、K+通道和Cl-通道等。
突触功能的可塑性是学习记忆的神经基础，海马突触效应的长时程增强(LTP)是指用高频电脉冲对传入纤维进行短暂刺激引起该神经通路上突触传递效能明显增强，且这一效应在停止刺激后可维持较长时间，国内已建立三种类型的LTP测定技术：一是从成年哺乳动物脑区制备厚约100-700μm，能在体外存活数小时的海马薄片，其神经环路较完整，可研究原有神经环路不同神经元间的相互作用，脑片排除了血脑屏障，可在解剖镜直视下将电极插到特定部位，不需立体定位仪；二是在麻醉情况下将刺激和记录电极借助立体定位仪插入海马特定部位记录群峰电位(PS)和LTP；三是预先在大鼠脑内埋藏电极，其后，在动物清醒情况下观察不同途径给药对LTP的影响。目前，研究药物对学习记忆的影响，往往把行为试验和LTP试验结合起来，这样更有助于对药物的作用做出确切评价。, http://www.100md.com(张均田)