我国神经药理学研究的主要进展(下)(5)
P—糖蛋白(P—glycoprotein, P-8p)系一药耐药性基因表达的、分子量为140-170kD的跨膜蛋白，为一ATP依赖性的药物外排泵。近年发现P-8p存在于血脑屏障即脑毛细血管内皮细胞上。已知许多药物长期应用可诱导P-8p过度表达，致产生耐药。目前科学家正致力于寻找P-8p抑制剂，以提高药物对BBB的透过率，这是一个值得研究的方向。
4.干细胞研究 干细胞是一种未分化、具有自我复制能力并可分化为一种以上的功能细胞。根据干细胞分化潜能的大小，分为全能干细胞(受精卵)、胚胎干细胞和多能干细胞。后者再分为神经干细胞、血液干细胞和皮肤干细胞等。传统观点认为，神经细胞是一种终末细胞，缺乏再生能力。创伤和神经退行性疾病引起的神经元丢失是一个不可逆的过程。现已证实，神经干细胞不仅存在于胚胎神经系统，也存在于成年脑的海马、纹状体、室下核等部位。胚胎或成年脑神经干细胞都已成功分离，可在体外培养、扩增和传代，也可将外源性即早癌基因导入神经干细胞，建立永生化的干细胞系。利用干细胞治疗神经退行性疾病途径有以下几种：(1)从人胚脑分离出神经干细胞，在体外培养，扩增后，植入中枢神经系统。(2)在体外培养中加入生长因子功细胞因子使之定向分化成DA或Ach前体细胞以治疗帕金森病或老年痴呆。(3)向脑室内注射某些生长因子，促进内源性神经干细胞的增殖和分化。
, 百拇医药
5.基因理论研究 迄今，早老性痴呆(AD)研究的主要进展是发现了AD的β—淀粉样蛋白(amyloidβ-protein, Aβ)和tau蛋白，它们分别与老年斑(senile plaque, SP)和神经纤维缠结(neurofibrillary tangle, NFT)相联系。Aβ由其前体APP分解而来，原是可溶的，由于自由基和过氧化损害的参与，Aβ变为不可溶性纤维状物质在细胞外沉积下来，就会产生细胞毒性。如何减少Aβ的形成和积聚是值得研究的，Aβ的转运障碍是否可形成NFT也是一个有意义的课题。Tau蛋白在神经元内为何被超磷酸化？为何蛋白磷脂酶降低不明显的情况下不能脱磷酸还有待深入研究。
随着年龄的增长，人体逐渐出现钙自体平衡失调和自由基过量生成，这一变化被认为是老化的动因之一。对老化和早老性痴呆症的研究发展，在含有神经纤维缠结的脑细胞及来源于早老性痴呆病人的成纤维细胞均见到钙的堆积。胞内钙过高能造成频率电位(FP)受损及影响LTP的形成等种种电重量异常。细胞内许多生理生化反应均为钙依赖性的，胞内钙超载会使生理生化反应超常运转，耗竭ATP，产生自由基，以至引起细胞损伤直至细胞死亡。为进一步阐明钙自体平衡失调与脑老化及老年痴呆的关系，有必要利用老年鼠及痴呆模型观察增龄对大鼠细胞内游离钙水平、自由基生成、兴奋性氨基酸含量、NO及NOS活性的影响。再如对引起钙超载的可能途径进行研究，如钙内流或内钙释放的增加，钙外排及钙没收机制减弱，钙缓冲系统的失活以及神经膜上钙受体的确认，等等。
, 百拇医药
神经可塑性的调节被认为是学习记忆活动的基本神经生理学机制。神经可塑性涉及突触功能(如LTP)、神经递质、受体密度、突触重塑等。今后值得围绕LTP的测定探索研究：(1)LTP与动物行为(学习记忆)改变的关系；(2)蛋白激酶(蛋白磷酸化)和蛋白磷酸酶(蛋白脱磷酸化)在LTP诱导与维持中的调控作用；(3)逆行性信使NO、CO、H2S在LTP形成中的调节作用。
6.新技术方法研究 神经药理学研究必须把宏观(行为学)和微观(分子生物学)研究结合起来，缺一不可。由于国内已自制出国际上常用的所有实验仪器且已能操作、记录自动化，今后拟重点研究建立多种原因引起的衰老和痴呆动物模型，如APP转基因或APP、PS转基因鼠，基因突变型快速老化小鼠，慢性应激致老化鼠，手术或化学性胆碱神经损毁鼠等。除从行为学上观察记忆功能的改变外，也要观察生化、形态和分子水平的变化，以获得更多的信息。
在分子生物学方面，抗体技术、反义技术应予重视。研究者可制成抗体或设计合成特异的探针直接注入脑室或脑内特异部位以阻断功能蛋白质的表达。转基因动物技术可在整体水平、组织水平、染色体及基因水平上进行，结合药理工作需要，可建立转基因动物的病理模型观察基因在疾病发生中的作用，也可把缺失的正常基因导入因缺乏该基因的动物受精囊进行基因治疗。
, http://www.100md.com
基因敲除(gene knock-out)术是新近发展起来的一种新技术，现在认为细胞因子、基因等种类繁多，彼此联系成“网”，给判断某种基因所起的确切作用带来困难，利用该技术，可培养出缺失某基因的动物，有助于科学家解决许多问题。
仪器分析、光谱技术已越来越多地用于生物学研究，特别是高效液相色谱(HPLC)、毛细管电泳、气相—质谱—质谱(GC-MX-MS)和核磁共振谱(NMR)在神经药理学研究中的应用前景宽广。HPLC与电化学检测器联用，可同时分析测定生物样品中的NE、DA、5-HT及其代谢产物，HPLC-ECD加上衍生化酶柱可同时测定乙酰胆碱和胆碱。用HPLC-ECD还可测定自由基。利用NMR可观测药物与大分子(蛋白质、酶、受体)的相互作用引起双方构象或动态的变化，观测药物与磷脂、生物膜结构与功能的关系，在活体组织直接观测磷酸肌酸、ATP和无机磷的含量。GC或HPLC与MS联用，具有高分离效率、高灵敏度和测定药物、毒物种类广泛等优点。也可采用HPLC或毛细管电泳仪器观测细胞膜的蛋白质、脂质含量。, 百拇医药(张均田)
4.干细胞研究 干细胞是一种未分化、具有自我复制能力并可分化为一种以上的功能细胞。根据干细胞分化潜能的大小，分为全能干细胞(受精卵)、胚胎干细胞和多能干细胞。后者再分为神经干细胞、血液干细胞和皮肤干细胞等。传统观点认为，神经细胞是一种终末细胞，缺乏再生能力。创伤和神经退行性疾病引起的神经元丢失是一个不可逆的过程。现已证实，神经干细胞不仅存在于胚胎神经系统，也存在于成年脑的海马、纹状体、室下核等部位。胚胎或成年脑神经干细胞都已成功分离，可在体外培养、扩增和传代，也可将外源性即早癌基因导入神经干细胞，建立永生化的干细胞系。利用干细胞治疗神经退行性疾病途径有以下几种：(1)从人胚脑分离出神经干细胞，在体外培养，扩增后，植入中枢神经系统。(2)在体外培养中加入生长因子功细胞因子使之定向分化成DA或Ach前体细胞以治疗帕金森病或老年痴呆。(3)向脑室内注射某些生长因子，促进内源性神经干细胞的增殖和分化。
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5.基因理论研究 迄今，早老性痴呆(AD)研究的主要进展是发现了AD的β—淀粉样蛋白(amyloidβ-protein, Aβ)和tau蛋白，它们分别与老年斑(senile plaque, SP)和神经纤维缠结(neurofibrillary tangle, NFT)相联系。Aβ由其前体APP分解而来，原是可溶的，由于自由基和过氧化损害的参与，Aβ变为不可溶性纤维状物质在细胞外沉积下来，就会产生细胞毒性。如何减少Aβ的形成和积聚是值得研究的，Aβ的转运障碍是否可形成NFT也是一个有意义的课题。Tau蛋白在神经元内为何被超磷酸化？为何蛋白磷脂酶降低不明显的情况下不能脱磷酸还有待深入研究。
随着年龄的增长，人体逐渐出现钙自体平衡失调和自由基过量生成，这一变化被认为是老化的动因之一。对老化和早老性痴呆症的研究发展，在含有神经纤维缠结的脑细胞及来源于早老性痴呆病人的成纤维细胞均见到钙的堆积。胞内钙过高能造成频率电位(FP)受损及影响LTP的形成等种种电重量异常。细胞内许多生理生化反应均为钙依赖性的，胞内钙超载会使生理生化反应超常运转，耗竭ATP，产生自由基，以至引起细胞损伤直至细胞死亡。为进一步阐明钙自体平衡失调与脑老化及老年痴呆的关系，有必要利用老年鼠及痴呆模型观察增龄对大鼠细胞内游离钙水平、自由基生成、兴奋性氨基酸含量、NO及NOS活性的影响。再如对引起钙超载的可能途径进行研究，如钙内流或内钙释放的增加，钙外排及钙没收机制减弱，钙缓冲系统的失活以及神经膜上钙受体的确认，等等。
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神经可塑性的调节被认为是学习记忆活动的基本神经生理学机制。神经可塑性涉及突触功能(如LTP)、神经递质、受体密度、突触重塑等。今后值得围绕LTP的测定探索研究：(1)LTP与动物行为(学习记忆)改变的关系；(2)蛋白激酶(蛋白磷酸化)和蛋白磷酸酶(蛋白脱磷酸化)在LTP诱导与维持中的调控作用；(3)逆行性信使NO、CO、H2S在LTP形成中的调节作用。
6.新技术方法研究 神经药理学研究必须把宏观(行为学)和微观(分子生物学)研究结合起来，缺一不可。由于国内已自制出国际上常用的所有实验仪器且已能操作、记录自动化，今后拟重点研究建立多种原因引起的衰老和痴呆动物模型，如APP转基因或APP、PS转基因鼠，基因突变型快速老化小鼠，慢性应激致老化鼠，手术或化学性胆碱神经损毁鼠等。除从行为学上观察记忆功能的改变外，也要观察生化、形态和分子水平的变化，以获得更多的信息。
在分子生物学方面，抗体技术、反义技术应予重视。研究者可制成抗体或设计合成特异的探针直接注入脑室或脑内特异部位以阻断功能蛋白质的表达。转基因动物技术可在整体水平、组织水平、染色体及基因水平上进行，结合药理工作需要，可建立转基因动物的病理模型观察基因在疾病发生中的作用，也可把缺失的正常基因导入因缺乏该基因的动物受精囊进行基因治疗。
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基因敲除(gene knock-out)术是新近发展起来的一种新技术，现在认为细胞因子、基因等种类繁多，彼此联系成“网”，给判断某种基因所起的确切作用带来困难，利用该技术，可培养出缺失某基因的动物，有助于科学家解决许多问题。
仪器分析、光谱技术已越来越多地用于生物学研究，特别是高效液相色谱(HPLC)、毛细管电泳、气相—质谱—质谱(GC-MX-MS)和核磁共振谱(NMR)在神经药理学研究中的应用前景宽广。HPLC与电化学检测器联用，可同时分析测定生物样品中的NE、DA、5-HT及其代谢产物，HPLC-ECD加上衍生化酶柱可同时测定乙酰胆碱和胆碱。用HPLC-ECD还可测定自由基。利用NMR可观测药物与大分子(蛋白质、酶、受体)的相互作用引起双方构象或动态的变化，观测药物与磷脂、生物膜结构与功能的关系，在活体组织直接观测磷酸肌酸、ATP和无机磷的含量。GC或HPLC与MS联用，具有高分离效率、高灵敏度和测定药物、毒物种类广泛等优点。也可采用HPLC或毛细管电泳仪器观测细胞膜的蛋白质、脂质含量。, 百拇医药(张均田)