流感病毒的实验室快速诊断方法(上)(4)
(四)病毒感染
将已成片的细胞弃生长液，用Hank’s液洗2遍，将残余的牛血清洗净，因牛血清中含有流感病毒的非特异性抑制素，会影响流感病毒的复制。感染分离病毒标本，置33—35℃吸附1—2h，倒掉感染液，再用Hank’s洗1—2遍，加入维持液，其量相当于或两倍于生长液。置33—35℃孵育。当进行病毒传代或滴定时，可不必吸附，将病毒用维持液稀释后直接加入。
流感病毒引起受感染细胞病理变化(CPE)出现时间随感染病毒的型别、甚至毒株的差异以及感染量的大小而异。进行病毒分离时，一般7天之内还不出现CPE，多半为阴性标本。进行病毒传代和滴定时，一般在72h之内会出现CPE。大多数病毒株的复制高峰约在感染后72h。当CPE出现十十十一十十十十号时进行收获，收获之前将细胞冻融1—2次，可提高收获标本的病毒滴度。收获的标本需冰冻保存，最好置一70℃以下并与残余细胞一齐保存，因维持液中只含有胰酶而不含血清，在4℃，尤其室温保存时能很快使病毒滴度下降或丢失。
流感病毒在细胞中连续传代，很难将其滴度提高，常常反而使滴度下降。维持液中红细胞凝集活性测定：用无菌的毛细吸管取3—4滴维持液，置大孔塑料板中，然后加人1%豚鼠或人或鸡的红细胞，轻轻摇匀，置室温或4℃30一60min后观察结果。红细胞吸附测定见第三章。
第三章 红细胞凝集及凝集抑制试验
鸡胚接种法和组织培养法所获得的病毒材料最终都要由红细胞凝集及凝集抑制试验来判断、鉴定结果，分出流感病毒的型和亚型。
一、概况
流感病毒粒表面的血凝素(HA)蛋白，含有识别和结合宿主细胞表面受体的结构。流感病毒的受体为含唾液酸的糖蛋白或脂蛋白，许多哺乳类动物和禽的红细胞表面均含有此两种成分，因此，它们均能被流感病毒所识别和结合，并发生红细胞凝集现象。过去一般认为流感病毒只有HA蛋白才具有凝集红细胞的能力，但近来发现N9亚型流感病毒也具有凝集红细胞的能力，同时还发现N9蛋白分子上含有与HA相似的识别和结合红细胞表面受体的结构。
流感病毒虽然能凝集多种哺乳类和禽类的红细胞，但应用最广泛的为脉鼠、鸡和人“O”型的红细胞。
二、红细胞凝集试验
(一)材料
1.0.85%NaCl。
2.大孔或小孔塑料板。
3.10m1和1m1吸管或稀释棒。
4.1%红细胞悬液。
以鸡红细胞为例来加以介绍。于10或20m1注射器中先吸入约3m1阿氏液(A1sever’s Solution)，然后从鸡翅静脉或心脏采集，用生理盐水洗涤3次，头两次1500r/min离心5min，最后1次同速离心10min，弃上清，用无菌生理盐水配成1%悬液，置4℃待用。一般置4℃能保存7天左右，一旦发生溶血应弃掉。, 百拇医药(丁丽新)
将已成片的细胞弃生长液，用Hank’s液洗2遍，将残余的牛血清洗净，因牛血清中含有流感病毒的非特异性抑制素，会影响流感病毒的复制。感染分离病毒标本，置33—35℃吸附1—2h，倒掉感染液，再用Hank’s洗1—2遍，加入维持液，其量相当于或两倍于生长液。置33—35℃孵育。当进行病毒传代或滴定时，可不必吸附，将病毒用维持液稀释后直接加入。
流感病毒引起受感染细胞病理变化(CPE)出现时间随感染病毒的型别、甚至毒株的差异以及感染量的大小而异。进行病毒分离时，一般7天之内还不出现CPE，多半为阴性标本。进行病毒传代和滴定时，一般在72h之内会出现CPE。大多数病毒株的复制高峰约在感染后72h。当CPE出现十十十一十十十十号时进行收获，收获之前将细胞冻融1—2次，可提高收获标本的病毒滴度。收获的标本需冰冻保存，最好置一70℃以下并与残余细胞一齐保存，因维持液中只含有胰酶而不含血清，在4℃，尤其室温保存时能很快使病毒滴度下降或丢失。
流感病毒在细胞中连续传代，很难将其滴度提高，常常反而使滴度下降。维持液中红细胞凝集活性测定：用无菌的毛细吸管取3—4滴维持液，置大孔塑料板中，然后加人1%豚鼠或人或鸡的红细胞，轻轻摇匀，置室温或4℃30一60min后观察结果。红细胞吸附测定见第三章。
第三章 红细胞凝集及凝集抑制试验
鸡胚接种法和组织培养法所获得的病毒材料最终都要由红细胞凝集及凝集抑制试验来判断、鉴定结果，分出流感病毒的型和亚型。
一、概况
流感病毒粒表面的血凝素(HA)蛋白，含有识别和结合宿主细胞表面受体的结构。流感病毒的受体为含唾液酸的糖蛋白或脂蛋白，许多哺乳类动物和禽的红细胞表面均含有此两种成分，因此，它们均能被流感病毒所识别和结合，并发生红细胞凝集现象。过去一般认为流感病毒只有HA蛋白才具有凝集红细胞的能力，但近来发现N9亚型流感病毒也具有凝集红细胞的能力，同时还发现N9蛋白分子上含有与HA相似的识别和结合红细胞表面受体的结构。
流感病毒虽然能凝集多种哺乳类和禽类的红细胞，但应用最广泛的为脉鼠、鸡和人“O”型的红细胞。
二、红细胞凝集试验
(一)材料
1.0.85%NaCl。
2.大孔或小孔塑料板。
3.10m1和1m1吸管或稀释棒。
4.1%红细胞悬液。
以鸡红细胞为例来加以介绍。于10或20m1注射器中先吸入约3m1阿氏液(A1sever’s Solution)，然后从鸡翅静脉或心脏采集，用生理盐水洗涤3次，头两次1500r/min离心5min，最后1次同速离心10min，弃上清，用无菌生理盐水配成1%悬液，置4℃待用。一般置4℃能保存7天左右，一旦发生溶血应弃掉。, 百拇医药(丁丽新)