流感病毒的实验室快速诊断方法(上)(6)
红细胞凝集抑制试验简称血抑测定(HI test)，在流感病毒研究中分为常量和微量法，其区别见血凝测定。国内在两法基础上又分为常规法(稀释好血清加入病毒后，立即加入1%的红细胞)；半加敏法(病毒加入稀释血清中，置室温结合66min，然后加入红细胞)；加敏法(病毒经乙醚裂解，同时抗原与血清在室温结合2h后，再加入红细胞)。
1.血清中非特异性抑制素的去除
所有血清在测定之前必须去除非特异性抑制素。常用的处理方法有：受体破坏酶(RDE)，统称霍乱滤液处理法；过碘酸钾处理法等。现在以受体破坏酶(RDE)霍乱滤液处理法为例介绍：
l.容量血清，加4容量RDE，37℃水浴16—18h，然后，置56℃水浴50min(以破坏残余的RDE活性)；置4℃保存待用，千万别冻存。经此法处理后，血清稀释度已为1：5。经此法处理的人、鸡和山羊血清对甲、乙型流感病毒的非特异性抑制素均可完全去除，而对大白鼠、脉鼠、部分兔，有蹄类动物血清中的非特异性抑制素无法去除干净。RDE处理对特异性抗体无影响。但有时经处理的血清对测定的红细胞有特异性凝集。如发现时应在处理后血清中加入终浓度为20%的浓的测定红细胞，摇匀，置室温60min或4℃过夜，l 000r/min离心5min，收存上清。人血清抗体测定时均要经此处理。经此处理的流感各型和亚型的标准血清可用来鉴定鸡胚接种法和组织培养法所获得的病毒材料的型和亚型。
2.四个血凝单位抗原的制备
将鸡胚接种法和组织培养法所获得的病毒材料经血凝实验测定其血凝滴度，按四个血凝单位计算方法进行计算，配制成四个血凝单位的抗原，置冰中当天使用。如过夜第二天还需进行复核测定。正确结果应该是：第一孔++++(含两个血凝单位)，第二孔++(含一个血凝单位)，第二孔+ —(含半个血凝单位)。
3.血抑测定
以微量法为例：取一微量血凝板，各孔加50ul生理盐水，将处理好的各型和亚型的流感标准血清50ul加入微量血凝板的第一排，同时作好标记，用微量加样器对流感标准血清进行倍比稀释，然后各孔加入50ul配制好的待测标本四个血凝单位的抗原，摇匀，静置60min，每孔加入50ul 1%红细胞悬液，摇匀，静置30—60min观察结果。
4.结果观察
血凝的记录与血凝测定法相同，以能完全抑制红细胞凝集的最高血清稀释的倒数为血清抗体效价。由此可鉴定待测标本的型和亚型。, http://www.100md.com(丁丽新)
1.血清中非特异性抑制素的去除
所有血清在测定之前必须去除非特异性抑制素。常用的处理方法有：受体破坏酶(RDE)，统称霍乱滤液处理法；过碘酸钾处理法等。现在以受体破坏酶(RDE)霍乱滤液处理法为例介绍：
l.容量血清，加4容量RDE，37℃水浴16—18h，然后，置56℃水浴50min(以破坏残余的RDE活性)；置4℃保存待用，千万别冻存。经此法处理后，血清稀释度已为1：5。经此法处理的人、鸡和山羊血清对甲、乙型流感病毒的非特异性抑制素均可完全去除，而对大白鼠、脉鼠、部分兔，有蹄类动物血清中的非特异性抑制素无法去除干净。RDE处理对特异性抗体无影响。但有时经处理的血清对测定的红细胞有特异性凝集。如发现时应在处理后血清中加入终浓度为20%的浓的测定红细胞，摇匀，置室温60min或4℃过夜，l 000r/min离心5min，收存上清。人血清抗体测定时均要经此处理。经此处理的流感各型和亚型的标准血清可用来鉴定鸡胚接种法和组织培养法所获得的病毒材料的型和亚型。
2.四个血凝单位抗原的制备
将鸡胚接种法和组织培养法所获得的病毒材料经血凝实验测定其血凝滴度，按四个血凝单位计算方法进行计算，配制成四个血凝单位的抗原，置冰中当天使用。如过夜第二天还需进行复核测定。正确结果应该是：第一孔++++(含两个血凝单位)，第二孔++(含一个血凝单位)，第二孔+ —(含半个血凝单位)。
3.血抑测定
以微量法为例：取一微量血凝板，各孔加50ul生理盐水，将处理好的各型和亚型的流感标准血清50ul加入微量血凝板的第一排，同时作好标记，用微量加样器对流感标准血清进行倍比稀释，然后各孔加入50ul配制好的待测标本四个血凝单位的抗原，摇匀，静置60min，每孔加入50ul 1%红细胞悬液，摇匀，静置30—60min观察结果。
4.结果观察
血凝的记录与血凝测定法相同，以能完全抑制红细胞凝集的最高血清稀释的倒数为血清抗体效价。由此可鉴定待测标本的型和亚型。, http://www.100md.com(丁丽新)