流感病毒的实验室快速诊断方法(下)(5)
3.以吐温-20/ PBS缓冲液洗两次，晾干。
4.每孔加1滴荧光素标记的羊抗鼠的IgG，37℃孵育30分钟。
5.以吐温-20/ PBS缓冲液洗两次，晾干。
6.加1—2滴封片液及盖玻片封片。
(四)观察结果
在紫外光显微镜下放大100—200倍进行观察。见到苹果绿色为阳性，染色明亮，细胞核染色较胞浆稍强；阴性标本染色暗淡，无绿色荧光。
第三章 应用Directigen试剂盒快速诊断甲型流感病毒感染
一、概况
Directigen甲型流感病毒快速诊断试剂盒是Becton Dickson公司生产的快速诊断试剂盒之一。它包括了该实验的所有用品，整个实验可在15min内完成。可直接用从病人采集的咽漱液或咽拭子浸出液进行检测。该实验是以免疫酶染法为基础而设计的。首先用去垢剂混合物提取各种临床标本中的病毒抗原，再将病毒抗原滴加于具有吸附能力的检测膜上。然后加入碱性磷酸酶标记的抗甲型流感病毒核蛋白单克隆抗体，待抗原与抗体充分作用后加入底物显色。该法敏感、快速。但无法区别不同亚型流感病毒感染，也无法诊断乙型流感病毒的感染，同时价格高。
二、材料
1.Directigen甲型流感病毒快速诊断试剂盒(包括三角型检测板，加液管及各种试剂)。
2.200μl待检标品。
3.200μl细胞培养液。
三、实验程序
1.将加样控制器嵌入检测板。
2.125μl待检样品和细胞培养液分别加入两个加液管。
3.每个加液管内加8滴(约0.4ml)试剂A，以提取抗原。加入试剂时应充分混合样品。
4.将加液管内所有的混合物逐滴加入检测板中央的检测孔(每个加液器内的样品加一个检测板，注意避免气泡)。
5.快速滴加试剂盒中试剂l，直至加满检测孔(冲洗)。待所有液体被吸收后，去掉检测板上的加样控制器。
6.加4滴试剂盒中试剂2(封闭吸附膜以防抗体的非特异性吸附)。
7.待所有液体被吸收后，加4滴试剂盒中试剂3(酶联抗体)。
8.待所有液体被吸收后，置室温2min。
9.快速滴加试剂盒中试剂4，直至加满检测孔(冲洗)。
10.待所有液体被吸收后，加4滴试剂盒中试剂5(冲洗)。
11.待所有液体被吸收后，加4滴试剂盒中试剂6(底物1)。
12.孔内出现淡黄色，加4滴试剂盒中试剂7(底物2)。
13.置室温5—30min，加4滴试剂盒中试剂8，终止反应(柠檬酸)。
14.结果观察与分析：
阳性：检测板中央可见一紫红色三角形。
阴性：检测板中央可见一紫红色圆点。
可疑：检测板中央既无紫红色三角形又无紫红色圆点。此时，实验需重复。, http://www.100md.com(丁丽新)
4.每孔加1滴荧光素标记的羊抗鼠的IgG，37℃孵育30分钟。
5.以吐温-20/ PBS缓冲液洗两次，晾干。
6.加1—2滴封片液及盖玻片封片。
(四)观察结果
在紫外光显微镜下放大100—200倍进行观察。见到苹果绿色为阳性，染色明亮，细胞核染色较胞浆稍强；阴性标本染色暗淡，无绿色荧光。
第三章 应用Directigen试剂盒快速诊断甲型流感病毒感染
一、概况
Directigen甲型流感病毒快速诊断试剂盒是Becton Dickson公司生产的快速诊断试剂盒之一。它包括了该实验的所有用品，整个实验可在15min内完成。可直接用从病人采集的咽漱液或咽拭子浸出液进行检测。该实验是以免疫酶染法为基础而设计的。首先用去垢剂混合物提取各种临床标本中的病毒抗原，再将病毒抗原滴加于具有吸附能力的检测膜上。然后加入碱性磷酸酶标记的抗甲型流感病毒核蛋白单克隆抗体，待抗原与抗体充分作用后加入底物显色。该法敏感、快速。但无法区别不同亚型流感病毒感染，也无法诊断乙型流感病毒的感染，同时价格高。
二、材料
1.Directigen甲型流感病毒快速诊断试剂盒(包括三角型检测板，加液管及各种试剂)。
2.200μl待检标品。
3.200μl细胞培养液。
三、实验程序
1.将加样控制器嵌入检测板。
2.125μl待检样品和细胞培养液分别加入两个加液管。
3.每个加液管内加8滴(约0.4ml)试剂A，以提取抗原。加入试剂时应充分混合样品。
4.将加液管内所有的混合物逐滴加入检测板中央的检测孔(每个加液器内的样品加一个检测板，注意避免气泡)。
5.快速滴加试剂盒中试剂l，直至加满检测孔(冲洗)。待所有液体被吸收后，去掉检测板上的加样控制器。
6.加4滴试剂盒中试剂2(封闭吸附膜以防抗体的非特异性吸附)。
7.待所有液体被吸收后，加4滴试剂盒中试剂3(酶联抗体)。
8.待所有液体被吸收后，置室温2min。
9.快速滴加试剂盒中试剂4，直至加满检测孔(冲洗)。
10.待所有液体被吸收后，加4滴试剂盒中试剂5(冲洗)。
11.待所有液体被吸收后，加4滴试剂盒中试剂6(底物1)。
12.孔内出现淡黄色，加4滴试剂盒中试剂7(底物2)。
13.置室温5—30min，加4滴试剂盒中试剂8，终止反应(柠檬酸)。
14.结果观察与分析：
阳性：检测板中央可见一紫红色三角形。
阴性：检测板中央可见一紫红色圆点。
可疑：检测板中央既无紫红色三角形又无紫红色圆点。此时，实验需重复。, http://www.100md.com(丁丽新)