99mTc-HMPAO-WBC实验性心肌炎显像的研究(1)
用BALB/c小鼠接种柯萨奇B3m病毒(CVB3m)，以制备病毒性心肌炎动物模型。将动物模型分为苦参总碱中抗柯萨奇B病毒有效成分注射液(简称抗柯注射液)治疗组及生理盐水对照组，行99mTc-6-甲基丙二胺肟(HMPAO)-WBC心肌显像，并作组织病理学与电镜检查对比，以评价抗柯注射液对抗CVB的治疗效果。
一、材料和方法
1 动物模型的制作[1]：取8周龄体重18—20g的BALB/c雄性小鼠61只、随机分成3组：正常组16只，抗柯注射液治疗组21只，生理盐水对照组(简称对照组)24只。正常组：每只小鼠腹腔内注射无菌生理盐水0.8ml。治疗组及对照组每只小鼠腹腔内注射10-6CVB3m悬液半数组织培养感染量(TCID50)0.8ml，2小时后治疗组小鼠腹腔内注射抗柯注射液0.2m1，每日2次(40mg·kg-1·d-1)；对照组及正常组给予0.9%生理盐水0.2ml,每日2次，连续5天。
, 百拇医药
2 淋巴细胞分离[2,3]：正常组颈椎脱位致死，开胸取血，肝素抗凝，用RPMI-1640液稀释1倍，再用相对密度(旧称比重)为1.088的淋巴细胞分离液分离淋巴细胞，2000r/min离心20分钟。取小鼠脾脏研碎，稀释至16ml左右，用上述方法分离淋巴细胞。将全血中分离的淋巴细胞与脾脏内的淋巴细胞混匀，用RPMI-1640细胞培养液洗涤2次，淋巴细胞数为2.1×107.
3 99mTc-HMPAO的标记[3]: 99mTc 淋洗液1850MBq，体积<5ml，注入含1mgHMPAO冻干品安瓶中振荡。测定标记率为89%。
4.淋巴细胞的标记：在分离的淋巴细胞试管中(约2ml)加入3ml99mTc-HMPAO (740MBq)，室温下每隔5分钟振摇1次，约30分钟。1000r/min离心5分钟，弃上清液，用生理盐水洗涤2次，并用生理盐水还原至5ml，再测放射性为74MBq，标记率为10%。
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5 .显像方法：鼠静脉注射99mTc-HMPAO-WBC悬液0.4ml(总量为5ml,细胞数2.1×107,放射性活度为74MBq)，3小时后将鼠颈椎脱位致死,分别取心、肝、肺等脏器，称重，测定每分钟计数后显像(美国ADAC公司GenesysSPECT仪)。
6.取鼠部分心肌，分别置2%戊二醛磷酸盐缓冲液及10%中性福尔马林缓冲液内，作病理切片。
二、结果与讨论
1.99mTc-HMPAO-WBC 在BALB/c小鼠体内的分布。注射99mTc-HMPAO-WBC3小时后，核素主要分布在肝、脾、肾，其次为肺与骨路，心脏和脑的放射性最低。
2. 心肌显像。99mTc-HMPAO-WBC经小鼠尾静脉注射后3小时，注射10-6TCID50CVB3m病毒0.8ml的BALB/c小鼠心肌内有明显放射性浓聚，而正常组小鼠的心肌放射性较稀疏，2组肺和肝均可见放射性浓聚。抗柯注射液治疗组小鼠心肌内放射性聚集高于正常组。对照组小鼠心肌内放射性聚集程度明显高于正常组及抗柯注射液治疗组。
3.组织病理学检查。①光镜检查：抗柯注射液治疗组于接种病毒后5天，所取心肌组织基本正常；对照组心肌则呈多灶性坏死，心肌细胞崩解呈碎片，液性坏死，单个核细胞浸润，周边心肌呈凝固性坏死，血管内皮呈隆起增生。②心肌组织超微结构观察：抗柯注射液治疗组小鼠的心肌纤维、线粒体及心肌细胞核均未见明显改变，而对照组小鼠心肌纤维排列紊乱，部分溶解，线粒体肿胀，部分线粒体嵴断裂及空泡变性.脂肪滴增多，心肌细胞核肿胀，核固缩，心肌纤维内可见大小不一的钙化灶。, 百拇医药(陈曙霞 袁济民 谢龙山 梅尚文 刘晶星)
一、材料和方法
1 动物模型的制作[1]：取8周龄体重18—20g的BALB/c雄性小鼠61只、随机分成3组：正常组16只，抗柯注射液治疗组21只，生理盐水对照组(简称对照组)24只。正常组：每只小鼠腹腔内注射无菌生理盐水0.8ml。治疗组及对照组每只小鼠腹腔内注射10-6CVB3m悬液半数组织培养感染量(TCID50)0.8ml，2小时后治疗组小鼠腹腔内注射抗柯注射液0.2m1，每日2次(40mg·kg-1·d-1)；对照组及正常组给予0.9%生理盐水0.2ml,每日2次，连续5天。
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2 淋巴细胞分离[2,3]：正常组颈椎脱位致死，开胸取血，肝素抗凝，用RPMI-1640液稀释1倍，再用相对密度(旧称比重)为1.088的淋巴细胞分离液分离淋巴细胞，2000r/min离心20分钟。取小鼠脾脏研碎，稀释至16ml左右，用上述方法分离淋巴细胞。将全血中分离的淋巴细胞与脾脏内的淋巴细胞混匀，用RPMI-1640细胞培养液洗涤2次，淋巴细胞数为2.1×107.
3 99mTc-HMPAO的标记[3]: 99mTc 淋洗液1850MBq，体积<5ml，注入含1mgHMPAO冻干品安瓶中振荡。测定标记率为89%。
4.淋巴细胞的标记：在分离的淋巴细胞试管中(约2ml)加入3ml99mTc-HMPAO (740MBq)，室温下每隔5分钟振摇1次，约30分钟。1000r/min离心5分钟，弃上清液，用生理盐水洗涤2次，并用生理盐水还原至5ml，再测放射性为74MBq，标记率为10%。
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5 .显像方法：鼠静脉注射99mTc-HMPAO-WBC悬液0.4ml(总量为5ml,细胞数2.1×107,放射性活度为74MBq)，3小时后将鼠颈椎脱位致死,分别取心、肝、肺等脏器，称重，测定每分钟计数后显像(美国ADAC公司GenesysSPECT仪)。
6.取鼠部分心肌，分别置2%戊二醛磷酸盐缓冲液及10%中性福尔马林缓冲液内，作病理切片。
二、结果与讨论
1.99mTc-HMPAO-WBC 在BALB/c小鼠体内的分布。注射99mTc-HMPAO-WBC3小时后，核素主要分布在肝、脾、肾，其次为肺与骨路，心脏和脑的放射性最低。
2. 心肌显像。99mTc-HMPAO-WBC经小鼠尾静脉注射后3小时，注射10-6TCID50CVB3m病毒0.8ml的BALB/c小鼠心肌内有明显放射性浓聚，而正常组小鼠的心肌放射性较稀疏，2组肺和肝均可见放射性浓聚。抗柯注射液治疗组小鼠心肌内放射性聚集高于正常组。对照组小鼠心肌内放射性聚集程度明显高于正常组及抗柯注射液治疗组。
3.组织病理学检查。①光镜检查：抗柯注射液治疗组于接种病毒后5天，所取心肌组织基本正常；对照组心肌则呈多灶性坏死，心肌细胞崩解呈碎片，液性坏死，单个核细胞浸润，周边心肌呈凝固性坏死，血管内皮呈隆起增生。②心肌组织超微结构观察：抗柯注射液治疗组小鼠的心肌纤维、线粒体及心肌细胞核均未见明显改变，而对照组小鼠心肌纤维排列紊乱，部分溶解，线粒体肿胀，部分线粒体嵴断裂及空泡变性.脂肪滴增多，心肌细胞核肿胀，核固缩，心肌纤维内可见大小不一的钙化灶。, 百拇医药(陈曙霞 袁济民 谢龙山 梅尚文 刘晶星)