黄芪总提取物抗衰老作用的实验研究(2)
1.5.2 肝、脑细胞中线粒体的制备[7]眼球放血处死小鼠，立即取出肝脏和脑组织，分别用冰冷的生理盐水制成10%匀浆(W/V)，4℃离心，(3500rmin-1，10min),取上清液，再4℃离心(11812r.min-1，15min),沉淀为线粒体。将线粒体悬于生理盐水中，-20℃贮存待测。一部分线粒体悬液经CPS-1A超声波粉碎机粉碎，60μA，5s/次，间隙10s，反复4次使线粒体微粒破碎，4℃离心(2000rmin-1，10min),取上清液供酶活力测定。以上操作皆在4℃以下进行。另一部分线粒体悬液直接供丙二醛(MDA)与蛋白质的测定。
1.5.3 线粒体MDA含量的测定采用硫代巴比妥酸比色法[8]，根据TEP标准曲线计算MDA含量，结果以nmol.mg-1Pr表示。蛋白质含量测定采用改良Lowry氏法[9]。
1.5.4 线粒体中谷胱甘肽过氧化物酶(GSHpx)活性测定取线粒体裂解液上清0.4ml，用DTNB法检测[10]，GSHpx活力单位以μmol.min-1.mg-1Pr表示。
1.5.5 线粒体锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD)活性测定按SOD测定试剂盒说明书进行，采用黄嘌呤氧化酶法测Mn-SOD活性。其活力单位以NU(国际单位).mg-1Pr表示。
1.5.6 线粒体GSH含量测定采用DTNB比色法[11]，在412nm处测吸光度值。根据标准曲线计算GSH含量，结果以nmol.mg-1Pr表示。
1.5.7 线粒体GSSG含量测定[12]取线粒体裂解液上清1.0ml，加入0.04mol.L-1NEM水溶液0.4ml，室温放置30min后，加0.187mol.L-1NaOH溶液1.5ml，OPT溶液(1mg.ml-1)0.1ml充分混合，室温放置30min。在激发波长350nm,发射波长430nm处测荧光强度(F)值，并在标准曲线上查出相应的GSSG含量，以nmol.mg-1Pr表示。
1.6 数据处理实验数据以
±s表示，采用t检验判定。
, http://www.100md.com(雷红 王斌 李卫平 杨雁 周爱武 陈敏珠)
1.5.3 线粒体MDA含量的测定采用硫代巴比妥酸比色法[8]，根据TEP标准曲线计算MDA含量，结果以nmol.mg-1Pr表示。蛋白质含量测定采用改良Lowry氏法[9]。
1.5.4 线粒体中谷胱甘肽过氧化物酶(GSHpx)活性测定取线粒体裂解液上清0.4ml，用DTNB法检测[10]，GSHpx活力单位以μmol.min-1.mg-1Pr表示。
1.5.5 线粒体锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD)活性测定按SOD测定试剂盒说明书进行，采用黄嘌呤氧化酶法测Mn-SOD活性。其活力单位以NU(国际单位).mg-1Pr表示。
1.5.6 线粒体GSH含量测定采用DTNB比色法[11]，在412nm处测吸光度值。根据标准曲线计算GSH含量，结果以nmol.mg-1Pr表示。
1.5.7 线粒体GSSG含量测定[12]取线粒体裂解液上清1.0ml，加入0.04mol.L-1NEM水溶液0.4ml，室温放置30min后，加0.187mol.L-1NaOH溶液1.5ml，OPT溶液(1mg.ml-1)0.1ml充分混合，室温放置30min。在激发波长350nm,发射波长430nm处测荧光强度(F)值，并在标准曲线上查出相应的GSSG含量，以nmol.mg-1Pr表示。
1.6 数据处理实验数据以
±s表示，采用t检验判定。, http://www.100md.com(雷红 王斌 李卫平 杨雁 周爱武 陈敏珠)