旋毛虫p49基因的克隆、序列分析及表达

http://www.100md.com 北京热带医学研究所 北京 100050；中国科学院遗传发育生物学研究所 北京100080 温艳；甘绍伯；劳为德；高虹

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     北京热带医学研究所 北京 100050；中国科学院遗传发育生物学研究所 北京100080 温艳；甘绍伯；劳为德；高虹；张传生；刘思国

    关键词：旋毛虫；P49基因；基因克隆；表达

    摘要：目的 获得旋毛虫排泄分泌抗原(excretory antigen,ES)p49基因的克隆、测序及表达。 方法 通过RT-PCR,从旋毛虫幼虫总RNA中扩增得到特异片段,利用TA克隆将PCR产物克隆入pUC-T载体中并进行测序及同源性比较,并定向克隆到表达载体pEG-4T-3中,转化感受态细胞,诱导表达。 结果 RT-PCR扩增得到p49基因,其核苷酸序列与已发表的p49基因序列一致;BLAST分析表明其与旋毛虫p49基因、43 KDa分泌性糖蛋白同源性均为99%。经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,重组蛋白诱导表达在67 KDa处有一新蛋白带。 结论 提取旋毛虫幼虫总RNA,用RT-PCR方法克隆并表达了p49基因。

    http://www.100md.com/html/Dir/2003/10/01/49/40/82.htm

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