重组肾上腺髓质素表达载体的构建及在哺乳动物细胞中的表达
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复旦大学上海医学院生理与病理生理学系 上海200032 王小芳；邵颖；田德志；姚泰；陆利民
肾上腺髓质素|K562细胞|基因表达|脂质体
参见附件(63kb)。
复旦大学上海医学院生理与病理生理学系 上海200032 王小芳；邵颖；田德志；姚泰；陆利民
关键词：肾上腺髓质素；K562细胞；基因表达；脂质体
摘要：为探索通过体内表达肾上腺髓质素 (adrenomedullin ,AM)治疗高血压和慢性心衰的可能性 ,本实验构建了重组AM真核表达载体 ,并在无内源性AM表达的K56 2 细胞株上进行了体外表达实验。实验中采用RT PCR技术扩增AMcDNA片段 ,并将扩增的cDNA片段插入 pcDNA3 1真核表达质粒 ,构建成含AMcDNA的重组质粒 pcD NA3 1AM。用脂质体介导将该质粒转染培养的人白血病细胞K56 2 株。在转染的细胞中 ,用RT PCR检测证实有AMmRNA存在 ;用斑点免疫分析方法检测转染细胞的培养液上清 ,证实有AM多肽存在 ,表明本实验中构建的重组pcDNA3 1AM载体能够在哺乳类细胞中表达AM。
复旦大学上海医学院生理与病理生理学系 上海200032 王小芳；邵颖；田德志；姚泰；陆利民
关键词：肾上腺髓质素；K562细胞；基因表达；脂质体
摘要：为探索通过体内表达肾上腺髓质素 (adrenomedullin ,AM)治疗高血压和慢性心衰的可能性 ,本实验构建了重组AM真核表达载体 ,并在无内源性AM表达的K56 2 细胞株上进行了体外表达实验。实验中采用RT PCR技术扩增AMcDNA片段 ,并将扩增的cDNA片段插入 pcDNA3 1真核表达质粒 ,构建成含AMcDNA的重组质粒 pcD NA3 1AM。用脂质体介导将该质粒转染培养的人白血病细胞K56 2 株。在转染的细胞中 ,用RT PCR检测证实有AMmRNA存在 ;用斑点免疫分析方法检测转染细胞的培养液上清 ,证实有AM多肽存在 ,表明本实验中构建的重组pcDNA3 1AM载体能够在哺乳类细胞中表达AM。
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