卵巢癌抗独特型单链抗体的人源化——抗独特型微抗体的构建与表达
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北京大学人民医院妇科肿瘤中心 北京100044 崔恒；昌晓红；冯捷；刘蓓；曹善津
人源化|抗独特型微抗体|人IGG1|卵巢癌|重组融合基因
参见附件(73kb)。
北京大学人民医院妇科肿瘤中心 北京100044 崔恒；昌晓红；冯捷；刘蓓；曹善津
关键词：人源化；抗独特型微抗体；人IgG1；卵巢癌；重组融合基因
摘要：为了降低人抗鼠抗体反应 ,获得满意的免疫原性 ,将模拟人卵巢癌抗原的抗独特型单链抗体人源化 .采用重叠PCR和基因工程的技术 ,将 6B11ScFv基因的轻链和重链颠倒 ,成为 6B11VL VH.再与人IgG1铰链区和CH3区的基因进行融合 (VL VH CH3) ,构建抗独特型微抗体的原核表达载体 .转化E .coliBL2 1(DE3)后用IPTG诱导表达 .经SDS PAGE分离显示 ,在 5 0kD左右处有一诱导蛋白带 .不连续非变性凝胶电泳显示 ,表达产物分子量为 10 0kD左右 .采用ELISA、竞争抑制实验、West ern印迹对其进行活性测定 .结果表明 ,人源化的抗独特型微抗体具有特异性双价结合卵巢癌单克隆...
北京大学人民医院妇科肿瘤中心 北京100044 崔恒；昌晓红；冯捷；刘蓓；曹善津
关键词：人源化；抗独特型微抗体；人IgG1；卵巢癌；重组融合基因
摘要：为了降低人抗鼠抗体反应 ,获得满意的免疫原性 ,将模拟人卵巢癌抗原的抗独特型单链抗体人源化 .采用重叠PCR和基因工程的技术 ,将 6B11ScFv基因的轻链和重链颠倒 ,成为 6B11VL VH.再与人IgG1铰链区和CH3区的基因进行融合 (VL VH CH3) ,构建抗独特型微抗体的原核表达载体 .转化E .coliBL2 1(DE3)后用IPTG诱导表达 .经SDS PAGE分离显示 ,在 5 0kD左右处有一诱导蛋白带 .不连续非变性凝胶电泳显示 ,表达产物分子量为 10 0kD左右 .采用ELISA、竞争抑制实验、West ern印迹对其进行活性测定 .结果表明 ,人源化的抗独特型微抗体具有特异性双价结合卵巢癌单克隆...
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