重组端粒酶pEGFP-hTRT质粒的构建
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上海第二医科大学附属第九人民医院口腔内科口腔研究所；上海第二医科大学附属第九人民医院口腔颌面外科；上
人端粒酶逆转录酶|重组质粒|绿色荧光蛋白,重组端粒酶PEGFP-hTRT质粒的构建
参见附件(80kb)。
上海第二医科大学附属第九人民医院口腔内科口腔研究所；上海第二医科大学附属第九人民医院口腔颌面外科；上海第二医科大学组织工程研究中心上海市组织工程重点实验室 上海200011 周海文；周曾同；杨雯君；刘德莉；李卿；胡洪亮；刘伟；崔磊；曹谊林
关键词：人端粒酶逆转录酶；重组质粒；绿色荧光蛋白
摘要：目的 构建具有绿色荧光蛋白报道(GFP)基因的端粒酶真核质粒载体,为转染细胞、延长细胞寿命提供基础。 方法 酶切含人端粒酶逆转录酶(h TRT)基因的p GRN14 5质粒获取h TRT片段,插入经酶切及磷酸化处理的GFP载体p EGFP- C1,形成8.1kb质粒,经Hind 、Not 酶切电泳筛选、鉴定并测序。 结果 经酶切电泳分析得到3.4 kb及4 .7kb大小的两片段;测序结果显示接头两端序列正确。 结论 重组端粒酶p EGFP- h TRT质粒的成功构建,可用于细胞转染,对进一步研究组织工程种子细胞的衰老问题具有重要意义。
上海第二医科大学附属第九人民医院口腔内科口腔研究所；上海第二医科大学附属第九人民医院口腔颌面外科；上海第二医科大学组织工程研究中心上海市组织工程重点实验室 上海200011 周海文；周曾同；杨雯君；刘德莉；李卿；胡洪亮；刘伟；崔磊；曹谊林
关键词：人端粒酶逆转录酶；重组质粒；绿色荧光蛋白
摘要：目的 构建具有绿色荧光蛋白报道(GFP)基因的端粒酶真核质粒载体,为转染细胞、延长细胞寿命提供基础。 方法 酶切含人端粒酶逆转录酶(h TRT)基因的p GRN14 5质粒获取h TRT片段,插入经酶切及磷酸化处理的GFP载体p EGFP- C1,形成8.1kb质粒,经Hind 、Not 酶切电泳筛选、鉴定并测序。 结果 经酶切电泳分析得到3.4 kb及4 .7kb大小的两片段;测序结果显示接头两端序列正确。 结论 重组端粒酶p EGFP- h TRT质粒的成功构建,可用于细胞转染,对进一步研究组织工程种子细胞的衰老问题具有重要意义。
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