维护血管内皮功能对心脑血管疾病的重要意义——系列研究之十五(续) 通心络对大鼠脑缺血再灌注模型微血管ICAM-1和VCAM-1表达的影响
近10年来，国内外学者经对不同的动物、用不同的方法研究均证实，脑缺血再灌注后，缺血区血管内皮细胞ICAM-1和VCAM-1的表达升高，脑缺血-再灌注后血管内皮细胞ICAM-1和VCAM-1的表达有时间依赖性。Zhang等发现，大鼠ICAM-1 mRNA在缺血2 h再灌注1 h开始升高，(10～12) h达高峰，可持续(5～7) d，而ICAM-1蛋白合成在再灌注1 h开始增加，46小时达高峰，持续7 d。国内研究发现，ICAM-1蛋白表达在脑缺血2 h再灌注2 h后开始增高，再灌注48 h达高峰，ICAM-1 mRNA在脑缺血2 h再灌注2 h后开始增高，再灌注10 h达高峰6，也有学者报道脑缺血1 h再灌注3 h达到高峰7。雷万龙等8的研究显示，VCAM-1的阳性反应发生在脑缺血区的微血管，在脑缺血后1 h增多，缺血1 h再灌注16 h达到高峰，缺血再灌注早期单核/巨噬细胞的润浸，可能通过产生氧自由基和细胞因子，以及参与免疫调节过程，对神经组织和细胞产生损害作用。根据国内外的研究结果，我们将实验动物的脑缺血与再灌注时间分别定位于2 h和6 h。
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图4. 假手术组：原位杂交未见ICAM-1 mRNA阳性微血管表达(×400)
图5. 缺血2小时再灌注6小时后的对照组：原位杂交显示缺血侧大脑半球ICAM-1 mRNA阳性微血管表达明显增加(×400)
图6. 通心络组：原位杂交显示缺血侧大脑半球ICAM-1 mRNA阳性微血管表达数目比假手术组减少(×400)
本研究结果显示，SD大鼠缺血2 h再灌注6 h后，缺血侧大脑ICAM-1和VCAM-1蛋白表达水平和ICAM-1 mRNA表达水平显著升高。干预研究发现，中成药通心络可以降低ICAM-1的蛋白和mRNA表达水平。由于通心络治疗降低了黏附分子的表达，起到减轻脑损伤的作用，所以可以推测，通心络治疗缺血性脑血管病的机制涉及到黏附分子途径。本研究提示，以上结果与通心络降低ICAM-1的表达有关。
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通心络胶囊是吴以岭教授首创运用中医络病理论研制而成的中药复方制剂，由人参、水蛭、全蝎、土鳖虫、蜈蚣、蝉蜕、赤芍、冰片等组成中医认为其具有益气活血、通络止痛之功效。现代医学发现，除了抗凝和抑制血小板聚集作用外通心络胶囊对血管内皮细胞有一定的保护作用。本研究结果与周东华等利用微管吸吮技术，发现通心络能使多形核白细胞与鼠脑毛细血管内皮细胞间的黏附力减小的结果相符。
脑缺血再灌注后ICAM-1升高的原因不祥，可能与内皮细胞的功能改变有关，涉及到内皮素、一氧化氮等。由于血管内皮细胞ICAM-1表达增加为白细胞牢固粘附到血管壁及跨内皮游出提供条件，所以抗黏附分子治疗有望成为治疗缺血性脑卒中的一种方法。以往的研究思路是利用ICAM-1单克隆抗体，但此方法尽管在动物实验中取得较好的效果，但在临床试验中并不理想10，这也促使我们寻找新的抗黏附分子的方法。本实验结果表明，中成药通心络可以降低大鼠脑缺血再灌注后ICAM-1的转录和翻译过程，有助于减轻脑缺血后的炎症性损伤过程。
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(致谢：本研究得到第二军医大学长海医院病理科倪灿荣主任技师的帮助)
参考文献
[1]Frijns CJ Kappekke LJ. Infkammatory cekk adhesion mokecukes in ischemic cerebrovascukar disease.Stroke，2002，33(8)：2115-2122.
[2]董志领，邵汝生，李建华，等.通心络胶囊治疗脑梗塞临床观察.中国中医基础医学杂志，2001，7(4)：66-67.
[3]Longa EZ Weinstein PR Carkson S et ak. Reversibke middke cerebrak artery occkusion without craniectomy in rats. Stroke，1989，20(1)：84-91.
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[4]Ding Y Li J Rafoks JA et ak. Prereperfusion sakine infusion into ischemic territory reduces infkammatory injury after transient middke cerebrak artery occkusion in rats.Stroke，2002，33(10)：2492-2498.
[5]Zhang RL Chopp M Zakoga C et ak. The temporak profikes of ICAM-1 protein and mRNA expression after transient MCA occkusion in the rat. Brain Res，1995，682(1-2)：182-188.
[6]周东华，张莉莉，陈曼娥.脑缺血再灌注ICAM-1的表达与神经元损伤.第三军医大学学报，2000，22(2)：115-118.
, http://www.100md.com
[7]王中孝，蔡竖平，徐洁.脑缺血/再灌注脑微血管内皮细胞ELAM-1和ICAM-1 mRNA表达的研究.中国应用生理学杂志，2001，17(3)：236-238.
[8]雷万龙刘勇袁群芳等.大鼠局部脑缺血区VCAM-1表达和单核/巨噬细胞浸润的研究.中华微生物学和免疫学杂志，2000，20(2)105.
[9]周东华，邓娟，陈曼娥.通心络胶囊对脑缺血-再灌注大鼠保护作用的实验研究. 中国急救医学. 2001，21(8)：435-437.
[10]Furuya KTakeda HAzhar Set ak.Examination of severak potentiak mechanisms for the negative outcome in a ckinicak stroke triak of enkimomab， a murine anti-human intercekkukar adhesion mokecuke-1 antibody a bedside-to-bench study. Stroke 2001，32(11)：2665-2674., 百拇医药
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图4. 假手术组：原位杂交未见ICAM-1 mRNA阳性微血管表达(×400)
图5. 缺血2小时再灌注6小时后的对照组：原位杂交显示缺血侧大脑半球ICAM-1 mRNA阳性微血管表达明显增加(×400)
图6. 通心络组：原位杂交显示缺血侧大脑半球ICAM-1 mRNA阳性微血管表达数目比假手术组减少(×400)
本研究结果显示，SD大鼠缺血2 h再灌注6 h后，缺血侧大脑ICAM-1和VCAM-1蛋白表达水平和ICAM-1 mRNA表达水平显著升高。干预研究发现，中成药通心络可以降低ICAM-1的蛋白和mRNA表达水平。由于通心络治疗降低了黏附分子的表达，起到减轻脑损伤的作用，所以可以推测，通心络治疗缺血性脑血管病的机制涉及到黏附分子途径。本研究提示，以上结果与通心络降低ICAM-1的表达有关。
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通心络胶囊是吴以岭教授首创运用中医络病理论研制而成的中药复方制剂，由人参、水蛭、全蝎、土鳖虫、蜈蚣、蝉蜕、赤芍、冰片等组成中医认为其具有益气活血、通络止痛之功效。现代医学发现，除了抗凝和抑制血小板聚集作用外通心络胶囊对血管内皮细胞有一定的保护作用。本研究结果与周东华等利用微管吸吮技术，发现通心络能使多形核白细胞与鼠脑毛细血管内皮细胞间的黏附力减小的结果相符。
脑缺血再灌注后ICAM-1升高的原因不祥，可能与内皮细胞的功能改变有关，涉及到内皮素、一氧化氮等。由于血管内皮细胞ICAM-1表达增加为白细胞牢固粘附到血管壁及跨内皮游出提供条件，所以抗黏附分子治疗有望成为治疗缺血性脑卒中的一种方法。以往的研究思路是利用ICAM-1单克隆抗体，但此方法尽管在动物实验中取得较好的效果，但在临床试验中并不理想10，这也促使我们寻找新的抗黏附分子的方法。本实验结果表明，中成药通心络可以降低大鼠脑缺血再灌注后ICAM-1的转录和翻译过程，有助于减轻脑缺血后的炎症性损伤过程。
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(致谢：本研究得到第二军医大学长海医院病理科倪灿荣主任技师的帮助)
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