抗SSA噬菌体抗体库的构建及鉴定

http://www.100md.com 中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院风湿免疫科 100730 周炜；张奉春；唐福林；董怡

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     中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院风湿免疫科 100730 周炜；张奉春；唐福林；董怡

    关键词：自身抗原；细菌噬菌体；抗体

    摘要：目的 用噬菌体展示技术构建抗SSA单链抗体库。方法 分离抗SSA抗体阳性病人外周血单个核细胞,提取RNA并反转录cDNA。扩增免疫球蛋白重链可变区(VH)和κ链可变区(Vκ)。通过重叠聚合酶链反应(PCR)用连接片段将VH和Vκ体外连接成单链抗体(single chainFv ,scFv)基因。而后用SfiⅠ和NotⅠ酶切并与噬菌粒pHEN2 连接;将pHEN2 scFv电转至大肠杆菌TG1,建立抗SSAscFvcDNA库。随机挑选克隆用PCR扩增插入片段了解插入效率。用辅助噬菌体VCS M13感染含pHEN2 scFv的TG1,产生scFv噬菌体抗体。用酶联免疫吸附(ELISA)检测构建的scFv噬菌体抗体库中有无抗SSA抗体存在...

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