抗人γ-精浆蛋白单链抗体四聚体的构建及表达
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第四军医大学西京医院泌尿外科 710032西安 武国军；王栋；于磊；王禾；陈宝琦；袁建林
γ-精浆蛋白|单链抗体|P53|基因表达
参见附件(52kb)。
第四军医大学西京医院泌尿外科 710032西安 武国军；王栋；于磊；王禾；陈宝琦；袁建林
关键词：γ-精浆蛋白；单链抗体；P53；基因表达
摘要：目的 构建抗γ精浆蛋白(γSm )单链抗体(scFv) /p5 3四聚功能域( p5 3TD)融合基因,并进行真核表达和活性测定。方法 利用递归聚合酶链反应(PCR)法扩增IgG3上游铰链区与p5 3TD融合基因,克隆入pUC19载体中构建pUC19/IgG3 /p5 3克隆载体。将抗γSmscFv克隆入该载体中,构建抗γSmscFv/p5 3TD融合基因并克隆入真核表达载体pSecTag2 B ,转染HeLa细胞表达纯化后,利用流式细胞仪(FCM )进行活性测定。结果 获得了抗γSmscFv/p5 3TD融合基因,基因全长891bp ,可编码2 97个氨基酸。表达产物经十二烷基磺酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS PAGE)和Western印迹实验证实.
第四军医大学西京医院泌尿外科 710032西安 武国军；王栋；于磊；王禾；陈宝琦；袁建林
关键词：γ-精浆蛋白；单链抗体；P53；基因表达
摘要：目的 构建抗γ精浆蛋白(γSm )单链抗体(scFv) /p5 3四聚功能域( p5 3TD)融合基因,并进行真核表达和活性测定。方法 利用递归聚合酶链反应(PCR)法扩增IgG3上游铰链区与p5 3TD融合基因,克隆入pUC19载体中构建pUC19/IgG3 /p5 3克隆载体。将抗γSmscFv克隆入该载体中,构建抗γSmscFv/p5 3TD融合基因并克隆入真核表达载体pSecTag2 B ,转染HeLa细胞表达纯化后,利用流式细胞仪(FCM )进行活性测定。结果 获得了抗γSmscFv/p5 3TD融合基因,基因全长891bp ,可编码2 97个氨基酸。表达产物经十二烷基磺酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS PAGE)和Western印迹实验证实.
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