"体外培育牛黄"研发访谈录--体外培育牛黄的安全性评价⑤
记者：请问使用体外培育牛黄药品的安全性有没有保障？
宋瑞琨教授：我们按国家一类新药的申报和审批要求进行了安全性评价，主要做了这些研究：急性毒性试验，小鼠口服LD50为9g/kg，为临床用量的1800倍，大鼠口服LD50为10g/kg，为临床用量的2000倍；长期毒性试验(大鼠、犬)，没有任何毒副作用；特殊毒理试验(微生物回复突变试验、培养细胞染色体畸变试验、小鼠微核试验、大鼠的一般生殖毒性试验、大鼠致畸敏感期毒性试验、小鼠围产期生殖毒性试验)，无致畸、致突变作用。这些研究结果表明，体外培育牛黄的安全性是能够得到保障的。
记者：能否详细介绍一下具体的实验情况？
宋瑞琨教授：好，我先从急性毒性试验讲起。体外培育牛黄按6.55～16.00g/kg剂量予小鼠灌胃给药，动物出现活动减少，摄食量下降，排黄色软便，部分动物死亡。死亡动物肠胃空虚，轻度胀气。存活动物于给药后1～3天内恢复正常，LD50为9.0(8.0～10.1)g/kg，是临床用量(0.3g/60kg或5mg/kg)的1800倍。大鼠口服体外培育牛黄的LD50>10g/kg，是临床用量的2000倍以上。
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从急性毒性试验结果可以看出，体外培育牛黄给予小鼠和大鼠口服后的急性毒性很低。小鼠口服TPN的LD50为9.0(8.0～10.1)g/kg，是人口服用量(0.3g或5mg/kg)的1800倍(参见表1)。大鼠口服TPN的LD50大于10g/kg，是人口服用量的2000倍以上。
记者：长期毒性实验的情况如何？
宋瑞琨教授：在长期毒性试验中，大鼠耐受体外培育牛黄1500mg/kg/天，达35天；犬耐受体外培育牛黄500mg/kg/天，共33天；对大鼠和犬各器官、系统的形态、结构和功能均无不良影响。用药组体重增长均高于对照组。各剂量大鼠的血红蛋白和红细胞计数均明显高于对照组。
在长期毒性试验中，大鼠耐受TPN1500mg/kg达35天，犬耐受TPN500mg/kg达33天。结果表明TPN长期口服大鼠和犬各系统的形态、结构和功能无不良影响，而且用药组动物的体重增长均高于对照组(参见表2)。
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记者：你们做的体外培育牛黄致突变试验的结果怎样？
宋瑞琨教授：主要包括以下几方面的实验研究：
①微生物回复突变试验。
体外培育牛黄经用鼠伤寒沙门氏菌TA97、TA98、TA100和TA102四个菌株，在掺入量高达10000ug/皿和加S9或不加S9的条件下进行Ames试验，对各菌株均未有引起回复突变菌落数超过空白对照自发突变菌落数的2倍的情况，表明试验结果为阴性。
体外培育牛黄在本试验条件下，从定性的标准和平皿掺入试验的观测结果，其对各受试菌株引起的回复突变菌落数均未超过对照组自发突变菌落数的2倍，表明试验结果为阴性，显示体外培育牛黄对组氨酸缺陷型沙门氏菌无明显的致回复突变作用。
②培养细胞染色体畸变试验。
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体外培育牛黄的剂量分别为1.0、10.0和100ug/ml，对人外周血淋巴细胞染色体畸变进行检测，各剂量组的淋巴细胞染色体畸变率与对照组比较，均未见明显增高，表明体外培育牛黄在本试验条件下，对人外周血淋巴细胞无明显致畸作用。
在体外培育牛黄的剂量分别为1.0、10.0和100ug/ml的试验条件下，对人外周血淋巴细胞诱发的染色体细胞畸变率增加与溶剂对照组比较，均无统计学显著性差别意义，试验结果为阴性，表明在试验条件下，对人外周血淋巴细胞染色体无明显的致畸变性作用(参见表3)。
③小鼠微核试验。
体外培育牛黄的剂量为50、150和500mg/kg体重对小鼠进行微核试验，检测各剂量组的动物的骨髓嗜多染红细胞微核率及PCE/RBC比值的结果，与空白对照组比较均无显著性差异(P>0.05)，表明培育牛黄对小鼠的体细胞未呈现有明显的致突变作用。
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体外培育牛黄的剂量为50、150、500mg/kg体重的试验条件下，对小鼠的骨髓嗜多染红细胞微核率未引起显著增加，表明体外培育牛黄未呈现明显的致突变性作用。
④生殖毒性试验。
a.对大鼠的一般生殖毒性试验
在本试验条件下，体外培育牛黄的剂量高达500mg/kg体重，对大鼠生殖行为和能力、着床数、着床后胚胎存活数、活胎仔的生长发育等方面均未观察到不良影响。对存活的胎仔亦未见明显的致畸胎作用。
本试验条件下，体外培育牛黄对大鼠的生殖行为和能力、着床数及着床后胚胎存活数、存活胎仔的生长发育等方面均未观察到不良影响；对存活的胎仔亦未见有明显的致畸作用。
b.体外培育牛黄对大鼠致畸敏感期毒性试验
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在本试验条件下，体外培育牛黄剂量高达500mg/kg体重，对大鼠妊娠期的体重，着床后的胚胎存活数，胎仔的生长发育均无明显不良影响，对胎仔也未见有明显的致畸胎作用。
试验结果表明，在本试验条件下，体外培育牛黄对大鼠妊娠期的体重、着床后的胚胎存活数、胎仔的生长发育等方面均无明显的不良影响，对胎仔也未见有明显的致畸作用。
c.体外培育牛黄对小鼠围产期生殖毒性试验
小鼠于妊娠后期及哺乳期受予体外培育牛黄剂量最高达500mg/kg体重，其对小鼠的正常分娩，幼仔出生后成活及哺育成活，幼仔的生长发育等方面均未见有不良影响作用。
在本试验条件下，小鼠于妊娠后期及哺乳期受予体外培育牛黄，剂量最高达500mg/kg体重，其对小鼠的正常分娩、幼仔出生后成活及哺育成活、幼仔的生长发育等方面均未见有不良影响作用，表明体外培育牛黄对小鼠无明显的围产期毒性。
记者：能否再介绍一下在食品安全性方面的评价情况？
宋瑞琨教授：我们按食品新资源评价的技术要求，根据《食品安全性毒理学评价程序与方法》(GB15193-94)，判定体外培育牛黄通过食品安全性毒理学一、二阶段检验。其中小鼠急性毒性实验表明：体外培育牛黄属实际无毒物质；遗传毒性实验(Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验)为阴性；大鼠30天喂养实验为阴性。因时间有限，详细情况我就不再作介绍了。⑤, http://www.100md.com(辛 奋)
宋瑞琨教授：我们按国家一类新药的申报和审批要求进行了安全性评价，主要做了这些研究：急性毒性试验，小鼠口服LD50为9g/kg，为临床用量的1800倍，大鼠口服LD50为10g/kg，为临床用量的2000倍；长期毒性试验(大鼠、犬)，没有任何毒副作用；特殊毒理试验(微生物回复突变试验、培养细胞染色体畸变试验、小鼠微核试验、大鼠的一般生殖毒性试验、大鼠致畸敏感期毒性试验、小鼠围产期生殖毒性试验)，无致畸、致突变作用。这些研究结果表明，体外培育牛黄的安全性是能够得到保障的。
记者：能否详细介绍一下具体的实验情况？
宋瑞琨教授：好，我先从急性毒性试验讲起。体外培育牛黄按6.55～16.00g/kg剂量予小鼠灌胃给药，动物出现活动减少，摄食量下降，排黄色软便，部分动物死亡。死亡动物肠胃空虚，轻度胀气。存活动物于给药后1～3天内恢复正常，LD50为9.0(8.0～10.1)g/kg，是临床用量(0.3g/60kg或5mg/kg)的1800倍。大鼠口服体外培育牛黄的LD50>10g/kg，是临床用量的2000倍以上。
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从急性毒性试验结果可以看出，体外培育牛黄给予小鼠和大鼠口服后的急性毒性很低。小鼠口服TPN的LD50为9.0(8.0～10.1)g/kg，是人口服用量(0.3g或5mg/kg)的1800倍(参见表1)。大鼠口服TPN的LD50大于10g/kg，是人口服用量的2000倍以上。
记者：长期毒性实验的情况如何？
宋瑞琨教授：在长期毒性试验中，大鼠耐受体外培育牛黄1500mg/kg/天，达35天；犬耐受体外培育牛黄500mg/kg/天，共33天；对大鼠和犬各器官、系统的形态、结构和功能均无不良影响。用药组体重增长均高于对照组。各剂量大鼠的血红蛋白和红细胞计数均明显高于对照组。
在长期毒性试验中，大鼠耐受TPN1500mg/kg达35天，犬耐受TPN500mg/kg达33天。结果表明TPN长期口服大鼠和犬各系统的形态、结构和功能无不良影响，而且用药组动物的体重增长均高于对照组(参见表2)。
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记者：你们做的体外培育牛黄致突变试验的结果怎样？
宋瑞琨教授：主要包括以下几方面的实验研究：
①微生物回复突变试验。
体外培育牛黄经用鼠伤寒沙门氏菌TA97、TA98、TA100和TA102四个菌株，在掺入量高达10000ug/皿和加S9或不加S9的条件下进行Ames试验，对各菌株均未有引起回复突变菌落数超过空白对照自发突变菌落数的2倍的情况，表明试验结果为阴性。
体外培育牛黄在本试验条件下，从定性的标准和平皿掺入试验的观测结果，其对各受试菌株引起的回复突变菌落数均未超过对照组自发突变菌落数的2倍，表明试验结果为阴性，显示体外培育牛黄对组氨酸缺陷型沙门氏菌无明显的致回复突变作用。
②培养细胞染色体畸变试验。
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体外培育牛黄的剂量分别为1.0、10.0和100ug/ml，对人外周血淋巴细胞染色体畸变进行检测，各剂量组的淋巴细胞染色体畸变率与对照组比较，均未见明显增高，表明体外培育牛黄在本试验条件下，对人外周血淋巴细胞无明显致畸作用。
在体外培育牛黄的剂量分别为1.0、10.0和100ug/ml的试验条件下，对人外周血淋巴细胞诱发的染色体细胞畸变率增加与溶剂对照组比较，均无统计学显著性差别意义，试验结果为阴性，表明在试验条件下，对人外周血淋巴细胞染色体无明显的致畸变性作用(参见表3)。
③小鼠微核试验。
体外培育牛黄的剂量为50、150和500mg/kg体重对小鼠进行微核试验，检测各剂量组的动物的骨髓嗜多染红细胞微核率及PCE/RBC比值的结果，与空白对照组比较均无显著性差异(P>0.05)，表明培育牛黄对小鼠的体细胞未呈现有明显的致突变作用。
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体外培育牛黄的剂量为50、150、500mg/kg体重的试验条件下，对小鼠的骨髓嗜多染红细胞微核率未引起显著增加，表明体外培育牛黄未呈现明显的致突变性作用。
④生殖毒性试验。
a.对大鼠的一般生殖毒性试验
在本试验条件下，体外培育牛黄的剂量高达500mg/kg体重，对大鼠生殖行为和能力、着床数、着床后胚胎存活数、活胎仔的生长发育等方面均未观察到不良影响。对存活的胎仔亦未见明显的致畸胎作用。
本试验条件下，体外培育牛黄对大鼠的生殖行为和能力、着床数及着床后胚胎存活数、存活胎仔的生长发育等方面均未观察到不良影响；对存活的胎仔亦未见有明显的致畸作用。
b.体外培育牛黄对大鼠致畸敏感期毒性试验
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在本试验条件下，体外培育牛黄剂量高达500mg/kg体重，对大鼠妊娠期的体重，着床后的胚胎存活数，胎仔的生长发育均无明显不良影响，对胎仔也未见有明显的致畸胎作用。
试验结果表明，在本试验条件下，体外培育牛黄对大鼠妊娠期的体重、着床后的胚胎存活数、胎仔的生长发育等方面均无明显的不良影响，对胎仔也未见有明显的致畸作用。
c.体外培育牛黄对小鼠围产期生殖毒性试验
小鼠于妊娠后期及哺乳期受予体外培育牛黄剂量最高达500mg/kg体重，其对小鼠的正常分娩，幼仔出生后成活及哺育成活，幼仔的生长发育等方面均未见有不良影响作用。
在本试验条件下，小鼠于妊娠后期及哺乳期受予体外培育牛黄，剂量最高达500mg/kg体重，其对小鼠的正常分娩、幼仔出生后成活及哺育成活、幼仔的生长发育等方面均未见有不良影响作用，表明体外培育牛黄对小鼠无明显的围产期毒性。
记者：能否再介绍一下在食品安全性方面的评价情况？
宋瑞琨教授：我们按食品新资源评价的技术要求，根据《食品安全性毒理学评价程序与方法》(GB15193-94)，判定体外培育牛黄通过食品安全性毒理学一、二阶段检验。其中小鼠急性毒性实验表明：体外培育牛黄属实际无毒物质；遗传毒性实验(Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验)为阴性；大鼠30天喂养实验为阴性。因时间有限，详细情况我就不再作介绍了。⑤, http://www.100md.com(辛 奋)
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