电针对睾丸功能损害肾阳虚型大鼠作用的实验研究
【摘要】 目的 为探讨电针治疗男性不育症的作用机制，拟对笔者导师姚康义教授治疗男性不育症的临床经验要穴关元和中极穴进行实验性综合评价。方法 用腺嘌呤灌喂Wistar系健康雄性大鼠，诱发睾丸功能损害肾阳虚型大鼠模型。从症状体征体重;睾丸的弹性，重量和容积;睾丸的组织学;附睾中精子的数量，活率和活力;血浆内分泌激素(T，FSH，LH)水平的测定等方面，来观察电针关元和中极穴对模型动物的作用。结果 电针关元和中极穴能促使模型动物整体功能活动的增强，症状、体征明显改善。睾丸的弹性，容积显著提高(P<0.01);曲细精管再生修复，生精功能明显改善;精子的数量、活率和活力显著提高(P<0.01);内分泌激素(T、FSH、LH)水平显著升高(P<0.01)。结论 电针关元和中极穴具有益肾助阳、培元生精，调节内分泌的作用，能促进下丘脑—垂体—睾丸性腺系统功能的恢复与提高。
关键词 睾丸/电针效应 肾阳虚/电针疗法 动物/实验研究
【文献标识码】 A 【文章编号】 1726-6424(2004)02-0111-04
, 百拇医药
男性不育症，是临床难治疾病之一，且有逐年增多的趋势。治疗男性不育症，已成为世界性普遍重视的课题。对于睾丸生精功能障碍所致的男性不育症，祖国医学认为:肾阳虚，精气衰少，“阳虚无子”是造成男性不育症最常见的原因之一。有资料显示，针灸治疗男性不育症确有疗效，且疗效快捷，安全无害，历代针灸医家也积累了许多宝贵的经验。为探求电针治疗男性不育症的作用机制，为其推广应用提供客观实验依据，拟对笔者导师姚康义教授治疗男性不育症的临床经验要穴关元和中极穴进行实验性综合评价。
1 材料与方法
1.1 动物分组与模型建立方法 选取体重250g左右的60只二月龄Wistar系健康雄性大鼠。首选进行称重标号，然后采用完全随机方法将其分为四级，每组15只;再采用占阄法决定哪一组为正常组，哪三组进行造模。造模后，再用占阄法定出模型Ⅰ组(作治疗前对照)，模型Ⅱ组(作治疗后对照)，电针治疗组(作电针治疗)。将要造模的三组大白鼠均按腺嘌呤30mg/100g体重的剂量，将腺嘌呤与1.5ml蒸馏水混匀后，以灌胃法灌喂大鼠，每日1次，连续30日;正常组大鼠则灌喂等量蒸馏水作对照 [1，2] 。
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1.2 治疗方法 取穴方法:由剑突软骨尖至耻骨联合上缘中点的连线之中点为神阙穴，然后仿人类任脉经穴分寸，将神阙穴与大鼠耻骨联合上缘中点的连线分为5寸，大鼠的神阙穴下3寸为关元穴，下4寸为中极穴 [3] 。电针治疗方法，由于大鼠的电针关元和中极穴相距较近，故每次取关元和中极穴作为一电极，另一电极连在大鼠阴囊尖部。定取穴位后，用图钉型揿针刺入二穴位中，用G-6805电针仪给予电刺激，每次15min，强度以肢体发生轻微抖动为度，频率为3～4Hz连续波 [4] 。每日上午治疗1次，10日为1疗程，间歇5日再进行下一疗程，共治疗2个疗程。
1.3 标本采取时间和方法 造模30天后，对四组大鼠分别称重并记录。用抽签法定出每组10只大鼠，使每组例数相同，便于齐同对比，便于统计运算。在电针治疗前将正常组和模型Ⅰ组采取标本并处死。在电针治疗两个疗程(1个月)后，将电针组和模型Ⅱ组采取标本并处死。取血，用颈静脉取血法，而后静置、离心。吸取血清并作标记，低温保存，备查。同时，用抽签法决定摘取大鼠一侧附睾和睾丸;取附睾剪碎后溶于2ml生理盐水中，立即送检，其间温度应保持在35℃左右，以保证精子计数、活率和活力检测的准备性和可靠性。取睾丸测其弹性、重量和容积后，将其置于Bouins液中固定送检。
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1.4 观察指标及其方法 (1)症状体征、体重:在造模和治疗期间观察各组大鼠的神态、活动、对外界反应，毛色、肥瘦、体重等等的变化;在造模后和治疗后分别称其体重并作记录。称重用电子天平，重量单位是g。(2)睾丸的弹性:用抽签法摘取左侧睾丸后，用压陷式眼压计测睾丸的压力，并将其换算成kPa压力单位。(3)睾丸的重量:测完睾丸的弹性后，随即用架盘药物天平称取睾丸的重量，单位是g。(4)睾丸的容积:测完重量后，随即将睾丸放入盛有生理盐水的广口小量桶中，读出水面上升的刻度，即为睾丸的容积，单位是ml。(5)睾丸的组织学检查，将测完容积的睾丸取出后，即放入盛有Bouin’s液的小瓶子中进行固定。注意:将睾丸白膜用刀片切开数个刀口，以便固定液能够渗透到睾丸组织中去;固定液不少于组织块总体积的4倍;固定时间为24～48h。然后，水洗、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、HE染色、封固。用光学显微镜观察睾丸曲细精管形态与精子发生状态，对睾丸的生精功能进行组织学评价。(6)附睾中精子的数量，活率与活力:将大鼠处死后，迅速解剖剥取左侧附睾，剪碎溶于2ml生理盐水中。参照人类精液常规分析方法。精子的数量，用细胞计数器法进行精子计数，最后算出每ml中的精子数，单位是10 7 /ml。精子的活率，用活精子和死精子的染色法，数200个精子测出活精子百分率(%)。精子的活力;采用精子穿透试验，测定精子前向运动的速度。方法是:用一根长10cm，直径1.2mm的毛细玻璃管，管内充满等渗葡萄糖液，将毛细玻璃管置于底部含有一滴精液的玻璃试管内，并保留在恒温器内30min，然后，将玻璃管置于显微镜下观察精子前向运动的最远距离，即为精子在30min内的运动速度，单位是mm/h。(7)内分泌激素:取血清，用放射免疫法(RIA)测定睾丸酮(T)促卵泡生长激素(FSH)，促黄体生成激素(LH)的水平。
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1.5 统计学处理方法 本实验计量资料结果均用ˉx±s表示。体重指标的显著性检验;建模后三组动物与建模前的体重对比，电针组治疗后与治疗前的体重对比，用配对资料t检验，电针组与模型Ⅱ组体重对比，用成组资料的t检验。睾丸的弹性，重量和容积指标;附睾精子的数量、活率和活力指标;血浆T、LH、FSH等等指标，每一指标组间的显著性检验用F检验;每一指标各组间的两两比较用q检验。显著性水准及结果的判断，按通用的假设检验标准:(1)P>0.05，表示差异无显著性;(2)0.01
2 观察结果
2.1 各组症状体征体重的比较 建模动物自灌喂腺嘌呤第5～7天起，出现恶寒卧，活动减少，精神萎靡，反应迟钝，体毛干枯不齐、稀疏、脱落、消瘦、体重减轻，尾部苍白等等一系列耗竭虚损症状，诸症随喂药日数的增加而加剧。
, http://www.100md.com 表1 各组大鼠体重(g)变化与比较
注:建模后的三组与建模前对比;电针组治疗后与治疗前对比;电针组与模型Ⅱ组对比: ˇˇ P<0.05， ˇ P<0.01。
各组体重变化与比较见表1。喂药30天后除正常组大鼠的神态如常，体重有所增加外，其余各组大鼠体重均比建模前明显下降(P<0.05);治疗后，电针组大鼠的神态明显改善，体重比治疗前显著增加(P<0.01)。模型Ⅱ组大鼠神态与体重的恢复程度远远不如电针组，两组间体重的差异有非常显著性(P<0.01)。
2.2 各组睾丸的弹性、重量和容积的比较 各组大鼠睾丸的弹性、重量和容积测量结果比较见表2。
表2 各组睾丸的弹性、重量、容积的结果比较
注:模型Ⅰ组与正常组对比，电针组与模型Ⅱ组对比: △ P>0.05， ˇ P<0.05， ˇˇ P<0.01。
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由表2可以看出，模型Ⅰ组睾丸的弹性、重量、容积均比正常组显著降低(P<0.01和P<0.05);电针组睾丸的弹性，容积比模型Ⅱ组显著性提高(P<0.01和P<0.05)，电针组睾丸的重量和模型Ⅱ组对比差异无显著性(P>0.05)。
2.3 各组睾丸组织学观察比较 模型Ⅰ组睾丸呈萎缩状态，大部分曲细精管退变严重，无细胞可见;生殖上皮变薄，管腔内精子数目明显减少。正常组睾丸组织学未见异常，曲细精管内精子发生完全，各级生精细胞排列规整，处在不 同发育阶段的精细胞沿壁排列成层，精原细胞紧贴曲细精管基膜部最内层，越是分裂后阶段的越接受管腔，生成的精子就脱落进入管腔。
电针组睾丸组织近似正常，大部分曲细精管内精子发生良好，精子数目稍减少，部分生殖上皮稍减少，生殖上皮较模型Ⅱ组丰厚，排列稍混乱。模型Ⅱ组睾丸组织萎缩及曲细精管退化的程度较模型Ⅰ组为轻，精子数目中度减少，极个别曲细精子管退变，生殖上皮缺如。各组睾丸组织切片见图1～4。
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图1 正常组睾丸组织切片
图2 模型Ⅰ组睾丸组织切片
图3 电针组睾丸组织切片
2.4 精子的数量、活率与活力 各组附睾中精子的数量(N)，精子活率(M)与精子运动速度(V)的检测结果与比较见表3。图4 模型Ⅱ组睾丸组织切片图
表3 精子数量(N)活率(M)和运动速度(V)的结果比较
注:模型Ⅰ组与正常组对比，电针组与模型Ⅱ组对比; ˇˇ P<0.01。
由表3可以看出，模型Ⅰ组的N、M、V均比正常组显著降低(P<0.01);电针组N、M、V均比模型Ⅱ组显著提高(P<0.01)。
2.5 内分泌激素水平 各组血浆T、FSH、LH值与比较见表4。
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表4 血浆T、FSH、LH值比较
注:模型Ⅰ组与正常组对比，电针组与模型Ⅱ组对比; ˇ P<0.05， ˇˇ P<0.01。
从表4可以看出，模型Ⅰ组T、FSH、LH值均比正常组显著下降(P<0.01);电针组T、FSH、LH值均比模型Ⅱ组显著升高(P<0.05和P<0.01);各组间T、FSH、LH值差异有显著性(P<0.05)。
3 讨论
3.1 对本实验动物模型的评价 本实验拟用腺嘌呤灌喂Wistar系适龄健康雄性大鼠，发现大鼠日渐恶寒蜷卧，蜷缩拱背;精神萎靡，反应迟钝，少动闭眼，体毛干枯不齐、稀疏、脱落、消瘦、体重减轻、尾部苍白等耗竭虚损的症状体征，以及精子数量减少，精子的活率与活力降低等一系列机体功能活动减退和生殖功能衰退的表现。这与人类肾阳虚，精气衰少，“阳虚无子”的实际情况十分相似。
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肾藏精，主生长发育与生殖，它概括了睾丸(外肾)的生 精生殖和和内分泌功能。肾中精气是机体生命活动之本，对机体各方面的生理活动均起着极其重要的作用，依据其生理效应，又分为肾阳、肾阴，二者相互为用，相互依存，相互制约，从而维护着各脏阴阳的相对平衡，故称其为人体阴阳之本。而肾阳又称元真之阳，命门之火，肾阳是肾生理功能的动力。也是机体生命活动力的源泉，肾中所藏之精气，需赖命门之火的温养，才能发挥其滋养体内各部分器官，组织和繁殖后代的作用。如果由于某些原因，这种相对的阴阳平衡遭到破坏而不能自行恢复时，即能形成肾阳虚或肾阴虚。本实验就是用腺嘌呤使大鼠整个机体的阳气受损而致阳虚阴盛的肾阳虚证。肾阳虚则温煦功能失职，不能蒸化肾阴化生精气，则致精气衰少，脏腑组织功能和生殖功能衰减，出现虚寒衰弱的症状表现以及生长发育迟缓，精少清冷而“阳虚无子”。
本实验结果显示，模型动物的主要病理改变为睾丸生精生殖功能障碍，血浆LH，T、FSH水平下降。这提示垂体—间质细胞轴调节和垂体—曲细精管轴调节的功能低下，为该模型动物的主要发病环节。
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垂体前叶合成与释放的促黄体生成激素(LH)能促使睾丸间质细胞合成与分泌雄性激素睾酮(T)，一定浓度的T作用于睾丸曲细精管与附睾，促使生精细胞连续分化，刺激精子生成并促进精子的功能成熟;一定浓度的T对附性器官的发育以及体内蛋白质的合成和骨骼生长等均具有促进作用。垂体前叶合成与释放的促卵泡生长激素(FSH)，能直接作用于曲细精管，促进精子的生成。因此，当下丘脑—垂体—睾丸性腺轴受到某种不利因素(如异常高浓度的腺嘌呤及其代谢产物的“毒性”作用 [5] )的影响而导致其功能低下。而LH、T、FSH的合成与分泌减少时，势必影响睾丸精子的发生以及精子在附睾中的功能成熟过程，导致精子数量与质量下降而造成不育;同时，因体内物质的合成，代谢和骨骼生长等受到影响而导致机体功能活动减退，生长发育迟缓等。
综上所述可知:(1)肾阳的温煦、生化作用与下丘脑—垂体—睾丸性腺轴调节功能有密切关系。LH、T、FSH水平低下可作为反映肾阳虚的客观指标。(2)睾丸功能损害肾阳虚型大鼠模型，对于研究人类肾阳虚型睾丸生精功能障碍所致的男性不育症是一个良好的借鉴。因此，本实验选用此动物模型作为受试对象，来研究探讨电针治疗男性不育症的经验要穴关元、中极穴的作用及其原理。
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3.2 选用电针的依据 电针是在针刺腧穴“得气”后，在针上通以接近人体生物电的微量电流以防治疾病的一种疗法。它的优点是:在针刺腧穴的基础上，加以脉冲电的治疗作用，针与电两种刺激相结合，故对某些疾病能提高疗效。且能比较正确地掌握刺激参数，代替手法运针，节省人力，并避免人为因素对实验结果的影响，使实验的均衡性原则得到保证，在动物身上也便于操作，有研究结果证明适度电针刺激不会引起实验动物的应激反应 [4] 。
3.3 选用关元和中极穴的意义 关元穴和中极穴均为任脉经穴，是足三阴经和任脉的交会穴。关元穴为元阴元阳交关之所，又为男子藏精之地，为三焦元气之所出，联系命门真阳，为阴中含阳的穴位，具有培肾固本，调气回阳之功，本穴有强壮作用，是为保健要穴。关元和中极二穴均主治阳痿、早泄、遗精等男性疾病，通过任脉与肾、外肾(睾丸)密切相联，具有补摄下焦元气的作用。此二穴是笔者导师姚康义教授临床上治疗男性不育症的经验要穴。因此，学生用此二穴来治疗本实验睾丸功能损害肾阳虚型大鼠模型，对此二穴治疗男性不育症的临床疗效作用进行实验性验证和评价，进而探究其作用原理。
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3.4 电针关元和中极穴的疗效评价 本实验取关元和中极二穴合用，施以电针。结果显示:电针关元和中极穴对睾丸功能损害肾阳虚型大鼠疗效显著。其作用体现在以下方面:(1)补肾助阳强身，使肾阳得益，命门之火得补，整个机体功能得复，症状体征明显改善，整个机体功能活动增强，电针组体重与治疗前及模型Ⅱ组对比显著增加(P<0.01)。(2)培元生精固本，以促使损伤的睾丸组织得以修复，生精上皮得以恢复，电针组与模型Ⅱ组对比睾丸的弹性明显提高(P<0.01);睾丸组织学以及睾丸的生精功能明显改善，与模型Ⅰ、Ⅱ组对比电针组精子的数量、活率与活力显著提高(P<0.01)。(3)调节内分泌，与模型Ⅰ、Ⅱ组对比电针组能迅速使降低的LH、T、FSH的水平显著升高(P<0. 01)。
实验结果表明:电针关元和中极穴对睾丸功能损害肾阳虚型大鼠具有显著的疗效。这就为临床运用电针关元和中极穴治疗由肾阳虚睾丸生精功能障碍所致的男性不育症提供了客观实验依据，其确切机制有待于进一步深入研究探讨。
, 百拇医药 参考文献
1 郑平东.腺嘌呤诱发睾丸功能损害肾阳虚模型的研究.中国医药学报，1989，4(3):67.
2 陈琼.针灸对肾阳虚睾丸功能损害大鼠作用的实验研究.中国针灸，1996，16(3):37-39.
3 华兴邦.大鼠穴位图谱的研制.实验动物与动物实验，1991，1:1.
4 高慧.电针促进去卵巢大鼠肾上腺增大、血皮质酮含量升高.针刺研究，1995，20(2):55-57.
5 郑平东.腺嘌呤诱发“肾阳虚”动物模型的研制.中国医药学报，1990，5(3):68.
作者单位:430012湖北武汉解放军第457医院
463000河南省驻马店市第一人民医院
(收稿日期:2003-09-25)
(编辑青 山), 百拇医药(杨志豪 蔡培勇)
关键词 睾丸/电针效应 肾阳虚/电针疗法 动物/实验研究
【文献标识码】 A 【文章编号】 1726-6424(2004)02-0111-04
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男性不育症，是临床难治疾病之一，且有逐年增多的趋势。治疗男性不育症，已成为世界性普遍重视的课题。对于睾丸生精功能障碍所致的男性不育症，祖国医学认为:肾阳虚，精气衰少，“阳虚无子”是造成男性不育症最常见的原因之一。有资料显示，针灸治疗男性不育症确有疗效，且疗效快捷，安全无害，历代针灸医家也积累了许多宝贵的经验。为探求电针治疗男性不育症的作用机制，为其推广应用提供客观实验依据，拟对笔者导师姚康义教授治疗男性不育症的临床经验要穴关元和中极穴进行实验性综合评价。
1 材料与方法
1.1 动物分组与模型建立方法 选取体重250g左右的60只二月龄Wistar系健康雄性大鼠。首选进行称重标号，然后采用完全随机方法将其分为四级，每组15只;再采用占阄法决定哪一组为正常组，哪三组进行造模。造模后，再用占阄法定出模型Ⅰ组(作治疗前对照)，模型Ⅱ组(作治疗后对照)，电针治疗组(作电针治疗)。将要造模的三组大白鼠均按腺嘌呤30mg/100g体重的剂量，将腺嘌呤与1.5ml蒸馏水混匀后，以灌胃法灌喂大鼠，每日1次，连续30日;正常组大鼠则灌喂等量蒸馏水作对照 [1，2] 。
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1.2 治疗方法 取穴方法:由剑突软骨尖至耻骨联合上缘中点的连线之中点为神阙穴，然后仿人类任脉经穴分寸，将神阙穴与大鼠耻骨联合上缘中点的连线分为5寸，大鼠的神阙穴下3寸为关元穴，下4寸为中极穴 [3] 。电针治疗方法，由于大鼠的电针关元和中极穴相距较近，故每次取关元和中极穴作为一电极，另一电极连在大鼠阴囊尖部。定取穴位后，用图钉型揿针刺入二穴位中，用G-6805电针仪给予电刺激，每次15min，强度以肢体发生轻微抖动为度，频率为3～4Hz连续波 [4] 。每日上午治疗1次，10日为1疗程，间歇5日再进行下一疗程，共治疗2个疗程。
1.3 标本采取时间和方法 造模30天后，对四组大鼠分别称重并记录。用抽签法定出每组10只大鼠，使每组例数相同，便于齐同对比，便于统计运算。在电针治疗前将正常组和模型Ⅰ组采取标本并处死。在电针治疗两个疗程(1个月)后，将电针组和模型Ⅱ组采取标本并处死。取血，用颈静脉取血法，而后静置、离心。吸取血清并作标记，低温保存，备查。同时，用抽签法决定摘取大鼠一侧附睾和睾丸;取附睾剪碎后溶于2ml生理盐水中，立即送检，其间温度应保持在35℃左右，以保证精子计数、活率和活力检测的准备性和可靠性。取睾丸测其弹性、重量和容积后，将其置于Bouins液中固定送检。
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1.4 观察指标及其方法 (1)症状体征、体重:在造模和治疗期间观察各组大鼠的神态、活动、对外界反应，毛色、肥瘦、体重等等的变化;在造模后和治疗后分别称其体重并作记录。称重用电子天平，重量单位是g。(2)睾丸的弹性:用抽签法摘取左侧睾丸后，用压陷式眼压计测睾丸的压力，并将其换算成kPa压力单位。(3)睾丸的重量:测完睾丸的弹性后，随即用架盘药物天平称取睾丸的重量，单位是g。(4)睾丸的容积:测完重量后，随即将睾丸放入盛有生理盐水的广口小量桶中，读出水面上升的刻度，即为睾丸的容积，单位是ml。(5)睾丸的组织学检查，将测完容积的睾丸取出后，即放入盛有Bouin’s液的小瓶子中进行固定。注意:将睾丸白膜用刀片切开数个刀口，以便固定液能够渗透到睾丸组织中去;固定液不少于组织块总体积的4倍;固定时间为24～48h。然后，水洗、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、HE染色、封固。用光学显微镜观察睾丸曲细精管形态与精子发生状态，对睾丸的生精功能进行组织学评价。(6)附睾中精子的数量，活率与活力:将大鼠处死后，迅速解剖剥取左侧附睾，剪碎溶于2ml生理盐水中。参照人类精液常规分析方法。精子的数量，用细胞计数器法进行精子计数，最后算出每ml中的精子数，单位是10 7 /ml。精子的活率，用活精子和死精子的染色法，数200个精子测出活精子百分率(%)。精子的活力;采用精子穿透试验，测定精子前向运动的速度。方法是:用一根长10cm，直径1.2mm的毛细玻璃管，管内充满等渗葡萄糖液，将毛细玻璃管置于底部含有一滴精液的玻璃试管内，并保留在恒温器内30min，然后，将玻璃管置于显微镜下观察精子前向运动的最远距离，即为精子在30min内的运动速度，单位是mm/h。(7)内分泌激素:取血清，用放射免疫法(RIA)测定睾丸酮(T)促卵泡生长激素(FSH)，促黄体生成激素(LH)的水平。
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1.5 统计学处理方法 本实验计量资料结果均用ˉx±s表示。体重指标的显著性检验;建模后三组动物与建模前的体重对比，电针组治疗后与治疗前的体重对比，用配对资料t检验，电针组与模型Ⅱ组体重对比，用成组资料的t检验。睾丸的弹性，重量和容积指标;附睾精子的数量、活率和活力指标;血浆T、LH、FSH等等指标，每一指标组间的显著性检验用F检验;每一指标各组间的两两比较用q检验。显著性水准及结果的判断，按通用的假设检验标准:(1)P>0.05，表示差异无显著性;(2)0.01
2 观察结果
2.1 各组症状体征体重的比较 建模动物自灌喂腺嘌呤第5～7天起，出现恶寒卧，活动减少，精神萎靡，反应迟钝，体毛干枯不齐、稀疏、脱落、消瘦、体重减轻，尾部苍白等等一系列耗竭虚损症状，诸症随喂药日数的增加而加剧。
, http://www.100md.com 表1 各组大鼠体重(g)变化与比较
注:建模后的三组与建模前对比;电针组治疗后与治疗前对比;电针组与模型Ⅱ组对比: ˇˇ P<0.05， ˇ P<0.01。
各组体重变化与比较见表1。喂药30天后除正常组大鼠的神态如常，体重有所增加外，其余各组大鼠体重均比建模前明显下降(P<0.05);治疗后，电针组大鼠的神态明显改善，体重比治疗前显著增加(P<0.01)。模型Ⅱ组大鼠神态与体重的恢复程度远远不如电针组，两组间体重的差异有非常显著性(P<0.01)。
2.2 各组睾丸的弹性、重量和容积的比较 各组大鼠睾丸的弹性、重量和容积测量结果比较见表2。
表2 各组睾丸的弹性、重量、容积的结果比较
注:模型Ⅰ组与正常组对比，电针组与模型Ⅱ组对比: △ P>0.05， ˇ P<0.05， ˇˇ P<0.01。
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由表2可以看出，模型Ⅰ组睾丸的弹性、重量、容积均比正常组显著降低(P<0.01和P<0.05);电针组睾丸的弹性，容积比模型Ⅱ组显著性提高(P<0.01和P<0.05)，电针组睾丸的重量和模型Ⅱ组对比差异无显著性(P>0.05)。
2.3 各组睾丸组织学观察比较 模型Ⅰ组睾丸呈萎缩状态，大部分曲细精管退变严重，无细胞可见;生殖上皮变薄，管腔内精子数目明显减少。正常组睾丸组织学未见异常，曲细精管内精子发生完全，各级生精细胞排列规整，处在不 同发育阶段的精细胞沿壁排列成层，精原细胞紧贴曲细精管基膜部最内层，越是分裂后阶段的越接受管腔，生成的精子就脱落进入管腔。
电针组睾丸组织近似正常，大部分曲细精管内精子发生良好，精子数目稍减少，部分生殖上皮稍减少，生殖上皮较模型Ⅱ组丰厚，排列稍混乱。模型Ⅱ组睾丸组织萎缩及曲细精管退化的程度较模型Ⅰ组为轻，精子数目中度减少，极个别曲细精子管退变，生殖上皮缺如。各组睾丸组织切片见图1～4。
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图1 正常组睾丸组织切片
图2 模型Ⅰ组睾丸组织切片
图3 电针组睾丸组织切片
2.4 精子的数量、活率与活力 各组附睾中精子的数量(N)，精子活率(M)与精子运动速度(V)的检测结果与比较见表3。图4 模型Ⅱ组睾丸组织切片图
表3 精子数量(N)活率(M)和运动速度(V)的结果比较
注:模型Ⅰ组与正常组对比，电针组与模型Ⅱ组对比; ˇˇ P<0.01。
由表3可以看出，模型Ⅰ组的N、M、V均比正常组显著降低(P<0.01);电针组N、M、V均比模型Ⅱ组显著提高(P<0.01)。
2.5 内分泌激素水平 各组血浆T、FSH、LH值与比较见表4。
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表4 血浆T、FSH、LH值比较
注:模型Ⅰ组与正常组对比，电针组与模型Ⅱ组对比; ˇ P<0.05， ˇˇ P<0.01。
从表4可以看出，模型Ⅰ组T、FSH、LH值均比正常组显著下降(P<0.01);电针组T、FSH、LH值均比模型Ⅱ组显著升高(P<0.05和P<0.01);各组间T、FSH、LH值差异有显著性(P<0.05)。
3 讨论
3.1 对本实验动物模型的评价 本实验拟用腺嘌呤灌喂Wistar系适龄健康雄性大鼠，发现大鼠日渐恶寒蜷卧，蜷缩拱背;精神萎靡，反应迟钝，少动闭眼，体毛干枯不齐、稀疏、脱落、消瘦、体重减轻、尾部苍白等耗竭虚损的症状体征，以及精子数量减少，精子的活率与活力降低等一系列机体功能活动减退和生殖功能衰退的表现。这与人类肾阳虚，精气衰少，“阳虚无子”的实际情况十分相似。
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肾藏精，主生长发育与生殖，它概括了睾丸(外肾)的生 精生殖和和内分泌功能。肾中精气是机体生命活动之本，对机体各方面的生理活动均起着极其重要的作用，依据其生理效应，又分为肾阳、肾阴，二者相互为用，相互依存，相互制约，从而维护着各脏阴阳的相对平衡，故称其为人体阴阳之本。而肾阳又称元真之阳，命门之火，肾阳是肾生理功能的动力。也是机体生命活动力的源泉，肾中所藏之精气，需赖命门之火的温养，才能发挥其滋养体内各部分器官，组织和繁殖后代的作用。如果由于某些原因，这种相对的阴阳平衡遭到破坏而不能自行恢复时，即能形成肾阳虚或肾阴虚。本实验就是用腺嘌呤使大鼠整个机体的阳气受损而致阳虚阴盛的肾阳虚证。肾阳虚则温煦功能失职，不能蒸化肾阴化生精气，则致精气衰少，脏腑组织功能和生殖功能衰减，出现虚寒衰弱的症状表现以及生长发育迟缓，精少清冷而“阳虚无子”。
本实验结果显示，模型动物的主要病理改变为睾丸生精生殖功能障碍，血浆LH，T、FSH水平下降。这提示垂体—间质细胞轴调节和垂体—曲细精管轴调节的功能低下，为该模型动物的主要发病环节。
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垂体前叶合成与释放的促黄体生成激素(LH)能促使睾丸间质细胞合成与分泌雄性激素睾酮(T)，一定浓度的T作用于睾丸曲细精管与附睾，促使生精细胞连续分化，刺激精子生成并促进精子的功能成熟;一定浓度的T对附性器官的发育以及体内蛋白质的合成和骨骼生长等均具有促进作用。垂体前叶合成与释放的促卵泡生长激素(FSH)，能直接作用于曲细精管，促进精子的生成。因此，当下丘脑—垂体—睾丸性腺轴受到某种不利因素(如异常高浓度的腺嘌呤及其代谢产物的“毒性”作用 [5] )的影响而导致其功能低下。而LH、T、FSH的合成与分泌减少时，势必影响睾丸精子的发生以及精子在附睾中的功能成熟过程，导致精子数量与质量下降而造成不育;同时，因体内物质的合成，代谢和骨骼生长等受到影响而导致机体功能活动减退，生长发育迟缓等。
综上所述可知:(1)肾阳的温煦、生化作用与下丘脑—垂体—睾丸性腺轴调节功能有密切关系。LH、T、FSH水平低下可作为反映肾阳虚的客观指标。(2)睾丸功能损害肾阳虚型大鼠模型，对于研究人类肾阳虚型睾丸生精功能障碍所致的男性不育症是一个良好的借鉴。因此，本实验选用此动物模型作为受试对象，来研究探讨电针治疗男性不育症的经验要穴关元、中极穴的作用及其原理。
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3.2 选用电针的依据 电针是在针刺腧穴“得气”后，在针上通以接近人体生物电的微量电流以防治疾病的一种疗法。它的优点是:在针刺腧穴的基础上，加以脉冲电的治疗作用，针与电两种刺激相结合，故对某些疾病能提高疗效。且能比较正确地掌握刺激参数，代替手法运针，节省人力，并避免人为因素对实验结果的影响，使实验的均衡性原则得到保证，在动物身上也便于操作，有研究结果证明适度电针刺激不会引起实验动物的应激反应 [4] 。
3.3 选用关元和中极穴的意义 关元穴和中极穴均为任脉经穴，是足三阴经和任脉的交会穴。关元穴为元阴元阳交关之所，又为男子藏精之地，为三焦元气之所出，联系命门真阳，为阴中含阳的穴位，具有培肾固本，调气回阳之功，本穴有强壮作用，是为保健要穴。关元和中极二穴均主治阳痿、早泄、遗精等男性疾病，通过任脉与肾、外肾(睾丸)密切相联，具有补摄下焦元气的作用。此二穴是笔者导师姚康义教授临床上治疗男性不育症的经验要穴。因此，学生用此二穴来治疗本实验睾丸功能损害肾阳虚型大鼠模型，对此二穴治疗男性不育症的临床疗效作用进行实验性验证和评价，进而探究其作用原理。
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3.4 电针关元和中极穴的疗效评价 本实验取关元和中极二穴合用，施以电针。结果显示:电针关元和中极穴对睾丸功能损害肾阳虚型大鼠疗效显著。其作用体现在以下方面:(1)补肾助阳强身，使肾阳得益，命门之火得补，整个机体功能得复，症状体征明显改善，整个机体功能活动增强，电针组体重与治疗前及模型Ⅱ组对比显著增加(P<0.01)。(2)培元生精固本，以促使损伤的睾丸组织得以修复，生精上皮得以恢复，电针组与模型Ⅱ组对比睾丸的弹性明显提高(P<0.01);睾丸组织学以及睾丸的生精功能明显改善，与模型Ⅰ、Ⅱ组对比电针组精子的数量、活率与活力显著提高(P<0.01)。(3)调节内分泌，与模型Ⅰ、Ⅱ组对比电针组能迅速使降低的LH、T、FSH的水平显著升高(P<0. 01)。
实验结果表明:电针关元和中极穴对睾丸功能损害肾阳虚型大鼠具有显著的疗效。这就为临床运用电针关元和中极穴治疗由肾阳虚睾丸生精功能障碍所致的男性不育症提供了客观实验依据，其确切机制有待于进一步深入研究探讨。
, 百拇医药 参考文献
1 郑平东.腺嘌呤诱发睾丸功能损害肾阳虚模型的研究.中国医药学报，1989，4(3):67.
2 陈琼.针灸对肾阳虚睾丸功能损害大鼠作用的实验研究.中国针灸，1996，16(3):37-39.
3 华兴邦.大鼠穴位图谱的研制.实验动物与动物实验，1991，1:1.
4 高慧.电针促进去卵巢大鼠肾上腺增大、血皮质酮含量升高.针刺研究，1995，20(2):55-57.
5 郑平东.腺嘌呤诱发“肾阳虚”动物模型的研制.中国医药学报，1990，5(3):68.
作者单位:430012湖北武汉解放军第457医院
463000河南省驻马店市第一人民医院
(收稿日期:2003-09-25)
(编辑青 山), 百拇医药(杨志豪 蔡培勇)