HPLC法测定黄金搭档组合维生素片中VD3 的含量
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中华实用医药杂志 2003年11月 第3卷 第21期
【摘要】 目的 建立黄金搭档组合维生素片VD 3 含量测定方法。方法 用高效液相色谱法进行分析。色谱柱为硅胶柱(3.9×150)，流动相为正己烷-正辛醇-正戊醇-乙腈(100:0.5:0.5:1)，检测波长VD3 265nm。结果 峰面积与含量有良好的线性(γ VD3 =0.997715);重现性(RSD VD3 =1.64%);回收率(X VD3 93.5%，RSD=0.80%)。结论 该方法稳定，简便易行，快速准确，可作为此片剂质量检测方法。
关键词 黄金搭档组合维生素片 维生素D3 高效液相色谱
【文献标识码】 A 【文章编号】 1609-6614(2003)21-1975-02
Determination of VD 3 in HJDD Vitamins Tablet by HPLC
, http://www.100md.com
Zhang Lianlong，Zhou Huasheng
Wuxi Giant Pharmaceutical CO，LTd，Wuxi214091.
【Abstract】 Objective To establish a HPLC method for determination of VD 3in HJDD.Methods The chroˉmatography condition was:Novapak Silica(3.9×150)，n-Hexane-n-Octyl alcohol-l-Pentanol-Acetonitrile(100:0.5:0.5:1).Detection wavelength was VD 3 265nm.Results The linear is good between area and contents(γ VD3 =0.997715)，The reproduction is good(RSD VD3 =1.64%)，The recovery is good(X VD3 93.5%，RSD=0.80%).Conclusion The method is simple，rapid and accurate.It is applied to determinate contents of VD 3 in HJDD. Key words HJDD VD 3HPLC
, 百拇医药
黄金搭档组合维生素片(HJDD)是由VA、VB 1 、VB 2 、VB 6 、VC、VD3 、VE、叶酸和矿物质钙、铁、锌、硒组成，具有补充中国人普遍缺乏的维生素和矿物质的保健功能。由于成分复杂，相互干扰较大，本文采用高效液相色谱法测定了此片剂中VD 3 的含量。
1 仪器和试药
高效液相色谱仪:Waters515分离单元。紫外双波长检测器:Waters486。电子分析天平:Mettler AE240。VD3 对照品(由Sigma公司提供);黄金搭档组合维生素片(由无锡健特药业有限公司提供)。
2 方法和结果
2.1 色谱条件 色谱柱:硅胶柱，3.9×150。流动相:正己烷-正辛醇-正戊醇-乙腈(100:0.5:0.5:1)。检测波长:VD 3 265nm。流速:1.0ml/min。柱温:35℃。进样体积:10μl
, 百拇医药
2.2 VD3 对照品标准曲线溶液的配制 VD3 对照品标准曲线溶液:取VD3 对照品约10mg，精密称定，置100ml量瓶中，加无水乙醇适量，于60℃水浴超声10min后，迅速冷却至室温，用无水乙醇定容至刻度，摇匀。精密吸取5ml置50ml量瓶中，用无水乙醇稀释并定容至刻度，摇匀，即为对照品贮液。分别精密吸取贮备液1、2、3、5ml置250ml量瓶中，用正己烷稀释并定容至刻度，摇匀，即得对照品溶液A、B、C、D。
2.3 色谱系统的重现性 连续注入对照品溶液B5次，平均相对标准偏差分别为VD3 1.64%。
2.4 VD3 的线性试验 取对照品溶液A、B、C、D分别按色谱条件测定，以峰面积A对进样量C进行回归处理，VD3 浓度0.4～2μg/ml，VD3 的回归方程分别为:A VD3 =2300+ 74900C，r=0.997715(n=5)，图谱见图1。
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图1 VD 3 线性图
2.5 回收率试验 加样回收:取本品20片，精密称定，研细，精称5.0g样品3份于100ml量瓶中作为阳性对照;另精称3.0g样品3份分别加入1.0ml对照品贮备液于100ml量瓶中作为回收试验 [1] ;再精称4.0g样品3份分别加入2.0ml对照品贮备液于100ml量瓶中作为回收试验[2] ，按照含量测定项下的方法制成溶液，进行测定，结果见表1。
表1 VD3 回收率
2.6 黄金搭档中VD 3 的含量测定 (1)对照品溶液配制:同“2.1”项下对照品溶液B。(2)样品溶液配制:取本品10片，精密称定，研细，精称5.0g置100ml量瓶中，加入0.02%氨水10ml、无水乙醇25ml，置60℃水浴超声20min，放冷至室温，精密吸取正己烷20ml于100ml量瓶中，涡漩萃取3min后，静置(必要时低温超声脱气)，取上层液(正己烷层)，用0.45μm微孔滤膜过滤，滤液备HPLC分析用。按色谱条件，分别将对照品溶液B与样品溶液注入高效液相色谱仪，根据峰面积，按外标法计算VD3 的含量。结果见表2。色谱图见图2。
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表2 VD3 在黄金搭档组合维生素片中的含量
3 讨论
3.1 对VD3 的测定有比色法、紫外分光光度法、荧光法、色谱法、电化学法、流动注射分析法，对复方维生素制剂中VD3 的测定，主要采用HPLC法 [1，2] ，但由于不同的产品所含VD3 的含量不同及其它维生素、矿物质种类、含量不同，就需要根据不同的产品对HPLC方法进行改进。
3.2 本品所含的VD3 为包埋的微囊，所以采用0.02%的氨水、无水乙醇为溶剂，在60℃水浴中超声处理，起到破坏微囊的作用。
3.3 本品采用正相色谱法，从反相转换为正相色谱法分析前应先用异丙醇过渡，否则会导致两相不溶而影响检测结果。
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图2 VD3 在黄金搭挡组合维生素片中的色谱图
3.4 由于黄金搭档制剂中VD3 的含量相对较小，信号响应值也很低，为提高其灵敏度和准确度，降低溶剂峰干扰，本法采用波长切换法。详见表3。
表3 波长切换法
参考文献
1 张玫，刘新宇.高效液相色谱法测定维多宝泡腾片中的维生素D3 的含量.上海医药，1998，19(2):36-37.
2 许真之，陈桂良，张顺妹.HPLC测定1α-羟基维生素D3胶丸的含量及含量均匀度.中国药学杂志，1996，31(4):226-228.
作者单位:214091江苏省无锡健特药业有限公司
(编辑罗 彬), 百拇医药(张连龙)
关键词 黄金搭档组合维生素片 维生素D3 高效液相色谱
【文献标识码】 A 【文章编号】 1609-6614(2003)21-1975-02
Determination of VD 3 in HJDD Vitamins Tablet by HPLC
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Zhang Lianlong，Zhou Huasheng
Wuxi Giant Pharmaceutical CO，LTd，Wuxi214091.
【Abstract】 Objective To establish a HPLC method for determination of VD 3in HJDD.Methods The chroˉmatography condition was:Novapak Silica(3.9×150)，n-Hexane-n-Octyl alcohol-l-Pentanol-Acetonitrile(100:0.5:0.5:1).Detection wavelength was VD 3 265nm.Results The linear is good between area and contents(γ VD3 =0.997715)，The reproduction is good(RSD VD3 =1.64%)，The recovery is good(X VD3 93.5%，RSD=0.80%).Conclusion The method is simple，rapid and accurate.It is applied to determinate contents of VD 3 in HJDD. Key words HJDD VD 3HPLC
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黄金搭档组合维生素片(HJDD)是由VA、VB 1 、VB 2 、VB 6 、VC、VD3 、VE、叶酸和矿物质钙、铁、锌、硒组成，具有补充中国人普遍缺乏的维生素和矿物质的保健功能。由于成分复杂，相互干扰较大，本文采用高效液相色谱法测定了此片剂中VD 3 的含量。
1 仪器和试药
高效液相色谱仪:Waters515分离单元。紫外双波长检测器:Waters486。电子分析天平:Mettler AE240。VD3 对照品(由Sigma公司提供);黄金搭档组合维生素片(由无锡健特药业有限公司提供)。
2 方法和结果
2.1 色谱条件 色谱柱:硅胶柱，3.9×150。流动相:正己烷-正辛醇-正戊醇-乙腈(100:0.5:0.5:1)。检测波长:VD 3 265nm。流速:1.0ml/min。柱温:35℃。进样体积:10μl
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2.2 VD3 对照品标准曲线溶液的配制 VD3 对照品标准曲线溶液:取VD3 对照品约10mg，精密称定，置100ml量瓶中，加无水乙醇适量，于60℃水浴超声10min后，迅速冷却至室温，用无水乙醇定容至刻度，摇匀。精密吸取5ml置50ml量瓶中，用无水乙醇稀释并定容至刻度，摇匀，即为对照品贮液。分别精密吸取贮备液1、2、3、5ml置250ml量瓶中，用正己烷稀释并定容至刻度，摇匀，即得对照品溶液A、B、C、D。
2.3 色谱系统的重现性 连续注入对照品溶液B5次，平均相对标准偏差分别为VD3 1.64%。
2.4 VD3 的线性试验 取对照品溶液A、B、C、D分别按色谱条件测定，以峰面积A对进样量C进行回归处理，VD3 浓度0.4～2μg/ml，VD3 的回归方程分别为:A VD3 =2300+ 74900C，r=0.997715(n=5)，图谱见图1。
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图1 VD 3 线性图
2.5 回收率试验 加样回收:取本品20片，精密称定，研细，精称5.0g样品3份于100ml量瓶中作为阳性对照;另精称3.0g样品3份分别加入1.0ml对照品贮备液于100ml量瓶中作为回收试验 [1] ;再精称4.0g样品3份分别加入2.0ml对照品贮备液于100ml量瓶中作为回收试验[2] ，按照含量测定项下的方法制成溶液，进行测定，结果见表1。
表1 VD3 回收率
2.6 黄金搭档中VD 3 的含量测定 (1)对照品溶液配制:同“2.1”项下对照品溶液B。(2)样品溶液配制:取本品10片，精密称定，研细，精称5.0g置100ml量瓶中，加入0.02%氨水10ml、无水乙醇25ml，置60℃水浴超声20min，放冷至室温，精密吸取正己烷20ml于100ml量瓶中，涡漩萃取3min后，静置(必要时低温超声脱气)，取上层液(正己烷层)，用0.45μm微孔滤膜过滤，滤液备HPLC分析用。按色谱条件，分别将对照品溶液B与样品溶液注入高效液相色谱仪，根据峰面积，按外标法计算VD3 的含量。结果见表2。色谱图见图2。
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表2 VD3 在黄金搭档组合维生素片中的含量
3 讨论
3.1 对VD3 的测定有比色法、紫外分光光度法、荧光法、色谱法、电化学法、流动注射分析法，对复方维生素制剂中VD3 的测定，主要采用HPLC法 [1，2] ，但由于不同的产品所含VD3 的含量不同及其它维生素、矿物质种类、含量不同，就需要根据不同的产品对HPLC方法进行改进。
3.2 本品所含的VD3 为包埋的微囊，所以采用0.02%的氨水、无水乙醇为溶剂，在60℃水浴中超声处理，起到破坏微囊的作用。
3.3 本品采用正相色谱法，从反相转换为正相色谱法分析前应先用异丙醇过渡，否则会导致两相不溶而影响检测结果。
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图2 VD3 在黄金搭挡组合维生素片中的色谱图
3.4 由于黄金搭档制剂中VD3 的含量相对较小，信号响应值也很低，为提高其灵敏度和准确度，降低溶剂峰干扰，本法采用波长切换法。详见表3。
表3 波长切换法
参考文献
1 张玫，刘新宇.高效液相色谱法测定维多宝泡腾片中的维生素D3 的含量.上海医药，1998，19(2):36-37.
2 许真之，陈桂良，张顺妹.HPLC测定1α-羟基维生素D3胶丸的含量及含量均匀度.中国药学杂志，1996，31(4):226-228.
作者单位:214091江苏省无锡健特药业有限公司
(编辑罗 彬), 百拇医药(张连龙)