nm23和层粘连蛋白在鼻咽癌转移及预后的预测价值探讨
【摘要】 目的 探讨nm23-H 1 和层粘连蛋白(LN)表达在鼻咽癌(NPC)转移及预后预测中的价值。方法 应用免疫组化S-P法对88例NPC组织蜡块进行nm23-H 1 和LN检测。结果nm23-H 1 表达与性别、临床分期、淋巴结转移、局部复发、远处转移及4年生存率均无关(P>0.05)，LN表达与淋巴结转移、远处转移呈负相关(P<0.05)，而与性别、临床分期、局部复发及4年生存率无关(P>0.05)。结论 nm23-H 1 表达可能与NPC转移及预后无关，基底膜LN的完整程度与肿瘤的侵袭性有关。
关键词 nm23-H 1 层粘连蛋白 鼻咽肿瘤 转移 预后
【文献标识码】 A 【文章编号】 1680-077X(2003)03-0198-03
The predictive value of nm23and laminin on metastasis and
, 百拇医药
prognosis of nasopharyngeal carcinoma
Lai Zhennan，Yu Zhonghua，Huang Yinggui，et al.
Affiliated Hospital of Guangdong Medical College，Zhanjiang524001.
【Abstract】 Objective To assess the predictive value of nm23-H 1 and laminin(LN)as metastasis and progˉnosis markers in nasopharyngeal carcinoma(NPC).Methods The s-p immunohistochemical method was used to deˉtect the expression of nm23-H 1 and LN in88cases of NPC.Results The expression level of nm23-H 1 has no corˉrelation with sex，clinical staging，lymph node metastasis，local recurrence，distant metastasis and4-year surrival rate(P>0.05).Expression of LN has negative relation with lymph node metastasis and distant metastasis(P<0.05)，which has no significant difference with sex，clinical staging，local recurrence and4-year surrival rate(P>0.05).Conclusion Expression of nm23-H 1 has no correlation with metastasis and prognosis in NPC.The absence of LN of basement membrance is correlated with tumor invasion.
, 百拇医药
Key words nm23-H 1 laminin nasopharyngeal carcinoma metastasis prognosis
肿瘤转移严重影响患者的预后，临床上一般据临床分期、病理类型来预测肿瘤的远处转移及预后。目前许多学者正在探讨一些生物学指标(如癌基因等)在肿瘤预后预测中的价值，以期指导临床治疗。我们选择与肿瘤转移密切相关的两个分子生物学指标nm23-H 1 和层粘连蛋白(laminin，LN)，观察两者在鼻咽癌(NPC)中的表达及其与肿瘤转移、预后的关系，并探讨其临床应用价值。
1 材料与方法
1.1 材料 88例鼻咽组织蜡块来自我科1997年2月～1999年10月收治的鼻咽癌患者，均经病理诊断为低分化鳞癌。男68例，女20例，年龄20～74岁，中位年龄近49岁。全部病例接受治疗并随访。
, 百拇医药
1.2 治疗方法 所有病例均为首程治疗。单纯放疗56例，其余32例加用诱导化疗1～2个疗程(方案为DDP+5-Fu)。采用 60 Co-γ线或6MV-X线常规分割放疗，原发灶总剂量64～72Gy/32～36次，颈部转移灶剂量60～70Gy，预防量50～60Gy。
1.3 免疫组化染色 新鲜标本用10%福尔马林固定石蜡包埋，连续切薄片4μm，nm23-H 1及LN免疫组化染色采用S-P法。兔抗人nm23-H 1 单抗及兔抗人LN抗体及试剂盒均为福州迈新生物技术公司产品，操作按说明书进行，以PBS代替第一抗体作阴性对照。
1.4 结果判断 nm23-H 1 阳性产物主要位于胞质中，呈棕色或棕黄色颗粒。随机选取5个高倍视野(×400)计数阳性细胞比例，阳性细胞≤30%定为阴性表达，>30%为阳性表达。LN主要存在于基底膜及部分瘤细胞内，染色为棕色，正常血管基底膜呈连续线状，而癌巢中基底膜多呈间断、不连续或缺失。参考有关文献 [1] ，未见癌周基底膜染色或癌巢内基底膜间断、包绕癌巢不足1/4周为LN阴性表达，癌周基底膜包绕癌巢1/4周以上为LN阳性表达。
, 百拇医药
1.5 统计学分析 采用X 2 检验及确切概率法。
2 结果
2.1 随访结果 本组88例中54例有转移或死亡，随访26～58个月，发生远处转移18例，局部复发10例，已死亡26例。Ⅰ、Ⅱ期、Ⅲ期和Ⅳ期的4年生存率分别为68.7%(11/16)、60.0%(18/30)及43.7%(7/16)。
2.2 nm23-H 1 与LN在鼻咽癌中的表达情况 88例NPC中，nm23-H 1 基因产物的阳性表达率为65.9%(58/88)，LN阳性表达率为36.4%(32/88)，两者均阳性表达20例，两者均阴性表达18例，nm23-H 1 表达与LN表达之间无相互联系(P>0.05)。nm23-H 1 、LN表达与临床病理指标的关系见表1。
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表1 nm23-H 1 、LN表达与临床病理指标的关系略
2.3 nm23-H 1 、LN表达与NPC预后的关系 不管nm23 -H 1 /LN是阳性表达还是阴性表达，其中位生存期、4年生存率之间差异均无显著性(P>0.05)。LN阳性表达者其远处转移率低于阴性者，有统计学意义(P<0.05)。见表2。
表2 nm23-H 1 、LN表达与NPC预后的关系 略
3 讨论
nm23是目前研究较多的与肿瘤转移有关的基因，至少存在H 1 和H 2 两个亚型，其中nm23-H 1 被认为与肿瘤转移关系更为密切。目前可通过杂交分析技术、免疫组化等方法检测nm23基因或其蛋白产物。LN是基底膜的重要构成成分，癌巢周围的LN在阻挡癌的浸润转移中发挥重要作用，有学者发现nm23-H 1 和LN检测有助于判断声门上型喉癌N 0 病例的隐性颈淋巴结转移 [1] 。联合检测nm23-H 1 与LN并观察它们在NPC中的表达及与肿瘤转移、预后的关系，国内少见报道。
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1988年Steeg首先分离并鉴定出nm23基因，发现它与肿瘤转移潜能有关，并在人类肿瘤中观察到nm23-H 1 表达 水平与肿瘤转移呈负相关 [2] 。随后一些学者在乳腺癌、胃癌、大肠癌等肿瘤中发现nm23-H 1 表达水平与淋巴结转移、组织学分级及预后有关，nm23-H 1 低表达者淋巴结转移及远处转移率高，预后较差，高表达者则反之。因而nm23基因被认为是肿瘤转移抑制基因的最佳代表。
然而另一些研究却得出不同或相反的结论。有人发现nm23-H 1 表达水平与乳腺癌淋巴结状态、细胞分化程度及雌激素受体无任何联系 [3] 。Hant发现与正常结肠粘膜相比，大肠癌与大肠息肉其nm23-H 1 基因均表达增强，有无发生转移均增强表达 [4] 。随后有学者采用免疫组化法检测大肠癌nm23-H1 ，发现其表达与大肠癌分期、细胞增殖指数及术后存活时间无关 [5] 。特别是在肺癌，很多研究结果说明nm23与肿瘤转移无关 [6] 。笔者通过免疫组化法检测nm23-H 1 产物蛋白其阳性表达率为65.9%，nm23-H 1 表达与性别、临床分期、淋巴结转移、鼻咽局部复发及远处转移均无关，nm23-H 1 阳性表达组其中位生存期、4年生存率及远处转移率与阴性表达组比较差异均无显著性(P>0.05)，此结果与国内郭翔[7] 的研究结果不同。
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近10年来，对nm23基因的研究涉及从基础到临床、从蛋白水平到mRNA的水平、从离体细胞、实验动物模型到人体肿瘤，得出的结论却不一致，甚至有的学者认为nm23基因能促进肿瘤转移。产生这种局面的原因可能有:(1)很多研究采用的免疫组化方法，受影响因素多，稳定性不尽人意;(2)阳性标准不统一，结果可比性差;(3)研究样本或病例数不足。
LN是细胞外基质的重要构成成分，由基膜上的上皮细胞及内皮细胞合成。LN通过与其受体结合介导癌细胞对基质的附着，然后由癌细胞分泌蛋白溶解酶使LN降解、基膜破坏。临床病理学研究证实在癌巢基底膜LN存在明显的缺损或缺失，LN的表达与癌的分化、浸润转移有关 [8，9] 。杨安奎发现层粘连蛋白表达与喉癌淋巴结转移呈负相关，并认为联合nm23-H 1 检测可用于指导对声门上型喉癌N 0 病例应用选择性颈清扫术 [1] 。本研究结果显示，N 0组癌巢基底膜LN阳性率显著高于N 1 、N 2 组，无远处转移组LN阳性显著高于有远处转移组(P<0.05)，说明癌巢基底膜LN表达与NPC淋巴结转移、远处转移呈负相关，但未发现LN表达与NPC的中位生存期、4年生存率相关。
, 百拇医药
综上所述，LN阳性表达与淋巴结转移、远处转移呈负相关，而与预后无关。nm23表达可能与鼻咽癌转移及预后无关。且LN表达与nm23表达无相关性，故它们在鼻咽癌转移及预后预测中的价值尚待进一步研究证实。
参考文献
1 杨安奎，曾宗渊，陈福进.nm23-H 1 和层粘连蛋白表达预测声门上喉癌隐性颈淋巴结转移及其临床意义.癌症，1999，18(4):432-434.
2 Steeg PS，cohn KH，Leone A.Tumor metastasis and nm23:current conˉcepts.Cancer Cells，1991，3(7):257-262.
3 Sastre-Garan X，Lacombe ML，Jonve M，et al.Nucleoside diphosˉphatekinase/nm23expression in breast cancer:Lack of correlation with lymph-node metastasis.Int J Cancer，1992，50(4):533-538.
, 百拇医药
4 Haut M，Steeg PS，Willson S，et al.Induction of nm23gene expressions in human colonic neoplasms and equal expression in colon tumors of high and low metastatic potential.J Natl Cancer Inst，1991，83(10):712-716.
5 Lindmark G.Nm23-H 1 immunohistochemistry is not useful as predictor of metastatic potential of colorectal cancer.Br J Cancer，1996，74(9):1413-1418.
6 陈仲敏，何常，胡系伟，等.nm23基因在肺鳞状细胞癌中的表达.实用癌症杂志，1999，14(2):99-100.
, http://www.100md.com
7 郭翔，闵华庆，邵建永，等.nm23-H 1 基因产物在人鼻咽癌中的表达及其临床意义.癌症，1997，16(2):119-221.
8 周国雄，毛毓斌，鄂群.胃癌基底膜蛋白的分布及其生物学意义.南通医学报学报，1993，13(4):.338-340.
9 肖芹，顾学文，成自鸣，等.基底膜层粘蛋白和Ⅳ型胶原表达与喉乳头状瘤生物学行为的关系.实用癌症杂志，2001，16(5):495-497.
作者单位:1 524001广东医学院附属医院
2 524023广东医学院病理学教研室
(收稿日期:2002-11-13)
(编辑 梅燕), http://www.100md.com(赖振南 余忠华 黄应桂 姚运红)
关键词 nm23-H 1 层粘连蛋白 鼻咽肿瘤 转移 预后
【文献标识码】 A 【文章编号】 1680-077X(2003)03-0198-03
The predictive value of nm23and laminin on metastasis and
, 百拇医药
prognosis of nasopharyngeal carcinoma
Lai Zhennan，Yu Zhonghua，Huang Yinggui，et al.
Affiliated Hospital of Guangdong Medical College，Zhanjiang524001.
【Abstract】 Objective To assess the predictive value of nm23-H 1 and laminin(LN)as metastasis and progˉnosis markers in nasopharyngeal carcinoma(NPC).Methods The s-p immunohistochemical method was used to deˉtect the expression of nm23-H 1 and LN in88cases of NPC.Results The expression level of nm23-H 1 has no corˉrelation with sex，clinical staging，lymph node metastasis，local recurrence，distant metastasis and4-year surrival rate(P>0.05).Expression of LN has negative relation with lymph node metastasis and distant metastasis(P<0.05)，which has no significant difference with sex，clinical staging，local recurrence and4-year surrival rate(P>0.05).Conclusion Expression of nm23-H 1 has no correlation with metastasis and prognosis in NPC.The absence of LN of basement membrance is correlated with tumor invasion.
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Key words nm23-H 1 laminin nasopharyngeal carcinoma metastasis prognosis
肿瘤转移严重影响患者的预后，临床上一般据临床分期、病理类型来预测肿瘤的远处转移及预后。目前许多学者正在探讨一些生物学指标(如癌基因等)在肿瘤预后预测中的价值，以期指导临床治疗。我们选择与肿瘤转移密切相关的两个分子生物学指标nm23-H 1 和层粘连蛋白(laminin，LN)，观察两者在鼻咽癌(NPC)中的表达及其与肿瘤转移、预后的关系，并探讨其临床应用价值。
1 材料与方法
1.1 材料 88例鼻咽组织蜡块来自我科1997年2月～1999年10月收治的鼻咽癌患者，均经病理诊断为低分化鳞癌。男68例，女20例，年龄20～74岁，中位年龄近49岁。全部病例接受治疗并随访。
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1.2 治疗方法 所有病例均为首程治疗。单纯放疗56例，其余32例加用诱导化疗1～2个疗程(方案为DDP+5-Fu)。采用 60 Co-γ线或6MV-X线常规分割放疗，原发灶总剂量64～72Gy/32～36次，颈部转移灶剂量60～70Gy，预防量50～60Gy。
1.3 免疫组化染色 新鲜标本用10%福尔马林固定石蜡包埋，连续切薄片4μm，nm23-H 1及LN免疫组化染色采用S-P法。兔抗人nm23-H 1 单抗及兔抗人LN抗体及试剂盒均为福州迈新生物技术公司产品，操作按说明书进行，以PBS代替第一抗体作阴性对照。
1.4 结果判断 nm23-H 1 阳性产物主要位于胞质中，呈棕色或棕黄色颗粒。随机选取5个高倍视野(×400)计数阳性细胞比例，阳性细胞≤30%定为阴性表达，>30%为阳性表达。LN主要存在于基底膜及部分瘤细胞内，染色为棕色，正常血管基底膜呈连续线状，而癌巢中基底膜多呈间断、不连续或缺失。参考有关文献 [1] ，未见癌周基底膜染色或癌巢内基底膜间断、包绕癌巢不足1/4周为LN阴性表达，癌周基底膜包绕癌巢1/4周以上为LN阳性表达。
, 百拇医药
1.5 统计学分析 采用X 2 检验及确切概率法。
2 结果
2.1 随访结果 本组88例中54例有转移或死亡，随访26～58个月，发生远处转移18例，局部复发10例，已死亡26例。Ⅰ、Ⅱ期、Ⅲ期和Ⅳ期的4年生存率分别为68.7%(11/16)、60.0%(18/30)及43.7%(7/16)。
2.2 nm23-H 1 与LN在鼻咽癌中的表达情况 88例NPC中，nm23-H 1 基因产物的阳性表达率为65.9%(58/88)，LN阳性表达率为36.4%(32/88)，两者均阳性表达20例，两者均阴性表达18例，nm23-H 1 表达与LN表达之间无相互联系(P>0.05)。nm23-H 1 、LN表达与临床病理指标的关系见表1。
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表1 nm23-H 1 、LN表达与临床病理指标的关系略
2.3 nm23-H 1 、LN表达与NPC预后的关系 不管nm23 -H 1 /LN是阳性表达还是阴性表达，其中位生存期、4年生存率之间差异均无显著性(P>0.05)。LN阳性表达者其远处转移率低于阴性者，有统计学意义(P<0.05)。见表2。
表2 nm23-H 1 、LN表达与NPC预后的关系 略
3 讨论
nm23是目前研究较多的与肿瘤转移有关的基因，至少存在H 1 和H 2 两个亚型，其中nm23-H 1 被认为与肿瘤转移关系更为密切。目前可通过杂交分析技术、免疫组化等方法检测nm23基因或其蛋白产物。LN是基底膜的重要构成成分，癌巢周围的LN在阻挡癌的浸润转移中发挥重要作用，有学者发现nm23-H 1 和LN检测有助于判断声门上型喉癌N 0 病例的隐性颈淋巴结转移 [1] 。联合检测nm23-H 1 与LN并观察它们在NPC中的表达及与肿瘤转移、预后的关系，国内少见报道。
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1988年Steeg首先分离并鉴定出nm23基因，发现它与肿瘤转移潜能有关，并在人类肿瘤中观察到nm23-H 1 表达 水平与肿瘤转移呈负相关 [2] 。随后一些学者在乳腺癌、胃癌、大肠癌等肿瘤中发现nm23-H 1 表达水平与淋巴结转移、组织学分级及预后有关，nm23-H 1 低表达者淋巴结转移及远处转移率高，预后较差，高表达者则反之。因而nm23基因被认为是肿瘤转移抑制基因的最佳代表。
然而另一些研究却得出不同或相反的结论。有人发现nm23-H 1 表达水平与乳腺癌淋巴结状态、细胞分化程度及雌激素受体无任何联系 [3] 。Hant发现与正常结肠粘膜相比，大肠癌与大肠息肉其nm23-H 1 基因均表达增强，有无发生转移均增强表达 [4] 。随后有学者采用免疫组化法检测大肠癌nm23-H1 ，发现其表达与大肠癌分期、细胞增殖指数及术后存活时间无关 [5] 。特别是在肺癌，很多研究结果说明nm23与肿瘤转移无关 [6] 。笔者通过免疫组化法检测nm23-H 1 产物蛋白其阳性表达率为65.9%，nm23-H 1 表达与性别、临床分期、淋巴结转移、鼻咽局部复发及远处转移均无关，nm23-H 1 阳性表达组其中位生存期、4年生存率及远处转移率与阴性表达组比较差异均无显著性(P>0.05)，此结果与国内郭翔[7] 的研究结果不同。
, http://www.100md.com
近10年来，对nm23基因的研究涉及从基础到临床、从蛋白水平到mRNA的水平、从离体细胞、实验动物模型到人体肿瘤，得出的结论却不一致，甚至有的学者认为nm23基因能促进肿瘤转移。产生这种局面的原因可能有:(1)很多研究采用的免疫组化方法，受影响因素多，稳定性不尽人意;(2)阳性标准不统一，结果可比性差;(3)研究样本或病例数不足。
LN是细胞外基质的重要构成成分，由基膜上的上皮细胞及内皮细胞合成。LN通过与其受体结合介导癌细胞对基质的附着，然后由癌细胞分泌蛋白溶解酶使LN降解、基膜破坏。临床病理学研究证实在癌巢基底膜LN存在明显的缺损或缺失，LN的表达与癌的分化、浸润转移有关 [8，9] 。杨安奎发现层粘连蛋白表达与喉癌淋巴结转移呈负相关，并认为联合nm23-H 1 检测可用于指导对声门上型喉癌N 0 病例应用选择性颈清扫术 [1] 。本研究结果显示，N 0组癌巢基底膜LN阳性率显著高于N 1 、N 2 组，无远处转移组LN阳性显著高于有远处转移组(P<0.05)，说明癌巢基底膜LN表达与NPC淋巴结转移、远处转移呈负相关，但未发现LN表达与NPC的中位生存期、4年生存率相关。
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综上所述，LN阳性表达与淋巴结转移、远处转移呈负相关，而与预后无关。nm23表达可能与鼻咽癌转移及预后无关。且LN表达与nm23表达无相关性，故它们在鼻咽癌转移及预后预测中的价值尚待进一步研究证实。
参考文献
1 杨安奎，曾宗渊，陈福进.nm23-H 1 和层粘连蛋白表达预测声门上喉癌隐性颈淋巴结转移及其临床意义.癌症，1999，18(4):432-434.
2 Steeg PS，cohn KH，Leone A.Tumor metastasis and nm23:current conˉcepts.Cancer Cells，1991，3(7):257-262.
3 Sastre-Garan X，Lacombe ML，Jonve M，et al.Nucleoside diphosˉphatekinase/nm23expression in breast cancer:Lack of correlation with lymph-node metastasis.Int J Cancer，1992，50(4):533-538.
, 百拇医药
4 Haut M，Steeg PS，Willson S，et al.Induction of nm23gene expressions in human colonic neoplasms and equal expression in colon tumors of high and low metastatic potential.J Natl Cancer Inst，1991，83(10):712-716.
5 Lindmark G.Nm23-H 1 immunohistochemistry is not useful as predictor of metastatic potential of colorectal cancer.Br J Cancer，1996，74(9):1413-1418.
6 陈仲敏，何常，胡系伟，等.nm23基因在肺鳞状细胞癌中的表达.实用癌症杂志，1999，14(2):99-100.
, http://www.100md.com
7 郭翔，闵华庆，邵建永，等.nm23-H 1 基因产物在人鼻咽癌中的表达及其临床意义.癌症，1997，16(2):119-221.
8 周国雄，毛毓斌，鄂群.胃癌基底膜蛋白的分布及其生物学意义.南通医学报学报，1993，13(4):.338-340.
9 肖芹，顾学文，成自鸣，等.基底膜层粘蛋白和Ⅳ型胶原表达与喉乳头状瘤生物学行为的关系.实用癌症杂志，2001，16(5):495-497.
作者单位:1 524001广东医学院附属医院
2 524023广东医学院病理学教研室
(收稿日期:2002-11-13)
(编辑 梅燕), http://www.100md.com(赖振南 余忠华 黄应桂 姚运红)