补血愈障口服液制剂工艺研究
【文献标识码】 B 【文章编号】1606-8106(2003)24-3299-04
补血愈障口服液由当归、枸杞、青蒿、丹参、制马钱子组成，具有补肾活血、通络益髓之功效。主治急、慢性再生障碍性贫血，经多年临床应用，疗效确切。为更好地保证制剂质量，扩大生产，我们采用正交实验法优选了该口服液的最佳工艺条件。
1 实验材料
1.1 仪器 CS-9301型薄层扫描仪(日本岛津);三相紫外灯(上海顾村);电光分析天平、电子酸度计、干燥箱(上海分析仪器厂)等。
1.2 试剂 硅胶G(青岛海洋化工厂);阿魏酸(中国生物制品鉴定所提供，批号:0204012);其他试剂均为分析纯;试验药材均为饮片(购自本院中药房并经鉴定)。
2 实验方法
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2.1 正交设计
2.1.1 因素及水平 为优化生产工艺，根据处方中药材含有效成分的理化性质，青蒿、当归，含有一定的挥发性成分，可采用蒸馏法提取，其它有效成分(如黄酮类、阿魏酸等成分)具水溶性，可用水煎煮提取。枸杞、丹参、马钱子主要有效成分均具有水溶性，可用水提取。
2.1.1.1 挥发性成分的提取 挥发油的蒸馏量与蒸馏时间有一定的关系，蒸馏时间短，挥发油提取不完全，蒸馏时间长，蒸馏体积较大，耗能费时，工作量加大。为此，对蒸馏时间进行考察。方法如下:按处方比例取一定量的青蒿、当归药材，加10倍量水，浸透，蒸馏，分不同时间收集蒸馏液，并测定蒸馏液中挥发油的量，计算挥发油提取率，结果见表1。
表1挥发油提取率考察结果
上表结果表明，收集相当药材5倍量体积的蒸馏液时， 基本提尽挥发性成分。由于收集的芳香水体积较大，不利于配液，应浓缩成适宜的体积，通过实验考察，收集相当原药材3倍量的芳香水较合适。
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2.1.1.2 提取工艺考察 提取挥发油后的青蒿、当归药渣与枸杞、丹参、马钱子合并，用水共同煎煮，以出膏率、阿魏酸的提取率为指标，采用4因素3水平正交实验，对加水量、浸泡时间、提取时间、提取次数进行考察。阿魏酸提取率按文献测定 [1] ，结果见表2、表3。出膏率方差分析结果见表4、表5。
表2 水提取正交实验因素、水平
表3 水提取正交试验及结果
表4 出膏率方差分析结果
2.2 阿魏酸含量测定
2.2.1 供试品溶液及对照品溶液的制备 供试品溶液的制备:取本品口服液10ml，以IN硫酸调pH至2，分别用乙酸乙酯提取的样品杂质较少，阿魏酸斑点清晰，分离较好，确定用乙酸乙酯20、10、10、10ml，分别萃取，合并乙酸乙酯液，合并浓缩至5ml，作为供试品溶液。阴性对照品溶液的制备:取缺当归阴性口服液10ml，同供试品溶液制备方法操作，制得缺当归阴性对照品溶液。阿魏酸对照品溶液的制备:精密称取干燥恒重的阿魏酸标准品5.2mg，置5ml量瓶中，加乙醇至刻度，配制成每1ml含1.04mg的阿魏酸对照品溶液。
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2.2.2 层析条件及测定波长的选择 吸取供试品溶液点 于含0.3%羧甲基纤维素纳的硅胶G薄层板上，置层析缸中，用表1展开剂，展开，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视，结果以苯—乙酸乙酯—甲酸(5:2:1)为展开剂，阿魏酸斑点集中，分离最好。
表6 展开剂的考察
准确吸取供试品溶液，缺当归阴性对照溶液及阿魏酸对照品溶液各5μl，分别点于同一含0.3%羧甲基纤维素钠薄层板上，以苯-乙酸乙酯-甲酸(5:2:1)为展开剂，展开，取出，晾干。置CS-9301型薄层扫描仪上，进行扫描，结果表明，供试品色谱中阿魏酸斑点，最大吸收波长与阿魏酸对照品斑点最大吸收波长一致，故选择测定波长为λs=322nm，参比波长λ R=260nm。供试品色谱中阿魏酸斑点分离较好，而缺当归阴性对照液在该处基本无吸收。
2.2.3 标准曲线制备 准确吸取阿魏酸对照品溶液2、4、6、8、10μl，分别点于同一薄层板上，以苯-乙酸乙酯-甲酸(5:2:1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下定位。照中国药典2000年版一部附录VIB薄层扫描方法进行扫描，波长λs=322nm，参比波长λ R =260nm。以对照品的面积积分值为纵坐标，点样量为横坐标，绘制标准曲线，回归程为Y=0.012x+0.0419，r=0.9938。结果阿魏酸点样量在0.208～1.04μg范围内与面积积分值呈良好的线性关系。
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2.2.4 样品中阿魏酸的含量测定 精密吸取2.2.1项下供试品溶液6μl，按标准曲线项下方法进行测定，并计算含量。
2.3 制备工艺条件的优选 以阿魏酸含量为指标，根据正交试验和方差分析结果可知:因素B、C对提取工艺有显著性影响，各选取B 3 、C 3 因素;A、D无显著性影响，从生产实际考虑选择A 2 、D 2 ;故提取工艺条件为:A 2 B 3 C 3 D 2 。
3 讨论
本组方中当归为主药，我们选择其有效成分阿魏酸正 交试验的优选指标。在确定了制备工艺优选条件的情况下，我们采用了A 2 B 3 C 3 D 2 工艺进行试验，结果表明阿魏酸含量0.058mg/ml，提取较完全，试验稳定性好。本实验研究从实际出发，不断提高本质剂的临床疗效和质量稳定性，对指导生产具有实际意义。
参考文献
1 陈雪，方彬.十全大补口服液中阿魏酸的含量测定.山东医药工业，1989，(3):30.
作者单位:261031山东潍坊医学院附属医院
(编辑曲 全), http://www.100md.com(李汉高)
补血愈障口服液由当归、枸杞、青蒿、丹参、制马钱子组成，具有补肾活血、通络益髓之功效。主治急、慢性再生障碍性贫血，经多年临床应用，疗效确切。为更好地保证制剂质量，扩大生产，我们采用正交实验法优选了该口服液的最佳工艺条件。
1 实验材料
1.1 仪器 CS-9301型薄层扫描仪(日本岛津);三相紫外灯(上海顾村);电光分析天平、电子酸度计、干燥箱(上海分析仪器厂)等。
1.2 试剂 硅胶G(青岛海洋化工厂);阿魏酸(中国生物制品鉴定所提供，批号:0204012);其他试剂均为分析纯;试验药材均为饮片(购自本院中药房并经鉴定)。
2 实验方法
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2.1 正交设计
2.1.1 因素及水平 为优化生产工艺，根据处方中药材含有效成分的理化性质，青蒿、当归，含有一定的挥发性成分，可采用蒸馏法提取，其它有效成分(如黄酮类、阿魏酸等成分)具水溶性，可用水煎煮提取。枸杞、丹参、马钱子主要有效成分均具有水溶性，可用水提取。
2.1.1.1 挥发性成分的提取 挥发油的蒸馏量与蒸馏时间有一定的关系，蒸馏时间短，挥发油提取不完全，蒸馏时间长，蒸馏体积较大，耗能费时，工作量加大。为此，对蒸馏时间进行考察。方法如下:按处方比例取一定量的青蒿、当归药材，加10倍量水，浸透，蒸馏，分不同时间收集蒸馏液，并测定蒸馏液中挥发油的量，计算挥发油提取率，结果见表1。
表1挥发油提取率考察结果
上表结果表明，收集相当药材5倍量体积的蒸馏液时， 基本提尽挥发性成分。由于收集的芳香水体积较大，不利于配液，应浓缩成适宜的体积，通过实验考察，收集相当原药材3倍量的芳香水较合适。
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2.1.1.2 提取工艺考察 提取挥发油后的青蒿、当归药渣与枸杞、丹参、马钱子合并，用水共同煎煮，以出膏率、阿魏酸的提取率为指标，采用4因素3水平正交实验，对加水量、浸泡时间、提取时间、提取次数进行考察。阿魏酸提取率按文献测定 [1] ，结果见表2、表3。出膏率方差分析结果见表4、表5。
表2 水提取正交实验因素、水平
表3 水提取正交试验及结果
表4 出膏率方差分析结果
2.2 阿魏酸含量测定
2.2.1 供试品溶液及对照品溶液的制备 供试品溶液的制备:取本品口服液10ml，以IN硫酸调pH至2，分别用乙酸乙酯提取的样品杂质较少，阿魏酸斑点清晰，分离较好，确定用乙酸乙酯20、10、10、10ml，分别萃取，合并乙酸乙酯液，合并浓缩至5ml，作为供试品溶液。阴性对照品溶液的制备:取缺当归阴性口服液10ml，同供试品溶液制备方法操作，制得缺当归阴性对照品溶液。阿魏酸对照品溶液的制备:精密称取干燥恒重的阿魏酸标准品5.2mg，置5ml量瓶中，加乙醇至刻度，配制成每1ml含1.04mg的阿魏酸对照品溶液。
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2.2.2 层析条件及测定波长的选择 吸取供试品溶液点 于含0.3%羧甲基纤维素纳的硅胶G薄层板上，置层析缸中，用表1展开剂，展开，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视，结果以苯—乙酸乙酯—甲酸(5:2:1)为展开剂，阿魏酸斑点集中，分离最好。
表6 展开剂的考察
准确吸取供试品溶液，缺当归阴性对照溶液及阿魏酸对照品溶液各5μl，分别点于同一含0.3%羧甲基纤维素钠薄层板上，以苯-乙酸乙酯-甲酸(5:2:1)为展开剂，展开，取出，晾干。置CS-9301型薄层扫描仪上，进行扫描，结果表明，供试品色谱中阿魏酸斑点，最大吸收波长与阿魏酸对照品斑点最大吸收波长一致，故选择测定波长为λs=322nm，参比波长λ R=260nm。供试品色谱中阿魏酸斑点分离较好，而缺当归阴性对照液在该处基本无吸收。
2.2.3 标准曲线制备 准确吸取阿魏酸对照品溶液2、4、6、8、10μl，分别点于同一薄层板上，以苯-乙酸乙酯-甲酸(5:2:1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下定位。照中国药典2000年版一部附录VIB薄层扫描方法进行扫描，波长λs=322nm，参比波长λ R =260nm。以对照品的面积积分值为纵坐标，点样量为横坐标，绘制标准曲线，回归程为Y=0.012x+0.0419，r=0.9938。结果阿魏酸点样量在0.208～1.04μg范围内与面积积分值呈良好的线性关系。
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2.2.4 样品中阿魏酸的含量测定 精密吸取2.2.1项下供试品溶液6μl，按标准曲线项下方法进行测定，并计算含量。
2.3 制备工艺条件的优选 以阿魏酸含量为指标，根据正交试验和方差分析结果可知:因素B、C对提取工艺有显著性影响，各选取B 3 、C 3 因素;A、D无显著性影响，从生产实际考虑选择A 2 、D 2 ;故提取工艺条件为:A 2 B 3 C 3 D 2 。
3 讨论
本组方中当归为主药，我们选择其有效成分阿魏酸正 交试验的优选指标。在确定了制备工艺优选条件的情况下，我们采用了A 2 B 3 C 3 D 2 工艺进行试验，结果表明阿魏酸含量0.058mg/ml，提取较完全，试验稳定性好。本实验研究从实际出发，不断提高本质剂的临床疗效和质量稳定性，对指导生产具有实际意义。
参考文献
1 陈雪，方彬.十全大补口服液中阿魏酸的含量测定.山东医药工业，1989，(3):30.
作者单位:261031山东潍坊医学院附属医院
(编辑曲 全), http://www.100md.com(李汉高)