评估放免试验效果的几点体会
【文献标识码】 B 【文章编号】 1680-6115(2004)03-0258-02
任何检验方法都具其质控办法，归纳起来不外乎于有关精密度、准确度、特异性及重现性等几方面。放免亦如此，但这些指标计算起来比较繁琐，只适合于方法学的研究和药盒厂家。在实际工作中很难做到，尤其放免检验，因其受试剂数量的限制，药盒也昂贵。现就如何评估每次放免试验效果谈几点体会。
1 试剂盒质量的评估
随着放免检验技术的普及与发展，药盒生产厂家也日益增多，其中的质量良莠不齐，因此我们应掌握一套简单地评估药盒质量的方法。
1.1 非特异性结合率(NSB) 即只含有标记抗原而不含抗体和待测物(标准品)管的结合率。一般要求:二抗作为分离剂的方法应<5%，PEG十二抗的方法不能>10%。NSB升高常见的原因有:(1)由于标记物放射性自损伤，脱碘所致;(2)试管内壁的光滑度及保护蛋白的浓度;(3)分离剂的浓度过高。因此可作为衡量标记物质量的一个指标。
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1.2 “Bo”结合率 也称反应最大结合率即标记抗原与相应的限量抗体反应达到平衡时的结合率，一般要求在30%～70%之间。Bo结合率过高主要原因有:抗体浓度相对过高或分离剂浓度过高，这样会影响试验方法的灵敏度。Bo结合率降低主要原因有:抗体浓度偏低，标记抗原部分失活，分离剂浓度偏低及反应未达到平衡状态等。是衡量标记物及抗体质量的有用指标。
1.3 ED 25 、ED 50 、ED 75 的测定监测曲线的漂移情况 即试剂盒的稳定或重现性。竞争放免分析的曲线不论是四参数拟合，还是logit拟合均呈反“S”型，不是一条直线，因此需要高、中、低三点来确定曲线的性质。我们在实际工作中会遇到以下几种情况，标准曲线右移说明标准品有部分失活，曲线左移示标记抗原部分失活，同前几次实验比较曲线间有部分重叠或交叉一般是由于操作误差所致。
1.4 替代比例 标准品最低浓度点与最高浓度点结合率之比，一般要求>4。其反应是曲、线斜率，一定程度上也反映了试验方法的灵敏度和工作范围。一个良好的试剂盒低浓度点的结合率应在80%以上，最高浓度点的结合率应<20%(指标准物的浓度而言)。但有时由于试剂保存不当如反复冻溶，或放置室温时间过长等因素，可使标准品完全或部分失活使曲线呈高平线，标记抗原失活导致低平线。
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2 工作人员本身的质量控制
主要包括样品的预处理、加样误差，结合与游离部分的分离是否完全，测量误差及工作人员的工作作风和责任心等方面。这里我只谈一下加样误差及质控血清的应用。
2.1 精密度的控制 精密度是衡量随机误差的主要指标，有条件的实验室可用精密度图来控制。这里介绍一种简单 的方法来评估由于加样而引起的随机误差即复管的一致性。具体的计算方法是:|x 1 -x 2 |2ˉx ×100%=|x 1 -x 2 |ˉx ×100%，此值要求<10%实际上就是该剂量点的变异系数。式中的x 1 和x 2 分别是某一剂量点(待测标本)复管的CPM计算值，为其平均值。复管的一致性主要反应的是工作人员的加样误差。若此值>10%的话，则应作为“坏点”剔除。也有人用“反应误差相关”RER来表示，但其反应的是整体误差，决定整批试验的取舍，在实际工作中由于放免试剂较贵，数量的限制，计算也较复杂，本人趋向于采用前者(要求RER值<0.04)。
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2.2 质控血清的应用 质控血清是我们检验工作中最有效，最有用的指标之一。(1)高、中、低浓度3个质控血清6个测定值(复管)，一般情况下有的高于期望值，有的低于期望值，且均在ˉx±2s范围内，这种情况说明无明显异常。(2)6个测定值中有较多超过期望值的ˉx±2s，甚至ˉx±3s，但无偏向一侧的趋势，说明随机误差太大。若前述复管精密度无异常应考虑会弃全部数据，重作试验。(3)6个测定值中大多数偏向期望值一侧，且取三个质控血清各自测定值的均数，结果均偏向一侧，则提示有系统误差。若有下列情况之一者，应考虑会弃整批数握。①3个均数中有一超过期望值的ˉx±3s;②3个均值中有两个均值超过期望值ˉx±2s;③3个均值均超过ˉx±s。(4)若两个质控样品正常，而另一个质控样品测定值均明显偏向一侧且相当一致。原因可能是标准曲线问题，也可能是质控血清变质所致。
作者单位:101300北京首都医科大学顺义校区检验系
(收稿日期:2003-11-01)
(编辑宓士军), http://www.100md.com(任立平)
任何检验方法都具其质控办法，归纳起来不外乎于有关精密度、准确度、特异性及重现性等几方面。放免亦如此，但这些指标计算起来比较繁琐，只适合于方法学的研究和药盒厂家。在实际工作中很难做到，尤其放免检验，因其受试剂数量的限制，药盒也昂贵。现就如何评估每次放免试验效果谈几点体会。
1 试剂盒质量的评估
随着放免检验技术的普及与发展，药盒生产厂家也日益增多，其中的质量良莠不齐，因此我们应掌握一套简单地评估药盒质量的方法。
1.1 非特异性结合率(NSB) 即只含有标记抗原而不含抗体和待测物(标准品)管的结合率。一般要求:二抗作为分离剂的方法应<5%，PEG十二抗的方法不能>10%。NSB升高常见的原因有:(1)由于标记物放射性自损伤，脱碘所致;(2)试管内壁的光滑度及保护蛋白的浓度;(3)分离剂的浓度过高。因此可作为衡量标记物质量的一个指标。
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1.2 “Bo”结合率 也称反应最大结合率即标记抗原与相应的限量抗体反应达到平衡时的结合率，一般要求在30%～70%之间。Bo结合率过高主要原因有:抗体浓度相对过高或分离剂浓度过高，这样会影响试验方法的灵敏度。Bo结合率降低主要原因有:抗体浓度偏低，标记抗原部分失活，分离剂浓度偏低及反应未达到平衡状态等。是衡量标记物及抗体质量的有用指标。
1.3 ED 25 、ED 50 、ED 75 的测定监测曲线的漂移情况 即试剂盒的稳定或重现性。竞争放免分析的曲线不论是四参数拟合，还是logit拟合均呈反“S”型，不是一条直线，因此需要高、中、低三点来确定曲线的性质。我们在实际工作中会遇到以下几种情况，标准曲线右移说明标准品有部分失活，曲线左移示标记抗原部分失活，同前几次实验比较曲线间有部分重叠或交叉一般是由于操作误差所致。
1.4 替代比例 标准品最低浓度点与最高浓度点结合率之比，一般要求>4。其反应是曲、线斜率，一定程度上也反映了试验方法的灵敏度和工作范围。一个良好的试剂盒低浓度点的结合率应在80%以上，最高浓度点的结合率应<20%(指标准物的浓度而言)。但有时由于试剂保存不当如反复冻溶，或放置室温时间过长等因素，可使标准品完全或部分失活使曲线呈高平线，标记抗原失活导致低平线。
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2 工作人员本身的质量控制
主要包括样品的预处理、加样误差，结合与游离部分的分离是否完全，测量误差及工作人员的工作作风和责任心等方面。这里我只谈一下加样误差及质控血清的应用。
2.1 精密度的控制 精密度是衡量随机误差的主要指标，有条件的实验室可用精密度图来控制。这里介绍一种简单 的方法来评估由于加样而引起的随机误差即复管的一致性。具体的计算方法是:|x 1 -x 2 |2ˉx ×100%=|x 1 -x 2 |ˉx ×100%，此值要求<10%实际上就是该剂量点的变异系数。式中的x 1 和x 2 分别是某一剂量点(待测标本)复管的CPM计算值，为其平均值。复管的一致性主要反应的是工作人员的加样误差。若此值>10%的话，则应作为“坏点”剔除。也有人用“反应误差相关”RER来表示，但其反应的是整体误差，决定整批试验的取舍，在实际工作中由于放免试剂较贵，数量的限制，计算也较复杂，本人趋向于采用前者(要求RER值<0.04)。
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2.2 质控血清的应用 质控血清是我们检验工作中最有效，最有用的指标之一。(1)高、中、低浓度3个质控血清6个测定值(复管)，一般情况下有的高于期望值，有的低于期望值，且均在ˉx±2s范围内，这种情况说明无明显异常。(2)6个测定值中有较多超过期望值的ˉx±2s，甚至ˉx±3s，但无偏向一侧的趋势，说明随机误差太大。若前述复管精密度无异常应考虑会弃全部数据，重作试验。(3)6个测定值中大多数偏向期望值一侧，且取三个质控血清各自测定值的均数，结果均偏向一侧，则提示有系统误差。若有下列情况之一者，应考虑会弃整批数握。①3个均数中有一超过期望值的ˉx±3s;②3个均值中有两个均值超过期望值ˉx±2s;③3个均值均超过ˉx±s。(4)若两个质控样品正常，而另一个质控样品测定值均明显偏向一侧且相当一致。原因可能是标准曲线问题，也可能是质控血清变质所致。
作者单位:101300北京首都医科大学顺义校区检验系
(收稿日期:2003-11-01)
(编辑宓士军), http://www.100md.com(任立平)