补肾健脾活血对实验性骨质疏松症大鼠血清IGF-1的影响
【摘要】 目的 观察补肾健脾活血方对实验性骨质疏松症大鼠血清IGF-1的影响。方法 将84只大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、中药对照组、西药对照组、补肾健脾活血方大、小剂量组共7组，采用卵巢切除的方法建造绝经后骨质疏松症动物模型，灌药90天后用放射免疫法检测大鼠血清IGF-1含量。结果 补肾健脾活血方能明显增加血清IGF-1含量，其作用优于单纯补肾中药和西药治疗，并且与剂量呈正相关。结论 补肾健脾活血方通过影响细胞因子IGF-1的含量来促进成骨细胞骨形成的功能，从而发挥治疗骨质疏松症的作用。
关键词 补肾健脾活血方 骨质疏松症 IGF-1
【文献标识码】 A 【文章编号】 1606-8106(2003)06-0814-02
Effect of Chinese herb medicine on the content of IGF-1
, 百拇医药
in serum of experimental osteoporosis rats
Hu Bing，Yang Shuhua
Union Hospital of Tongji Medical College of Huazhong University of Science and Technology，Wuhan，Hubei430022.
【Abstract】 Objective To observe the effect of Bushen Jianpi Huoxue Recipe on content of IGF-1in serum of experimental osteoporosis rats.Methods 84female rats were divided into7groups:normal group，sham operation group，model group，Chinese herb contrast group，western drug contrast group，large dose group of Bushen Jianpi Huoxˉue recipe(large dose group)and small dose group of Bunshen Jianpi Huoxue recipe(small dose group).To make rat postmenopausal osteoporasis model by ablating ovary.After90days of treatment to observe the content of IGF-1in serum with radioimmunoassay(RIA).Results Bushen Jianpi Huoxue recipe can increase the content of IGF-1in serum obviously.The effect of large dose group is superior to Chinese herb contrast group，western drug contrast group and small dose group.Conclusion Bushen Jianpi Huoxue recipe can increase content of IGF-1and promote the bone formation of osteoblasts.
, http://www.100md.com
Key words bushen jianpi huoxue recipe postmenopausal osteoporasis IGF-1
胰岛素生长因子1(IGF-1)在骨组织中有丰富的储量，其能促进成骨细胞的增殖与分化，有助于维持成骨细胞显型，抑制胶原蛋白酶的活性 [1] ，因此具有重要的促进骨形成的作用。本实验观察补肾健脾活血方对骨质疏松症大鼠血清中IGF-1的影响，探讨补肾健脾活血方防治骨质疏松症的作用机制。
1 材料与方法
1.1 实验动物 6月龄SD雌性大鼠84只，体重250～300g，购自华中科技大学同济医学院实验动物中心。
1.2 药物及制备 (1)补肾健脾活血方由人参、鹿角霜、骨碎补、补骨脂、淫羊藿、山药、白术、当归、丹参、山楂等组成，在湖北中医学院附属医院制剂室水煎浓缩成1:1浓度，即每毫升药液中生药含量为1g。(2)中成药仙灵骨葆胶囊(黔卫药准字10019)，贵州仙灵药业有限公司生产。(3)西药尼尔雌醇片(京卫药准字93第034号)，北京四环制药二厂生产。
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1.3 模型的建立 对实验大鼠用3%戊巴比妥钠按每公斤体重40mg作腹腔内注射麻醉，俯卧位固定于大鼠夹板上，常规消毒，取脊柱两旁切口，无菌操作下进入腹腔，将双侧卵巢游离并切除，止血缝合，伤口用马应龙痔疮软膏外擦预防感染。术后大鼠均自由饮水，标准饲料常规喂养90天，造成实验性大鼠骨质疏松症模型。
1.4 分组及给药 84只大鼠随机分成7组:正常组、假手术组、模型组、中药组、西药组、补肾健脾活血方大剂量组(简称大剂量组)和补肾健脾活血方小剂量组(简称小剂量组)，每组12只。假手术组大鼠在与造模相同的麻醉和切口条件下，切除腹腔内左右各一块脂肪作假手术。正常组为空白对照组，相同条件下喂养，不作特殊处理。其余5组均按上述造模方法造成骨质疏松症动物模型。注:实验过程中模型组、假手术组和西药组大鼠各死亡1只，不列入统计范畴。
术后第91天开始灌胃给药，大剂量组按2.0g/300g·d将补肾健脾活血方浓缩液每日一次灌胃给药;小剂量组按0.5g/300g·d每日一次灌胃给药;中药组仙灵骨葆按人鼠体重换算等效剂量每天灌胃一次;西药组尼尔雌醇按人鼠体重换算剂量每周灌胃一次，每周其余6天灌等容量生理盐水;共90天。正常组、模型组和假手术组给予等容量生理盐水灌胃，次数和疗程相同。
, 百拇医药
1.5 血清IGF-1测定
1.5.1 标本采集 各组大鼠治疗结束后，停止治疗3天后行大鼠颈动脉插管取血2ml，3000r/min离心20min，分离血清。标本放置于低温冰箱(-30℃)中保存，避免反复冻融，待标本收集齐后统一测试。
1.5.2 检测方法 采用放射免疫方法测定，试剂盒、自动酶标仪和自动洗板机均由武汉博士德生物工程有限公司提供。
1.5.3 统计学方法 数据以均数±标准差(ˉx±s)表示，各组间样本均数比较采用F检验，结果见表1。2 结果
表1 补肾健脾活血方对大鼠血清IGF-1的影响 (略 )
从表1可看出，假手术组和正常组相比，IGF-1差异无显著性(P>0.05);模型组和正常组相比，IGF-1有非常显著下降(P<0.01);中药组、西药组、小剂量组和模型组相比，IGF-1有非常显著性升高(P<0.01);大剂量组和模型组相比，IGF-1有非常显著性升高(P<0.01);大剂量组和中药组、西药组、小剂量组相比，IGF-1也有显著性升高(P<0.05)，说明补肾健脾活血方对IGF-1的升高作用强于单纯补肾中药治疗和西药雌激素治疗，且与剂量呈正相关;大剂量组和正常组相比，IGF-1差异无显著性(P>0.05)，说明大剂量补肾健脾活血方治疗后，大鼠血清中IGF-1接近正常水平。
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3 讨论
根据中医理论，骨质疏松症的病理不仅有肾虚，同时还兼有脾虚和血瘀，是一个以脾肾虚衰为本、血瘀阻络为标的虚实夹杂病理，所以应当采用补肾健脾、活血化瘀的方法治疗。补肾健脾活血方是我们临床实践的总结，其药物组成为人参、鹿角霜、淫羊藿、骨碎补、补骨脂、山药、白术、当归、丹参、山楂等。方中以人参大补元气、健脾养胃，鹿角霜益 肾助阳活血，两药合为君药;又以骨碎补、补骨脂和淫羊藿补肾壮骨，山药、白术健脾养胃，五味合为臣药;以当归、丹参、山楂活血通络，共为佐使之药。前期的研究已证实该方能明显改善骨质疏松症大鼠骨密度、骨强度、生化指标和超微结构等 [2，3] 。
IGF-1是由70个氨基酸组成的具有内分泌、自分泌和旁分泌性的单链多肽。成骨细胞可合成和分泌IGF-1，且IGF-1是骨生成的强刺激因子 [4] 。IGF-1可刺激成骨细胞的增殖分化及Ⅰ型胶原的合成，增强碱性磷酸酶的活性以及骨钙素的产生，并抑制胶原蛋白酶的活性，IGF-1对肾脏1，25-(OH) 2 D 3 的产生也有促进作用 [5] 。Reed研究发现骨质疏松症病人血浆中IGF-1水平与成骨细胞面、矿化骨面和骨形成率存在密切正相关 [6] 。骨骼是IGF-1、胰岛素样生长因子结合蛋白(IGFBP 1 -6)、胰岛素样生长因子结合蛋白特异蛋白酶1-6的巨大储存库，它们共同构成IGFS调节系统，受局部细胞因子和激素的调节，该系统的功能与成骨细胞和破骨细胞的成骨和破骨活动密切相关。IGF-1储存骨中的量，可反映骨形成和骨吸收相耦联的多少，IGF系统可能是调节骨重建网络的核心，在骨质疏松症中IGF调节系统起着重要作用。
, 百拇医药
本实验结果表明，骨质疏松症大鼠经补肾健脾活血方治疗后，血清IGF-1出现显著上升，说明补肾健脾活血方通过影响IGF-1而促进了成骨细胞的分化增殖和对胶原的合成，即促进了成骨细胞的骨形成，并使骨转换过程中骨形成和骨吸收趋于耦联。实验结果还表明，补肾健脾活血方对大鼠IGF-1的升高作用明显优于单纯补肾中药治疗和西药雌激素的治疗。
参考文献
1 程志安，萧劲夫.胰岛素样生长因子与骨质疏松.中国骨质疏松杂志，2001，7(1):85.
2 胡冰，傅炳国.补肾健脾活血方对去卵巢大鼠骨密度、骨强度的影响.湖北中医学院学报，2002，4(3):20.
3 胡冰，张胜.补肾健脾活血方对去卵巢大鼠骨转换主要生化指标的影响.湖北中医学院学报，2003，5(1):10.
4 Pablo.Endocrine Rev，1990，11:558.
5 赵红.胰岛素样生长因子Ⅰ的基础与临床研究进展.国外医学·内分泌学分册，2000，20:302-305.
6 Reed.J Bone Miner Res，1995，10:1218.
(编辑 元红), 百拇医药
关键词 补肾健脾活血方 骨质疏松症 IGF-1
【文献标识码】 A 【文章编号】 1606-8106(2003)06-0814-02
Effect of Chinese herb medicine on the content of IGF-1
, 百拇医药
in serum of experimental osteoporosis rats
Hu Bing，Yang Shuhua
Union Hospital of Tongji Medical College of Huazhong University of Science and Technology，Wuhan，Hubei430022.
【Abstract】 Objective To observe the effect of Bushen Jianpi Huoxue Recipe on content of IGF-1in serum of experimental osteoporosis rats.Methods 84female rats were divided into7groups:normal group，sham operation group，model group，Chinese herb contrast group，western drug contrast group，large dose group of Bushen Jianpi Huoxˉue recipe(large dose group)and small dose group of Bunshen Jianpi Huoxue recipe(small dose group).To make rat postmenopausal osteoporasis model by ablating ovary.After90days of treatment to observe the content of IGF-1in serum with radioimmunoassay(RIA).Results Bushen Jianpi Huoxue recipe can increase the content of IGF-1in serum obviously.The effect of large dose group is superior to Chinese herb contrast group，western drug contrast group and small dose group.Conclusion Bushen Jianpi Huoxue recipe can increase content of IGF-1and promote the bone formation of osteoblasts.
, http://www.100md.com
Key words bushen jianpi huoxue recipe postmenopausal osteoporasis IGF-1
胰岛素生长因子1(IGF-1)在骨组织中有丰富的储量，其能促进成骨细胞的增殖与分化，有助于维持成骨细胞显型，抑制胶原蛋白酶的活性 [1] ，因此具有重要的促进骨形成的作用。本实验观察补肾健脾活血方对骨质疏松症大鼠血清中IGF-1的影响，探讨补肾健脾活血方防治骨质疏松症的作用机制。
1 材料与方法
1.1 实验动物 6月龄SD雌性大鼠84只，体重250～300g，购自华中科技大学同济医学院实验动物中心。
1.2 药物及制备 (1)补肾健脾活血方由人参、鹿角霜、骨碎补、补骨脂、淫羊藿、山药、白术、当归、丹参、山楂等组成，在湖北中医学院附属医院制剂室水煎浓缩成1:1浓度，即每毫升药液中生药含量为1g。(2)中成药仙灵骨葆胶囊(黔卫药准字10019)，贵州仙灵药业有限公司生产。(3)西药尼尔雌醇片(京卫药准字93第034号)，北京四环制药二厂生产。
, http://www.100md.com
1.3 模型的建立 对实验大鼠用3%戊巴比妥钠按每公斤体重40mg作腹腔内注射麻醉，俯卧位固定于大鼠夹板上，常规消毒，取脊柱两旁切口，无菌操作下进入腹腔，将双侧卵巢游离并切除，止血缝合，伤口用马应龙痔疮软膏外擦预防感染。术后大鼠均自由饮水，标准饲料常规喂养90天，造成实验性大鼠骨质疏松症模型。
1.4 分组及给药 84只大鼠随机分成7组:正常组、假手术组、模型组、中药组、西药组、补肾健脾活血方大剂量组(简称大剂量组)和补肾健脾活血方小剂量组(简称小剂量组)，每组12只。假手术组大鼠在与造模相同的麻醉和切口条件下，切除腹腔内左右各一块脂肪作假手术。正常组为空白对照组，相同条件下喂养，不作特殊处理。其余5组均按上述造模方法造成骨质疏松症动物模型。注:实验过程中模型组、假手术组和西药组大鼠各死亡1只，不列入统计范畴。
术后第91天开始灌胃给药，大剂量组按2.0g/300g·d将补肾健脾活血方浓缩液每日一次灌胃给药;小剂量组按0.5g/300g·d每日一次灌胃给药;中药组仙灵骨葆按人鼠体重换算等效剂量每天灌胃一次;西药组尼尔雌醇按人鼠体重换算剂量每周灌胃一次，每周其余6天灌等容量生理盐水;共90天。正常组、模型组和假手术组给予等容量生理盐水灌胃，次数和疗程相同。
, 百拇医药
1.5 血清IGF-1测定
1.5.1 标本采集 各组大鼠治疗结束后，停止治疗3天后行大鼠颈动脉插管取血2ml，3000r/min离心20min，分离血清。标本放置于低温冰箱(-30℃)中保存，避免反复冻融，待标本收集齐后统一测试。
1.5.2 检测方法 采用放射免疫方法测定，试剂盒、自动酶标仪和自动洗板机均由武汉博士德生物工程有限公司提供。
1.5.3 统计学方法 数据以均数±标准差(ˉx±s)表示，各组间样本均数比较采用F检验，结果见表1。2 结果
表1 补肾健脾活血方对大鼠血清IGF-1的影响 (略 )
从表1可看出，假手术组和正常组相比，IGF-1差异无显著性(P>0.05);模型组和正常组相比，IGF-1有非常显著下降(P<0.01);中药组、西药组、小剂量组和模型组相比，IGF-1有非常显著性升高(P<0.01);大剂量组和模型组相比，IGF-1有非常显著性升高(P<0.01);大剂量组和中药组、西药组、小剂量组相比，IGF-1也有显著性升高(P<0.05)，说明补肾健脾活血方对IGF-1的升高作用强于单纯补肾中药治疗和西药雌激素治疗，且与剂量呈正相关;大剂量组和正常组相比，IGF-1差异无显著性(P>0.05)，说明大剂量补肾健脾活血方治疗后，大鼠血清中IGF-1接近正常水平。
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3 讨论
根据中医理论，骨质疏松症的病理不仅有肾虚，同时还兼有脾虚和血瘀，是一个以脾肾虚衰为本、血瘀阻络为标的虚实夹杂病理，所以应当采用补肾健脾、活血化瘀的方法治疗。补肾健脾活血方是我们临床实践的总结，其药物组成为人参、鹿角霜、淫羊藿、骨碎补、补骨脂、山药、白术、当归、丹参、山楂等。方中以人参大补元气、健脾养胃，鹿角霜益 肾助阳活血，两药合为君药;又以骨碎补、补骨脂和淫羊藿补肾壮骨，山药、白术健脾养胃，五味合为臣药;以当归、丹参、山楂活血通络，共为佐使之药。前期的研究已证实该方能明显改善骨质疏松症大鼠骨密度、骨强度、生化指标和超微结构等 [2，3] 。
IGF-1是由70个氨基酸组成的具有内分泌、自分泌和旁分泌性的单链多肽。成骨细胞可合成和分泌IGF-1，且IGF-1是骨生成的强刺激因子 [4] 。IGF-1可刺激成骨细胞的增殖分化及Ⅰ型胶原的合成，增强碱性磷酸酶的活性以及骨钙素的产生，并抑制胶原蛋白酶的活性，IGF-1对肾脏1，25-(OH) 2 D 3 的产生也有促进作用 [5] 。Reed研究发现骨质疏松症病人血浆中IGF-1水平与成骨细胞面、矿化骨面和骨形成率存在密切正相关 [6] 。骨骼是IGF-1、胰岛素样生长因子结合蛋白(IGFBP 1 -6)、胰岛素样生长因子结合蛋白特异蛋白酶1-6的巨大储存库，它们共同构成IGFS调节系统，受局部细胞因子和激素的调节，该系统的功能与成骨细胞和破骨细胞的成骨和破骨活动密切相关。IGF-1储存骨中的量，可反映骨形成和骨吸收相耦联的多少，IGF系统可能是调节骨重建网络的核心，在骨质疏松症中IGF调节系统起着重要作用。
, 百拇医药
本实验结果表明，骨质疏松症大鼠经补肾健脾活血方治疗后，血清IGF-1出现显著上升，说明补肾健脾活血方通过影响IGF-1而促进了成骨细胞的分化增殖和对胶原的合成，即促进了成骨细胞的骨形成，并使骨转换过程中骨形成和骨吸收趋于耦联。实验结果还表明，补肾健脾活血方对大鼠IGF-1的升高作用明显优于单纯补肾中药治疗和西药雌激素的治疗。
参考文献
1 程志安，萧劲夫.胰岛素样生长因子与骨质疏松.中国骨质疏松杂志，2001，7(1):85.
2 胡冰，傅炳国.补肾健脾活血方对去卵巢大鼠骨密度、骨强度的影响.湖北中医学院学报，2002，4(3):20.
3 胡冰，张胜.补肾健脾活血方对去卵巢大鼠骨转换主要生化指标的影响.湖北中医学院学报，2003，5(1):10.
4 Pablo.Endocrine Rev，1990，11:558.
5 赵红.胰岛素样生长因子Ⅰ的基础与临床研究进展.国外医学·内分泌学分册，2000，20:302-305.
6 Reed.J Bone Miner Res，1995，10:1218.
(编辑 元红), 百拇医药