BACTEC MGIT960仪快速检测标本中分支杆菌及药敏试验结果分析
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中华中西医杂志 2003年4月 第4卷 第8期
【摘要】 目的 分析BACTEC MGIT960全自动分支杆菌检测技术在肺结核临床诊断和药敏试验应用结果。方法 用BACTEC MGIT960对不同种类的标本进行分离培养及药敏试验并与改良罗氏培养基法对比。结果 BACTEC MGIT960全自动分支杆菌检测仪初代分离标本阳性报告时间平均为8.9天，药敏结果报告时间平均为7.1天。各类标本总阳性率为37.7%，其中痰标本阳性率为39.7%。338株结核分支杆菌的总耐药率为54.4%，MDR率为18.9%。结论 BACTEC MGIT960能大大缩短分支杆菌的检测时间，适用于除血液以外的各类标本，且阳性率高，便于尽早发现耐药菌株。
关键词 分支杆菌 结核 BACTEC MGIT960 耐药性
【文献标识码】 A 【文章编号】 1606-8106(2003)08-1129-03
The analysis of the detection of916clinical specimens from
, 百拇医药
pulmonary department patients by BACTEC MGIT960
Zou Shenghua，Dai Lamei，Zhang Lishui
Fuzhou Pulmonary Hospital，Fuzhou，Fujian350008.
【Abstract】 Objective To evaluate the application of the BACTEC MGIT960system in clinical diagnosis and drug sensitive test of the pulmonary tuberculosis.Methods Clinical specimen was detected by BACTEC MGIT960，while mycobacterium was found as the original culture of bacteria，and drug sensitive test was conducted，compared to the L-J method(Lowenstein-Jensen).Results The days of positive growing for the original culture by BACTEC MGIT960was8.9，the days of the drug sensitive results reporting was7.1.The positive rate of mycobacterium in916specimens was37.7%，and itwas39.7%in sputum.The resistant rate to any drugwas54.4%in338MTB isolates，MDR rate was18.9%.Conclusion The days of the cultivated mycobaterium by BACTEC MGIT960was more shortˉened.The BACTEC MGIT960system is used to all clinical specimens，except blood，and the positive rate is high，the drug resistant isolates was found early.
, 百拇医药
Key words mycobacterium tuberculosis(MTB) BACTEC MGIT960 drug resistance
传统的方法检测结核分支杆菌无法满足临床需求，临床医生迫切要求快速可信的培养及药敏结果以制定诊疗方案。为此我们应用BACTEC MGIT960全自动分支杆菌检测技术对916例肺科病人送检标本进行分析研究。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 仪器和试剂 美国BD公司BACTEC MGIT960全自动分支杆菌检测仪及配套试剂(包括MGIT分支杆菌生长指示培养管、MGIT OADC营养添加剂、PANTA杂菌抑制剂、MGIT TM 960SIRE药敏试剂盒)、改良罗氏培养基(自制)、NALC-NaOH溶液(自制)。
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1.1.2 检测标本 系我院门诊及住院病人送检标本916 例，种类包括:痰液812例，纤支镜刷洗液(纤刷)51例，尿液13例，胸腹水4例，脑脊液19例，脓液12例，粪便1例，其它4例。诊断分型依照1999年中国结核病分类法，肺外结核的诊断依据症状、体征及相应的辅助检查确诊。
1.2 方法
1.2.1 分离培养 送检标本(除血液外)经过标准的接种前处理后，取0.5ml接种于事先加了OADC/PANTA的MGIT培养管，置入仪器孵育培养。
1.2.2 药敏试验 阳性培养管取出后直接涂片进行抗酸染色以确定是否为分支杆菌。继续37℃孵育1天，制备菌悬液，接种于预先配制好的含有药敏试验所需浓度药物，见表1的MGIT培养管，按放管程序连同AST试管架放入仪器孵育培养。同时通过PNB(对硝基苯甲酸)及TCH(噻吩-2-羧酸肼)生长试验对分支杆菌初步鉴定。
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表1 BACTEC MGIT TM 960AST药物浓度(略)
1.2.3 改良罗氏培养基法 送检标本经前处理后，取0.1ml接种于改良罗氏培养基斜面上，置37℃恒温箱孵育。接种后3天、7天观察，此后每周观察1次，共观察8周。有菌落生长需经抗酸染色确认是否为分支杆菌，然后行绝对浓度间接法药敏试验。
2 结果
2.1 送检标本阳性检出率 916例送检标本阳性检出率为37.7%(345/916)，其中各类标本阳性检出率分别为:痰液39.7%(322/812)，纤刷标本25.5%(13/51)，尿液15.4%(2/13)，脑脊液15.8%(3/19)，脓液41.7%(5/12)，粪便1份，胸腹水及其它各4份均未检出。
2.2 两种检测方法比较 BACTEC MGIT960全自动分支杆菌检测仪初代分离标本阳性报告时间平均为8.9天，药敏报告时间平均为7.1天。改良罗氏培养基则平均需要32.1天和30天。见表2。
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表2 233例标本BACTEC MGIT960与改良罗氏培养基法对比结果(略)
2.3 结核分支杆菌耐药情况 916例标本共分离出345株分支杆菌，其中2株菌种污染，5株为非结核分支杆菌(分离率为1.4%)，最终获得338株结核分支杆菌。
338株结核分支杆菌中，154株(45.6%)对S、H、R、E等4种抗结核药全部敏感，对1种或1种以上药物耐药者184株，总耐药率为54.4%。其中耐1药57株(16.9%)，耐2药63株(18.6%)，耐3药40株(11.8%)，耐4药24株(7.1%)。同时耐INH和RFP(即MDR-TB)者为64株，耐多药率为18.9%。耐不同抗结核药物的顺位由高到低依次为S(36.7%)，H(41.1%)，R(23.1%)，E(17.2%)。见表3。
表3 338株结核分支杆菌耐药情况(略)
, 百拇医药
3 讨论
结核分支杆菌在一般培养基上分裂一次为18～24h，而营养丰富时可缩短为5h [1] 。BACTEC MGIT960采用MGIT培养基，并于接种时添加营养添加剂及杂菌抑制剂;且有10%CO 2 气体环境;样本前处理采用NALC-NaOH去消化与去污染方法;通过荧光原理检测分支杆菌消耗O 2 的变化，其灵敏度高。这些措施的实行提高了分支杆菌的阳性检出率，并缩短了检测时间。以233例标本分析，BACTEC MGIT960阳性检出率为39.5%(92/233)，明显高于改良罗氏培养基法的20.6%(48/233)。初代分离标本阳性报告时间平均为8.9天，略高于李洪敏等报告的7.2天 [2] ，药敏报告时间平均为7.1天，完成标本分离培养、菌型鉴定、药敏试验全过程平均仅需要约20天，而改良罗氏培养基需要耗时2～3个月。分离培养污染率为6.4%(15/233)，高于改良罗氏培养基的1.7%(4/233)。液体培养基分离培养污染率一般比固体培养基高。
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916例标本BACTEC MGIT960检测，以痰液、脓液的阳性检出率高，分别为39.7%与41.7%，对于不易取得痰液的患者，或者肺部有块影需鉴别诊断，有条件的医院可通过纤支镜取得标本，有助于提高阳性检出率。凡是临床疑似结核病患者，除血液外(因血液中含过氧化物多，不利于分支杆菌的生长)任何标本均可送检。
338株结核分支杆菌中，总耐药率为54.4%，耐多药率为18.9%，耐一种药物者占16.9%，耐两种以上药物者37.6%，表明一线药物均有产生耐药的可能性，且更趋向于联合耐药，S、H、R、E等4种药物中，任何方式的联合耐药均出现，出现频率由高到低为:S+H(26.9%)，H+R(18.9%)，S+H+R(13.6%)，H+E(12.7%)，S+E(11.2%)，R+E(10.4%)，S+R(10.0)，S+H+E(9.5%)，H+R+E(8.9%)，S+R+E(8.2%)，S+H+R+E(7.1%)。这对于组合化疗方案的疗效是一个潜在的威胁，表明我们结核病防治任务十分艰巨，MDR-TB的发生率高更增加了结核病防治工作的难度，这类病人应给予逐一诊治，制定个性化的治疗方案，在完全督导下进行，才可能获得一定疗效。全国第四次结核病流行病学抽样调查总耐药率为27.8%，耐多药率为10.7%，虽然总耐药率与1984/1985年和1990年相比呈下降趋势，但仍处于较高耐药率行列 [3] 。BACTEC MGIT960的应用，缩短了分支杆菌的检测时间，便于尽早发现耐药菌株，及时为临床提供可信的耐药性资料。
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本研究还检出5株非结核分支杆菌(NTM)。福建省是NTM病的高发地区，刘坦业等报告福建省NTM感染率为20.0%，人群中NTM分离率1985年为7%，1990年为13.3%，均较全国为高 [4] 。NTM分布极广、对抗结核药多为耐药、治愈率低。为此，应该提高对NTM病的重视。
参考文献
1 陈德源.医学微生物学.第五版.北京:人民卫生出版社，2001，157-168.
2 李洪敏，吴雪琼，王巍，等.新型BACTECMGIT960全自动快速分 支杆菌培养鉴定药敏仪及其应用.现代科学仪器，2000，2:61-62.
3 2000年全国结核病流行病抽样调查报告.中国防痨杂志，2002，24(2):98-102.
4 刘坦业，江秀文，俞文.福建省非结核分支杆菌感染流行情况.中国人兽共患病杂志，1995，11(1):53-55.
作者单位:350008福建省福州肺科医院
(编辑 张璇), 百拇医药(邹盛华 代腊梅 张丽水)
关键词 分支杆菌 结核 BACTEC MGIT960 耐药性
【文献标识码】 A 【文章编号】 1606-8106(2003)08-1129-03
The analysis of the detection of916clinical specimens from
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pulmonary department patients by BACTEC MGIT960
Zou Shenghua，Dai Lamei，Zhang Lishui
Fuzhou Pulmonary Hospital，Fuzhou，Fujian350008.
【Abstract】 Objective To evaluate the application of the BACTEC MGIT960system in clinical diagnosis and drug sensitive test of the pulmonary tuberculosis.Methods Clinical specimen was detected by BACTEC MGIT960，while mycobacterium was found as the original culture of bacteria，and drug sensitive test was conducted，compared to the L-J method(Lowenstein-Jensen).Results The days of positive growing for the original culture by BACTEC MGIT960was8.9，the days of the drug sensitive results reporting was7.1.The positive rate of mycobacterium in916specimens was37.7%，and itwas39.7%in sputum.The resistant rate to any drugwas54.4%in338MTB isolates，MDR rate was18.9%.Conclusion The days of the cultivated mycobaterium by BACTEC MGIT960was more shortˉened.The BACTEC MGIT960system is used to all clinical specimens，except blood，and the positive rate is high，the drug resistant isolates was found early.
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Key words mycobacterium tuberculosis(MTB) BACTEC MGIT960 drug resistance
传统的方法检测结核分支杆菌无法满足临床需求，临床医生迫切要求快速可信的培养及药敏结果以制定诊疗方案。为此我们应用BACTEC MGIT960全自动分支杆菌检测技术对916例肺科病人送检标本进行分析研究。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 仪器和试剂 美国BD公司BACTEC MGIT960全自动分支杆菌检测仪及配套试剂(包括MGIT分支杆菌生长指示培养管、MGIT OADC营养添加剂、PANTA杂菌抑制剂、MGIT TM 960SIRE药敏试剂盒)、改良罗氏培养基(自制)、NALC-NaOH溶液(自制)。
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1.1.2 检测标本 系我院门诊及住院病人送检标本916 例，种类包括:痰液812例，纤支镜刷洗液(纤刷)51例，尿液13例，胸腹水4例，脑脊液19例，脓液12例，粪便1例，其它4例。诊断分型依照1999年中国结核病分类法，肺外结核的诊断依据症状、体征及相应的辅助检查确诊。
1.2 方法
1.2.1 分离培养 送检标本(除血液外)经过标准的接种前处理后，取0.5ml接种于事先加了OADC/PANTA的MGIT培养管，置入仪器孵育培养。
1.2.2 药敏试验 阳性培养管取出后直接涂片进行抗酸染色以确定是否为分支杆菌。继续37℃孵育1天，制备菌悬液，接种于预先配制好的含有药敏试验所需浓度药物，见表1的MGIT培养管，按放管程序连同AST试管架放入仪器孵育培养。同时通过PNB(对硝基苯甲酸)及TCH(噻吩-2-羧酸肼)生长试验对分支杆菌初步鉴定。
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表1 BACTEC MGIT TM 960AST药物浓度(略)
1.2.3 改良罗氏培养基法 送检标本经前处理后，取0.1ml接种于改良罗氏培养基斜面上，置37℃恒温箱孵育。接种后3天、7天观察，此后每周观察1次，共观察8周。有菌落生长需经抗酸染色确认是否为分支杆菌，然后行绝对浓度间接法药敏试验。
2 结果
2.1 送检标本阳性检出率 916例送检标本阳性检出率为37.7%(345/916)，其中各类标本阳性检出率分别为:痰液39.7%(322/812)，纤刷标本25.5%(13/51)，尿液15.4%(2/13)，脑脊液15.8%(3/19)，脓液41.7%(5/12)，粪便1份，胸腹水及其它各4份均未检出。
2.2 两种检测方法比较 BACTEC MGIT960全自动分支杆菌检测仪初代分离标本阳性报告时间平均为8.9天，药敏报告时间平均为7.1天。改良罗氏培养基则平均需要32.1天和30天。见表2。
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表2 233例标本BACTEC MGIT960与改良罗氏培养基法对比结果(略)
2.3 结核分支杆菌耐药情况 916例标本共分离出345株分支杆菌，其中2株菌种污染，5株为非结核分支杆菌(分离率为1.4%)，最终获得338株结核分支杆菌。
338株结核分支杆菌中，154株(45.6%)对S、H、R、E等4种抗结核药全部敏感，对1种或1种以上药物耐药者184株，总耐药率为54.4%。其中耐1药57株(16.9%)，耐2药63株(18.6%)，耐3药40株(11.8%)，耐4药24株(7.1%)。同时耐INH和RFP(即MDR-TB)者为64株，耐多药率为18.9%。耐不同抗结核药物的顺位由高到低依次为S(36.7%)，H(41.1%)，R(23.1%)，E(17.2%)。见表3。
表3 338株结核分支杆菌耐药情况(略)
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3 讨论
结核分支杆菌在一般培养基上分裂一次为18～24h，而营养丰富时可缩短为5h [1] 。BACTEC MGIT960采用MGIT培养基，并于接种时添加营养添加剂及杂菌抑制剂;且有10%CO 2 气体环境;样本前处理采用NALC-NaOH去消化与去污染方法;通过荧光原理检测分支杆菌消耗O 2 的变化，其灵敏度高。这些措施的实行提高了分支杆菌的阳性检出率，并缩短了检测时间。以233例标本分析，BACTEC MGIT960阳性检出率为39.5%(92/233)，明显高于改良罗氏培养基法的20.6%(48/233)。初代分离标本阳性报告时间平均为8.9天，略高于李洪敏等报告的7.2天 [2] ，药敏报告时间平均为7.1天，完成标本分离培养、菌型鉴定、药敏试验全过程平均仅需要约20天，而改良罗氏培养基需要耗时2～3个月。分离培养污染率为6.4%(15/233)，高于改良罗氏培养基的1.7%(4/233)。液体培养基分离培养污染率一般比固体培养基高。
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916例标本BACTEC MGIT960检测，以痰液、脓液的阳性检出率高，分别为39.7%与41.7%，对于不易取得痰液的患者，或者肺部有块影需鉴别诊断，有条件的医院可通过纤支镜取得标本，有助于提高阳性检出率。凡是临床疑似结核病患者，除血液外(因血液中含过氧化物多，不利于分支杆菌的生长)任何标本均可送检。
338株结核分支杆菌中，总耐药率为54.4%，耐多药率为18.9%，耐一种药物者占16.9%，耐两种以上药物者37.6%，表明一线药物均有产生耐药的可能性，且更趋向于联合耐药，S、H、R、E等4种药物中，任何方式的联合耐药均出现，出现频率由高到低为:S+H(26.9%)，H+R(18.9%)，S+H+R(13.6%)，H+E(12.7%)，S+E(11.2%)，R+E(10.4%)，S+R(10.0)，S+H+E(9.5%)，H+R+E(8.9%)，S+R+E(8.2%)，S+H+R+E(7.1%)。这对于组合化疗方案的疗效是一个潜在的威胁，表明我们结核病防治任务十分艰巨，MDR-TB的发生率高更增加了结核病防治工作的难度，这类病人应给予逐一诊治，制定个性化的治疗方案，在完全督导下进行，才可能获得一定疗效。全国第四次结核病流行病学抽样调查总耐药率为27.8%，耐多药率为10.7%，虽然总耐药率与1984/1985年和1990年相比呈下降趋势，但仍处于较高耐药率行列 [3] 。BACTEC MGIT960的应用，缩短了分支杆菌的检测时间，便于尽早发现耐药菌株，及时为临床提供可信的耐药性资料。
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本研究还检出5株非结核分支杆菌(NTM)。福建省是NTM病的高发地区，刘坦业等报告福建省NTM感染率为20.0%，人群中NTM分离率1985年为7%，1990年为13.3%，均较全国为高 [4] 。NTM分布极广、对抗结核药多为耐药、治愈率低。为此，应该提高对NTM病的重视。
参考文献
1 陈德源.医学微生物学.第五版.北京:人民卫生出版社，2001，157-168.
2 李洪敏，吴雪琼，王巍，等.新型BACTECMGIT960全自动快速分 支杆菌培养鉴定药敏仪及其应用.现代科学仪器，2000，2:61-62.
3 2000年全国结核病流行病抽样调查报告.中国防痨杂志，2002，24(2):98-102.
4 刘坦业，江秀文，俞文.福建省非结核分支杆菌感染流行情况.中国人兽共患病杂志，1995，11(1):53-55.
作者单位:350008福建省福州肺科医院
(编辑 张璇), 百拇医药(邹盛华 代腊梅 张丽水)