急性心肌梗死合并2型糖尿病患者相关指标的比较研究
【摘要】 目的 比较分析急性心肌梗死合并2型糖尿病患者血清抗氧化低密度脂蛋白(oxLDL)抗体、细胞间粘附分子-1(ICAM-1)、血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)和E-选择素的水平。方法 共入选59例急性心肌梗死病人，其中30例合并2型糖尿病(Ⅰ组)，29例无糖尿病(Ⅱ组)，并入选30例正常健康者作为对照(Ⅲ组)。用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清ICAM-1、VCAM-1、E-选择素和血清抗oxLDL抗体水平，并比较上述各指标水平在三组之间的差异。结果 血清ICAM-1水平在Ⅰ组(780±90)ng/ml明显高于Ⅱ组(689±92)ng/ml，P<0.05和Ⅲ组(619±95)ng/ml，P<0.01;血清VCAM-1水平在Ⅰ组(1780±475)ng/ml明显高于Ⅱ组(1528±434)ng/ml，P<0.05和Ⅲ组(1137±322)ng/ml，P<0.01;血清E-选择素水平在Ⅰ组(65±20)ng/ml明显高于Ⅱ组(51±19)ng/ml，P<0.05和Ⅲ组(38±13)ng/ml，P<0.01;血清抗oxLDL抗体水平在Ⅰ组(1.71±0.65)明显高于Ⅱ组(1.01±0.62)，P<0.05和Ⅲ组(0.84±0.35)，P<0.01。结论 血清ICAM-1、VCAM-1、E-选择素和血清抗oxLDL抗体水平在急性心肌梗死合并2型糖尿病者中均明显高于无糖尿病者。
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关键词 细胞间粘附分子-1 血管细胞粘附分子-1 E-选择素 抗氧化低密度脂蛋白抗体
【文献标识码】 A 【文章编号】 1609-6614(2003)11-0968-03
Comparison with the related markers among acute myocardial
infarction patients with non-insulin-dependent diabetes mellitus
Zhou Zhehui，Song Wei，Wang Binyao，et al.
Dept of Internal Medicine of Huang-Pu Central Hospital，Shanghai200002.
, 百拇医药
【Abstract】 Objective To compare with the levels of serum anti-oxLDL antibodies，intercellular adhesion molecule-1(ICAM-1)，vascular adhesion molecule-1(ICAM-1)and E-selectin among acute myocardial infarcˉtion(AMI)patients with non-insulin-dependent diabetes mellitus(NIDDM).Methods We measured levels of serum ICAM-1，VCAM-1，E-selectin and anti-oxLDL antibodies among59AMI patients including30patients with NIDDM(group I)and29patients without NIDDM(groupⅡ)and30normal healthy control subjects(groupⅢ)by ELISA.Then，we compared with the levels of all markers among three groups.Results Serum ICAM-1levels were significantly higher in groupⅠ(780±90ng/ml)than in groupⅡ(689±92ng/ml，P<0.05)and in groupⅢ(619±95ng/ml，P<0.01);Serum VCAM-1levels were significantly higher in groupⅠ(1780±475ng/ml)than in groupⅡ(1528±434ng/ml，P<0.05)and in groupⅢ(1137±322mn/ml，P<0.01);Serum E-selectin levels were sigˉnificantly higher in groupⅠ(65±20ng/ml)than in groupⅡ(51±19ng/ml，P<0.05)and in groupⅢ(38±13ng/ml，P<0.01);Serum anti-oxLDL antibodies levels were significanthy higher in groupⅠ(1.71±0.65)than in groupⅡ(1.01±0.62，P<0.05)and in groupⅢ(0.84±0.35，P<0.01)Conclusion The levels of serum ICAM-1，VCAM-1，E-selectin and anti-oxLDL antibodies are significantly higher in AMI patients with NIDDM than in those without NIDDM.
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Key words intercellular adhesion molecule-1(ICAM-1) vascular adhesion molecule-1(VCAM-1) E-selectin anti-oxLDL antibodies.
糖尿病是引起冠心病的危险因素已为人们所公认，而细胞粘附分子包括细胞间粘附分子-1(ICAM-1)、血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)、E-选择素和氧化低密度脂蛋白(oxLDL)在冠心病发生和发展中所起的作用也已被研究所证实 [1，2] 。
本研究主要观察急性心肌梗死(AMI)病人合并糖尿病与否对血清抗oxLDL抗体、ICAM-1、VCAM-1和E-选择素水平的影响。
1 资料和方法
1.1 研究对象 本研究共入选了59例AMI病人:男42例，女17例，平均年龄(61.4±8.4)岁。入选标准:发病时间在12h内，持续性胸痛至少30min，至少有相邻两个导联ST段抬高超过0.2mV以及血清CK-MB同工酶水平升高超过正常值水平上限的2倍以上。根据是否合并2型糖尿病把病人分为Ⅰ组:合并2型糖尿病，共30例，男21例，女9例，平均年龄(62.1±8.7)岁;Ⅱ组:无糖尿病，共29例，男21例，女8例，平均年龄(59.5±8.1)岁;并入选了30例正常健康者:男20例，女10例，平均年龄(59.9±7.8)岁，作为正常对照组(Ⅲ组)。排除标准:感染、全身免疫性疾病、恶性肿瘤、肝功能不全、肾功能不全和既往有冠脉介入手术史或冠脉搭桥手术史。
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1.2 研究方法
1.2.1 血清ICAM-1、VCAM-1和E-选择素水平检测 病人标本在入院后即刻抽静脉血获得，正常对照者标本在空腹时抽静脉血获得。所有标本经离心分离出血清后置于-20℃冰箱中待测。用酶联免疫吸附法(ELISA)试剂盒(Bender MedSystems，Vienna，Austria)来测定血清ICAM-1、VCAM-1和E-选择素水平，并严格按照说明书进行操作。
1.2.2 血清抗oxLDL抗体水平检测 (1)LDL的氧化修饰:oxLDL的制备是通过用20μmol/L的硫酸酮在37℃下对低密度脂蛋白(LDL)(北京协和三友科技开发公司)氧化48h而得。(2)血清抗oxLDL抗体的测定:所有标本的抗oxLDL抗体浓度通过ELISA法测定 [3] 。标本测定在平底酶标板(华美公司)上进行。在进行测定前，平底酶标板的一半测定孔加入100μl在pH为9.6的碳酸氢根缓冲液中浓度为7.5mg/L的oxLDL;另一半测定孔加入100μl在pH为9.6的碳酸氢根缓冲液中浓度为7.5mg/L的LDL，测定板在4℃下包被24h，为了防止LDL的氧化，碳酸氢根缓冲液中含有0.27mmol/L的EDTA。测定板包被24h后，用含有0.05%Tween20(华美公司)的磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗3次，然后用含有5%小牛血清(BSA)(中科院细胞所)的PBS在4℃下封板2h(150μl/孔)，2h后用含有0.05%Tween20的PBS冲洗3次。标本用含1%BSA的PBS稀释至1:20，在测定板中加入100μl/孔，在4℃下包被24h。24h后，测定板用含有0.05%Tween20的PBS冲洗3次。将辣根过氧化酶结合的兔 抗人免疫球蛋白G(Dako)用PBS稀释至1:6000，在测定板中加入100μl/孔并在4℃下包被3h，3h后用含有0.05%Tween20的PBS冲洗3次。冲洗后，测定板中加入100μl/孔的过氧化底物(3，3’，5，5’-Tetramethylbenzidine)(Sigma)，在避光条件下进行显色反应30min，然后在测定板中加入100μl/孔，浓度为0.5mol/L的硫酸终止显色反应。在450nm处测光密度(OD)值(SANCO318MC型酶标仪，上海三科仪器有限公司)，并用ODoxLDL/ODnLDL的比值来表示结果。
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1.3 统计方法 测定值以均数±标准差(X±s)表示，组间比较采用ANOVA检验和Bonferroni检验，P<0.05表示有显著性差异(使用SPSS10.0软件)。
2 结果
所有血清指标水平在各组间的比较:见表1。血清ICAM-1水平比较:AMI合并2型糖尿病组(780±90)显著高于AMI无糖尿病组(689±92，P<0.05)和正常对照组(619±95，P<0.01)。血清VCAM-1水平比较:AMI合并2型糖尿病组(1780±475)显著高于AMI无糖尿病组(1528±434，P<0.05)和正常对照组(1137±322，P<0.01)。E-选择素水平比较:AMI合并2型糖尿组(65±20)显著高于AMI无糖尿病组(51±19，P<0.05)和正常对照组(38±13，P<0.01)。抗oxLDL抗体水平比较:AMI合并2型糖尿病组(1.71±0.65)显著高于AMI无糖尿病组(1.01±0.62，P<0.05)和正常对照组(0.84±0.35，P<0.01)。
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表1 各血清指标水平在三组间的差异(略)
3 讨论
本研究主要目的是比较血清ICAM-1、VCAM-1、E-选择素和抗oxLDL抗体水平在AMI合并2型糖尿病病人与无糖尿病患者之间的差异。研究结果表明在AMI合并2型糖尿病病人中，血清ICAM-1、VCAM-1、E-选择素和抗oxLDL抗体水平均显著高于AMI无糖尿病患者。目前糖尿病与冠心病的密切关系已越来越被人们所认识，而且证实了ICAM-1、VCAM-1和E-选择素等细胞粘附分子在冠心病发生和发展中发挥着重要作用。有文献报道糖尿病病人其冠心病发病危险性较无糖尿病者高2～6倍，一些细胞粘附分子的表达程度与血糖浓度相关，在糖尿病病人中细胞粘附分子水平明显升高并能促进冠心病病情发展;经降血糖治疗后，某些细胞粘附分子如VCAM-1和E-选择素水平与治疗前相比，可下降约30% [4] 。
同时，有研究认为糖尿病可以增加低密度脂蛋白(LDL)氧化修饰程度 [5] ，而LDL一旦氧化形成oxLDL后，其生物活性发生明显改变，能促进细胞粘附分子表达，从而增加炎性细胞的粘附、浸润和聚集，导致冠心病发生和发展 [1] 。此外，oxLDL水平增高还可通过增加冠状动脉粥样 硬化斑块脂质含量以及削弱纤维帽厚度引起纤维帽抗损伤强度减弱，导致斑块稳定性降低而发生急性心脏事件 [6] 。到目前为止，除了Bellemo等人的研究结果 [7] 与本研究一致外，大多数相关研究结果都显示无论是否合并糖尿病，血清抗oxLDL抗体水平无显著差异。产生两种结论的主要原因可能是在不同研究中有关研究对象、检测方法以及检测抗原上存在着差异，例如在本研究和Bellemo等人的研究中，检测抗原是oxLDL;而在其他研究中的检测抗原主要是MDA-LDL和HNE-LDL。
, 百拇医药
通过上述研究，我们认为积极有效地预防和控制糖尿病是减少冠心病发生、发展和降低急性心脏事件发生率的重要措施;同时，有必要进一步探索调控血管细胞粘附分子活性及其表达的方法和全面抑制oxLDL生物作用的手段，这些可能会成为冠心病预防和治疗非常重要的新策略。
参考文献
1 Jang YS，Lincoff AM，Plow EF，et al.Cell adhesion molecules in CoroˉnaryArtery Disease.J Am Coll Cardiol，1994，24:1591-1601.
2 Yla-Herttuala S.Is oxidized low-density lipoprotein present in vivo?Curr Opin Lipidol，1998，9:337-344.
3 Sinikka K，Enockson C，Lopes-Virella MF，et al.Preparation of a huˉman standard for determination of the levels of antibodies tooxidatively modified low density lipoporteins.Clin And Diagno Lab Immuno，1998，5(6):817-822.
, 百拇医药
4 Lester LB，Barton Duell P.Atherosclerosis:cell biology and lipoproteins.Curr Opin Lipidol，1999，10:77-79.
5 Deslypere J-P.Modified lipoproteins in diabetes.J Intern Med，1994， 236:69-74.
6 Libby P，Geng YJ，Aikawa M，et al.Macrophages and atherosclerotic plaque stability.Curr Opin Lipidol，1996，7(5):330-335.
7 Bellemo G，Maggi E，Poli M，et al.Autoantibodies against oxidatively modified low-density lipoproteins in NIDDM.Diabetes，1995，44:60-66.
作者单位:1 200002上海市黄浦区中心医院内科
2 上海第二医科大学附属仁济医院心内科
(编辑 晓勇), 百拇医药(周哲慧)
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关键词 细胞间粘附分子-1 血管细胞粘附分子-1 E-选择素 抗氧化低密度脂蛋白抗体
【文献标识码】 A 【文章编号】 1609-6614(2003)11-0968-03
Comparison with the related markers among acute myocardial
infarction patients with non-insulin-dependent diabetes mellitus
Zhou Zhehui，Song Wei，Wang Binyao，et al.
Dept of Internal Medicine of Huang-Pu Central Hospital，Shanghai200002.
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【Abstract】 Objective To compare with the levels of serum anti-oxLDL antibodies，intercellular adhesion molecule-1(ICAM-1)，vascular adhesion molecule-1(ICAM-1)and E-selectin among acute myocardial infarcˉtion(AMI)patients with non-insulin-dependent diabetes mellitus(NIDDM).Methods We measured levels of serum ICAM-1，VCAM-1，E-selectin and anti-oxLDL antibodies among59AMI patients including30patients with NIDDM(group I)and29patients without NIDDM(groupⅡ)and30normal healthy control subjects(groupⅢ)by ELISA.Then，we compared with the levels of all markers among three groups.Results Serum ICAM-1levels were significantly higher in groupⅠ(780±90ng/ml)than in groupⅡ(689±92ng/ml，P<0.05)and in groupⅢ(619±95ng/ml，P<0.01);Serum VCAM-1levels were significantly higher in groupⅠ(1780±475ng/ml)than in groupⅡ(1528±434ng/ml，P<0.05)and in groupⅢ(1137±322mn/ml，P<0.01);Serum E-selectin levels were sigˉnificantly higher in groupⅠ(65±20ng/ml)than in groupⅡ(51±19ng/ml，P<0.05)and in groupⅢ(38±13ng/ml，P<0.01);Serum anti-oxLDL antibodies levels were significanthy higher in groupⅠ(1.71±0.65)than in groupⅡ(1.01±0.62，P<0.05)and in groupⅢ(0.84±0.35，P<0.01)Conclusion The levels of serum ICAM-1，VCAM-1，E-selectin and anti-oxLDL antibodies are significantly higher in AMI patients with NIDDM than in those without NIDDM.
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Key words intercellular adhesion molecule-1(ICAM-1) vascular adhesion molecule-1(VCAM-1) E-selectin anti-oxLDL antibodies.
糖尿病是引起冠心病的危险因素已为人们所公认，而细胞粘附分子包括细胞间粘附分子-1(ICAM-1)、血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)、E-选择素和氧化低密度脂蛋白(oxLDL)在冠心病发生和发展中所起的作用也已被研究所证实 [1，2] 。
本研究主要观察急性心肌梗死(AMI)病人合并糖尿病与否对血清抗oxLDL抗体、ICAM-1、VCAM-1和E-选择素水平的影响。
1 资料和方法
1.1 研究对象 本研究共入选了59例AMI病人:男42例，女17例，平均年龄(61.4±8.4)岁。入选标准:发病时间在12h内，持续性胸痛至少30min，至少有相邻两个导联ST段抬高超过0.2mV以及血清CK-MB同工酶水平升高超过正常值水平上限的2倍以上。根据是否合并2型糖尿病把病人分为Ⅰ组:合并2型糖尿病，共30例，男21例，女9例，平均年龄(62.1±8.7)岁;Ⅱ组:无糖尿病，共29例，男21例，女8例，平均年龄(59.5±8.1)岁;并入选了30例正常健康者:男20例，女10例，平均年龄(59.9±7.8)岁，作为正常对照组(Ⅲ组)。排除标准:感染、全身免疫性疾病、恶性肿瘤、肝功能不全、肾功能不全和既往有冠脉介入手术史或冠脉搭桥手术史。
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1.2 研究方法
1.2.1 血清ICAM-1、VCAM-1和E-选择素水平检测 病人标本在入院后即刻抽静脉血获得，正常对照者标本在空腹时抽静脉血获得。所有标本经离心分离出血清后置于-20℃冰箱中待测。用酶联免疫吸附法(ELISA)试剂盒(Bender MedSystems，Vienna，Austria)来测定血清ICAM-1、VCAM-1和E-选择素水平，并严格按照说明书进行操作。
1.2.2 血清抗oxLDL抗体水平检测 (1)LDL的氧化修饰:oxLDL的制备是通过用20μmol/L的硫酸酮在37℃下对低密度脂蛋白(LDL)(北京协和三友科技开发公司)氧化48h而得。(2)血清抗oxLDL抗体的测定:所有标本的抗oxLDL抗体浓度通过ELISA法测定 [3] 。标本测定在平底酶标板(华美公司)上进行。在进行测定前，平底酶标板的一半测定孔加入100μl在pH为9.6的碳酸氢根缓冲液中浓度为7.5mg/L的oxLDL;另一半测定孔加入100μl在pH为9.6的碳酸氢根缓冲液中浓度为7.5mg/L的LDL，测定板在4℃下包被24h，为了防止LDL的氧化，碳酸氢根缓冲液中含有0.27mmol/L的EDTA。测定板包被24h后，用含有0.05%Tween20(华美公司)的磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗3次，然后用含有5%小牛血清(BSA)(中科院细胞所)的PBS在4℃下封板2h(150μl/孔)，2h后用含有0.05%Tween20的PBS冲洗3次。标本用含1%BSA的PBS稀释至1:20，在测定板中加入100μl/孔，在4℃下包被24h。24h后，测定板用含有0.05%Tween20的PBS冲洗3次。将辣根过氧化酶结合的兔 抗人免疫球蛋白G(Dako)用PBS稀释至1:6000，在测定板中加入100μl/孔并在4℃下包被3h，3h后用含有0.05%Tween20的PBS冲洗3次。冲洗后，测定板中加入100μl/孔的过氧化底物(3，3’，5，5’-Tetramethylbenzidine)(Sigma)，在避光条件下进行显色反应30min，然后在测定板中加入100μl/孔，浓度为0.5mol/L的硫酸终止显色反应。在450nm处测光密度(OD)值(SANCO318MC型酶标仪，上海三科仪器有限公司)，并用ODoxLDL/ODnLDL的比值来表示结果。
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1.3 统计方法 测定值以均数±标准差(X±s)表示，组间比较采用ANOVA检验和Bonferroni检验，P<0.05表示有显著性差异(使用SPSS10.0软件)。
2 结果
所有血清指标水平在各组间的比较:见表1。血清ICAM-1水平比较:AMI合并2型糖尿病组(780±90)显著高于AMI无糖尿病组(689±92，P<0.05)和正常对照组(619±95，P<0.01)。血清VCAM-1水平比较:AMI合并2型糖尿病组(1780±475)显著高于AMI无糖尿病组(1528±434，P<0.05)和正常对照组(1137±322，P<0.01)。E-选择素水平比较:AMI合并2型糖尿组(65±20)显著高于AMI无糖尿病组(51±19，P<0.05)和正常对照组(38±13，P<0.01)。抗oxLDL抗体水平比较:AMI合并2型糖尿病组(1.71±0.65)显著高于AMI无糖尿病组(1.01±0.62，P<0.05)和正常对照组(0.84±0.35，P<0.01)。
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表1 各血清指标水平在三组间的差异(略)
3 讨论
本研究主要目的是比较血清ICAM-1、VCAM-1、E-选择素和抗oxLDL抗体水平在AMI合并2型糖尿病病人与无糖尿病患者之间的差异。研究结果表明在AMI合并2型糖尿病病人中，血清ICAM-1、VCAM-1、E-选择素和抗oxLDL抗体水平均显著高于AMI无糖尿病患者。目前糖尿病与冠心病的密切关系已越来越被人们所认识，而且证实了ICAM-1、VCAM-1和E-选择素等细胞粘附分子在冠心病发生和发展中发挥着重要作用。有文献报道糖尿病病人其冠心病发病危险性较无糖尿病者高2～6倍，一些细胞粘附分子的表达程度与血糖浓度相关，在糖尿病病人中细胞粘附分子水平明显升高并能促进冠心病病情发展;经降血糖治疗后，某些细胞粘附分子如VCAM-1和E-选择素水平与治疗前相比，可下降约30% [4] 。
同时，有研究认为糖尿病可以增加低密度脂蛋白(LDL)氧化修饰程度 [5] ，而LDL一旦氧化形成oxLDL后，其生物活性发生明显改变，能促进细胞粘附分子表达，从而增加炎性细胞的粘附、浸润和聚集，导致冠心病发生和发展 [1] 。此外，oxLDL水平增高还可通过增加冠状动脉粥样 硬化斑块脂质含量以及削弱纤维帽厚度引起纤维帽抗损伤强度减弱，导致斑块稳定性降低而发生急性心脏事件 [6] 。到目前为止，除了Bellemo等人的研究结果 [7] 与本研究一致外，大多数相关研究结果都显示无论是否合并糖尿病，血清抗oxLDL抗体水平无显著差异。产生两种结论的主要原因可能是在不同研究中有关研究对象、检测方法以及检测抗原上存在着差异，例如在本研究和Bellemo等人的研究中，检测抗原是oxLDL;而在其他研究中的检测抗原主要是MDA-LDL和HNE-LDL。
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通过上述研究，我们认为积极有效地预防和控制糖尿病是减少冠心病发生、发展和降低急性心脏事件发生率的重要措施;同时，有必要进一步探索调控血管细胞粘附分子活性及其表达的方法和全面抑制oxLDL生物作用的手段，这些可能会成为冠心病预防和治疗非常重要的新策略。
参考文献
1 Jang YS，Lincoff AM，Plow EF，et al.Cell adhesion molecules in CoroˉnaryArtery Disease.J Am Coll Cardiol，1994，24:1591-1601.
2 Yla-Herttuala S.Is oxidized low-density lipoprotein present in vivo?Curr Opin Lipidol，1998，9:337-344.
3 Sinikka K，Enockson C，Lopes-Virella MF，et al.Preparation of a huˉman standard for determination of the levels of antibodies tooxidatively modified low density lipoporteins.Clin And Diagno Lab Immuno，1998，5(6):817-822.
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4 Lester LB，Barton Duell P.Atherosclerosis:cell biology and lipoproteins.Curr Opin Lipidol，1999，10:77-79.
5 Deslypere J-P.Modified lipoproteins in diabetes.J Intern Med，1994， 236:69-74.
6 Libby P，Geng YJ，Aikawa M，et al.Macrophages and atherosclerotic plaque stability.Curr Opin Lipidol，1996，7(5):330-335.
7 Bellemo G，Maggi E，Poli M，et al.Autoantibodies against oxidatively modified low-density lipoproteins in NIDDM.Diabetes，1995，44:60-66.
作者单位:1 200002上海市黄浦区中心医院内科
2 上海第二医科大学附属仁济医院心内科
(编辑 晓勇), 百拇医药(周哲慧)