高效液相色谱法测定亥颗期酒中肉桂酸的含量
【摘要】 目的 建立高效液相色谱法测定亥颗期酒中肉桂酸的含量。方法 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;甲醇-0.5%磷酸(48:52)为流动相;流速为1.0ml/min;检测波长为280nm。结果 均回收率为97.30%，RSD=1.89%。结论 该方法简便，快速，灵敏，重现性好，可用于产品质量控制。
关键词
【文献标识码】 B 【文章编号】 1726-6424(2003)09-0838-02
亥颗期酒中肉桂 [1] 为君药，具有补火助阳，散寒止痛，活血通经等功效。本文建立了高效液相色谱法测定亥颗期酒中有效成分肉桂中肉桂酸的含量，现介绍如下。
1 材料与方法
1.1 仪器及试剂 仪器为HP-1100型高效液相色谱仪(配四元泵、自动进样器、VWD可变波长测器)。肉桂酸对照品:中国药品生物制品检定所提供(编号为786-9001)。流动相配制用甲醇为色谱纯，磷酸为色谱纯，其余溶剂均为分析纯。
, 百拇医药
1.2 色谱条件及检测波长的选择 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(实验中用Kromasiltm C18250mm×4.6mm，5μm);甲醇-0.5%磷酸(48:52)为流动相;流速为1.0ml/min;检测波长为280nm;柱温:30℃。理论板数按肉桂酸峰计算应不低于17000。流动相的选择参考复方桂
参止痛合剂 [2] 和肉桂 [3] 含量测定项下的条件以甲醇-0.5%磷酸 (48:52)为流动相。流动相为溶剂制备的对照品溶液，测定其吸收光谱，最大吸收波长为265nm，但处方中药味较多，在此波长处测定时，干扰较大。实验确定280nm波长为检测波长，在此条件下测定，样品能被很好地分离，分离度均达1.5以上。理论板数在建立该方法的实验中按肉桂酸峰计算均在17000以上，而本品处方中药味较多，十分复杂，故理论板数规定为按肉桂酸峰计算应不低于17000。进样量10μl。在此条件下对肉桂酸对照品溶液、亥颗期酒供试品溶液进行测定，结果均较为理想，同法制备的亥颗期酒空白(即不含肉桂材的亥颗期酒)测定结果则为阴性，即未见与肉桂酸对照品保留时间相一致的峰，说明其他药材对样品测定无干扰。
, 百拇医药
1.3 对照品溶液的制备 精密称取在肉桂酸对照品2.24mg，置100ml量瓶中，加入甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml中含肉桂酸0.0224mg的溶液)。
1.4 供试品溶液的制备 精密取本品50ml，置分液漏斗中，加1.5g氯化钠，分别加乙醚30ml、30ml、20ml、20ml提取4次，合并乙醚层，置蒸发皿中，水浴蒸干，残渣用甲醇转移至10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度。离心，取上清液，用0.45μm滤膜滤过，作为供试品溶液，按上述色谱条件测定。
2 方法学考察
2.1 线性关系考察 分别精密吸取肉桂酸对照品溶液(浓度为0.0224mg/ml)1、3、5、7、9、10、15、20μl按上述色谱条件测定峰面积，结果见表1，以峰面积积分值对进样量进行回归处理，肉桂酸在0.0224～0.448μg范围内呈现良好的线性关系。回归方程为Y=10158.97X+26.7856，r=0.99992，理论板数均在12000以上。
, http://www.100md.com
2.2 精密度试验 取同一肉桂酸对照品溶液，按上述色谱条件，连续测定6次(进样量5μl)，测得峰面积积分值分别为1111.84、1140.53、1159.22、1161.16、1114.87、1113.90，RSD=2.04%(n=6)。表明该方法精密度较好。
2.3 稳定性试验 取同一供试品溶液，按上述色谱条件测定6次，每次间隔约2h，测得峰面积积分值分别为1181.27、1175.00、1198.90、1212.85、1220.19、1209.83，RSD=1.51%(n=6)，表明供试品溶液在10h内稳定。
2.4 重现性试验 取同一批号的样品50ml(批号为20011203)5份，按含量测定方法试验，结果测得每10ml样品中含肉桂酸分别为0.0226、0.0227、0.0231、0.0234、0.0235mg/ml，RSD=1.75%(n=5)，说明该法重现性较好。
2.5 回收率试验 精密取批号为20010805样品(肉桂酸含量为0.00183mg/ml)20ml，25ml各3份，置分液漏斗中，分别精密加入肉桂酸对照溶液(浓度为0.074mg/ml，乙醚制)1.5ml;1.0ml，同法制备供试品溶液。按上述色谱条件测定，计算回收率，平均回收率为97.30%，RSD=1.89%，见表1。
, 百拇医药
3 样品测定
分别取10个批号的样品按上述方法进行含量测定，结 果分别为0.0183、0.0228、0.0110、0.0230、0.0253、0.0255、0.0254、0.0275、0.0279、0.0257，肉桂药材含量为0.0181%，含量限度规定为本品每10ml含肉桂以肉桂酸(C9H8O2)计，不得少于0.010mg。
表1 加样回收试验结果略
4 结论
本文建立了高效液相色谱法测定亥颗期酒中肉桂酸的含量，该方法简便、快速、灵敏、重现性好，可用于产品质量控制。
参考文献
1 中国药典编委会.中国药典，北京:中国化工出版社，2000，104.
2 中华人民共和国国家药品监督局药品标准，WS-324(Z-41)-99.
3 陈发奎.常用中草药有效成分的含量测定，北京:人民卫生出版社，2001，227.
作者单位:1 650011云南省药品检验所
2 666100云南省西双版纳药品检验所
(收稿日期:2003-09-19)
(编辑 心怡), 百拇医药(郭永利)
关键词
【文献标识码】 B 【文章编号】 1726-6424(2003)09-0838-02
亥颗期酒中肉桂 [1] 为君药，具有补火助阳，散寒止痛，活血通经等功效。本文建立了高效液相色谱法测定亥颗期酒中有效成分肉桂中肉桂酸的含量，现介绍如下。
1 材料与方法
1.1 仪器及试剂 仪器为HP-1100型高效液相色谱仪(配四元泵、自动进样器、VWD可变波长测器)。肉桂酸对照品:中国药品生物制品检定所提供(编号为786-9001)。流动相配制用甲醇为色谱纯，磷酸为色谱纯，其余溶剂均为分析纯。
, 百拇医药
1.2 色谱条件及检测波长的选择 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(实验中用Kromasiltm C18250mm×4.6mm，5μm);甲醇-0.5%磷酸(48:52)为流动相;流速为1.0ml/min;检测波长为280nm;柱温:30℃。理论板数按肉桂酸峰计算应不低于17000。流动相的选择参考复方桂
参止痛合剂 [2] 和肉桂 [3] 含量测定项下的条件以甲醇-0.5%磷酸 (48:52)为流动相。流动相为溶剂制备的对照品溶液，测定其吸收光谱，最大吸收波长为265nm，但处方中药味较多，在此波长处测定时，干扰较大。实验确定280nm波长为检测波长，在此条件下测定，样品能被很好地分离，分离度均达1.5以上。理论板数在建立该方法的实验中按肉桂酸峰计算均在17000以上，而本品处方中药味较多，十分复杂，故理论板数规定为按肉桂酸峰计算应不低于17000。进样量10μl。在此条件下对肉桂酸对照品溶液、亥颗期酒供试品溶液进行测定，结果均较为理想，同法制备的亥颗期酒空白(即不含肉桂材的亥颗期酒)测定结果则为阴性，即未见与肉桂酸对照品保留时间相一致的峰，说明其他药材对样品测定无干扰。
, 百拇医药
1.3 对照品溶液的制备 精密称取在肉桂酸对照品2.24mg，置100ml量瓶中，加入甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml中含肉桂酸0.0224mg的溶液)。
1.4 供试品溶液的制备 精密取本品50ml，置分液漏斗中，加1.5g氯化钠，分别加乙醚30ml、30ml、20ml、20ml提取4次，合并乙醚层，置蒸发皿中，水浴蒸干，残渣用甲醇转移至10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度。离心，取上清液，用0.45μm滤膜滤过，作为供试品溶液，按上述色谱条件测定。
2 方法学考察
2.1 线性关系考察 分别精密吸取肉桂酸对照品溶液(浓度为0.0224mg/ml)1、3、5、7、9、10、15、20μl按上述色谱条件测定峰面积，结果见表1，以峰面积积分值对进样量进行回归处理，肉桂酸在0.0224～0.448μg范围内呈现良好的线性关系。回归方程为Y=10158.97X+26.7856，r=0.99992，理论板数均在12000以上。
, http://www.100md.com
2.2 精密度试验 取同一肉桂酸对照品溶液，按上述色谱条件，连续测定6次(进样量5μl)，测得峰面积积分值分别为1111.84、1140.53、1159.22、1161.16、1114.87、1113.90，RSD=2.04%(n=6)。表明该方法精密度较好。
2.3 稳定性试验 取同一供试品溶液，按上述色谱条件测定6次，每次间隔约2h，测得峰面积积分值分别为1181.27、1175.00、1198.90、1212.85、1220.19、1209.83，RSD=1.51%(n=6)，表明供试品溶液在10h内稳定。
2.4 重现性试验 取同一批号的样品50ml(批号为20011203)5份，按含量测定方法试验，结果测得每10ml样品中含肉桂酸分别为0.0226、0.0227、0.0231、0.0234、0.0235mg/ml，RSD=1.75%(n=5)，说明该法重现性较好。
2.5 回收率试验 精密取批号为20010805样品(肉桂酸含量为0.00183mg/ml)20ml，25ml各3份，置分液漏斗中，分别精密加入肉桂酸对照溶液(浓度为0.074mg/ml，乙醚制)1.5ml;1.0ml，同法制备供试品溶液。按上述色谱条件测定，计算回收率，平均回收率为97.30%，RSD=1.89%，见表1。
, 百拇医药
3 样品测定
分别取10个批号的样品按上述方法进行含量测定，结 果分别为0.0183、0.0228、0.0110、0.0230、0.0253、0.0255、0.0254、0.0275、0.0279、0.0257，肉桂药材含量为0.0181%，含量限度规定为本品每10ml含肉桂以肉桂酸(C9H8O2)计，不得少于0.010mg。
表1 加样回收试验结果略
4 结论
本文建立了高效液相色谱法测定亥颗期酒中肉桂酸的含量，该方法简便、快速、灵敏、重现性好，可用于产品质量控制。
参考文献
1 中国药典编委会.中国药典，北京:中国化工出版社，2000，104.
2 中华人民共和国国家药品监督局药品标准，WS-324(Z-41)-99.
3 陈发奎.常用中草药有效成分的含量测定，北京:人民卫生出版社，2001，227.
作者单位:1 650011云南省药品检验所
2 666100云南省西双版纳药品检验所
(收稿日期:2003-09-19)
(编辑 心怡), 百拇医药(郭永利)