清热养阴方药及其配伍的抗金黄色葡萄球菌作用
【摘要】 目的 研究清热养阴、清热、养阴方药对金黄色葡萄球菌的抑杀作用。方法采用试管法、平皿法研究清热养阴方药及其配伍的最低抑菌和杀菌浓度，采用纸片法研究清热养阴方药及其配伍的抗菌效应。结果 清热养阴方、清热方的MIC和MBD均为7.8mg/ml，养阴方的MIC为15.68mg/ml，MBD为31.28mg/ml;清热养阴方和清热方的抑菌环面积分别为(3.35±0.46)cm 2 和(2.9±0.33)cm 2 。结论 清热养阴方药及其配伍对金黄色葡萄球菌有一定的抑杀作用，且清热养阴方药的作用优于清热方药和养阴方药。
关键词 清热养阴方 清热方 养阴方 金黄色葡萄球菌
【文献标识码】 B 【文章编号】 1726-7587(2003)11-1016-02
在温病过程中邪热亢盛和阴液损伤是最常见的病理变化，而清热法和养阴法则是温病两种重要的治法。由于在病变过程中热盛和阴伤常常同时兼见，因而清热法与养阴法也常需配合使用，为了研究清热法和养阴法配合使用的作用原理，对清热养阴方药及其配伍的抗菌作用进行了研究，现报告如下。
, 百拇医药
1 实验材料
1.1 药物及试剂 清热养阴方:由黄连、黄芩、生地、麦冬组成。清热方:由黄连、黄芩组成。养阴方:由生地、麦冬组成。上述三方按常规制成100%水煎液，pH值调至7.0，115℃灭菌20min，4℃冰箱贮藏备用。菌种:金黄色葡萄球菌(26003)，由南京中医药大学微生物学教研室提供。生长浊度9×10 9 个/ml。营养肉汤:江苏省卫生防疫微生物试剂厂产品，批号:000112。营养琼脂:中国医药(集团)上海化学试剂公司产品，批号:001108。
1.2 仪器设备 隔水式电热恒温培养箱:上海跃进医疗器械一厂产品，型号:PYX-DHS-50X65。净化工作台:吴江市净化设备厂产品，型号:YJ-875SDB。电热手提压力蒸气消毒器:上海医用核子仪器厂产品，型号:YXQ·SG41·280。
2 方法与结果
, 百拇医药
2.1 最低抑金黄色葡萄球菌浓度(MIC)测定 将金黄色葡萄球菌菌液用生理盐水按1∶1000浓度稀释，置37℃恒温培养箱温育24h。取加棉塞灭菌玻璃试管30支，分为清热养阴方、清热方、养阴方三组，每组10支，并按1～10号编号。以无菌操作法，于每管中加入无菌肉汤培养基2ml，然后在各组1号管中分别加入清热养阴方、清热方、养阴方水煎液各2ml，充分混匀后，吸取2ml加入2号管中混匀，并按此法依次重复进行倍比稀释到8号管，8号管混匀后吸出2ml混合液弃去。各组1～8号管中分别再加入金黄色葡萄球菌液0.1ml。各组9号管中加入0.1ml菌液作阳性对照管，各组10号管中分别加入清热养阴方、清热方、养阴方水煎液2ml后混匀，吸出2ml混合液弃去，不加菌液作阴性对照管。将各管置37℃恒温培养箱中培养24h，取出观察结果，以无细菌生长管所含最低药物浓度作为MIC。结果见表1。
2.2 最低杀金黄色葡萄球菌浓度(MBD)测定 从以上所有无细菌生长的试管中，用灭菌接种环分别取出0.1ml，移种于无菌琼脂平板，涂匀，37℃恒温培养箱中培养24h，以菌落数少于5个的平板其最低含药物浓度作为MBD。结果见表1。
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表1 清热养阴方药及其配伍杀菌试验结果(略)
实验结果表明:清热养阴方、清热方的MIC和MBD均为7.8mg/ml，养阴方的MIC为15.68mg/ml，MBD为31.28 mg/ml。显示清热养阴方药及其配伍对金黄色葡萄球菌具有显著抗菌作用。
2.3 清热养阴方药及其配伍的抗菌作用研究(纸片法) 将金黄色葡萄球菌液稀释1000倍后，置37℃恒温培养箱中培养24h，将菌液用无菌棉签均匀涂布于普通琼脂平板表面，晾干。取直径为6mm的灭菌滤纸片，分别将清热养阴方、清热方、养阴方药液20μg滴于滤纸片上，然后将含药滤纸片平辅于已接种细菌的琼脂平皿表面，置37℃恒温培养箱中培养24h后计算抑菌环的面积。结果见表2。
表2 清热养阴方药及其配伍抗菌试验结果(略)
实验结果提示:清热养阴方和清热方的抑菌环面积分别为(3.35±0.46)cm 2 和(2.9±0.33)cm 2 ，两组相比差异有显著性(P<0.05)，清热养阴方的抗金葡菌作用强于清热方。养阴方未见明显的抑菌环。
, 百拇医药
3 讨论
温病是外感疾病中具有明显热象的一类疾病，其发病迅速，以发热为主症，热象较甚，且易化燥伤阴。温病的致病原因是温邪，温邪的本质是病原微生物，如细菌、病毒等，采取有效的方法祛除温邪是温病治疗的基本措施。而祛除温邪的关键是抑制或杀灭侵入体内的病原微生物以及清除病原微生物所产生的毒素。清热法是祛除温邪的重要治法，养阴法注重于对受温邪损害组织器官的修复，两法是温病治疗中最为常用的治法，而且经常配合使用。本项研究的结果提示，清热养阴方、清热方和养阴方均有一定的抑杀金黄色葡萄球菌的作用，且清热养阴方的作用优于清热方和养阴方，表明清热方药与养阴方药的配伍，对金黄色葡萄球菌的抑杀具有协同增效作用。
基金项目:江苏省教育厅资助课题(编号:01KJB360008)
作者单位:210029南京中医药大学
(收稿日期:2003-10-13)
(编辑 刘娜), 百拇医药(刘涛)
关键词 清热养阴方 清热方 养阴方 金黄色葡萄球菌
【文献标识码】 B 【文章编号】 1726-7587(2003)11-1016-02
在温病过程中邪热亢盛和阴液损伤是最常见的病理变化，而清热法和养阴法则是温病两种重要的治法。由于在病变过程中热盛和阴伤常常同时兼见，因而清热法与养阴法也常需配合使用，为了研究清热法和养阴法配合使用的作用原理，对清热养阴方药及其配伍的抗菌作用进行了研究，现报告如下。
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1 实验材料
1.1 药物及试剂 清热养阴方:由黄连、黄芩、生地、麦冬组成。清热方:由黄连、黄芩组成。养阴方:由生地、麦冬组成。上述三方按常规制成100%水煎液，pH值调至7.0，115℃灭菌20min，4℃冰箱贮藏备用。菌种:金黄色葡萄球菌(26003)，由南京中医药大学微生物学教研室提供。生长浊度9×10 9 个/ml。营养肉汤:江苏省卫生防疫微生物试剂厂产品，批号:000112。营养琼脂:中国医药(集团)上海化学试剂公司产品，批号:001108。
1.2 仪器设备 隔水式电热恒温培养箱:上海跃进医疗器械一厂产品，型号:PYX-DHS-50X65。净化工作台:吴江市净化设备厂产品，型号:YJ-875SDB。电热手提压力蒸气消毒器:上海医用核子仪器厂产品，型号:YXQ·SG41·280。
2 方法与结果
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2.1 最低抑金黄色葡萄球菌浓度(MIC)测定 将金黄色葡萄球菌菌液用生理盐水按1∶1000浓度稀释，置37℃恒温培养箱温育24h。取加棉塞灭菌玻璃试管30支，分为清热养阴方、清热方、养阴方三组，每组10支，并按1～10号编号。以无菌操作法，于每管中加入无菌肉汤培养基2ml，然后在各组1号管中分别加入清热养阴方、清热方、养阴方水煎液各2ml，充分混匀后，吸取2ml加入2号管中混匀，并按此法依次重复进行倍比稀释到8号管，8号管混匀后吸出2ml混合液弃去。各组1～8号管中分别再加入金黄色葡萄球菌液0.1ml。各组9号管中加入0.1ml菌液作阳性对照管，各组10号管中分别加入清热养阴方、清热方、养阴方水煎液2ml后混匀，吸出2ml混合液弃去，不加菌液作阴性对照管。将各管置37℃恒温培养箱中培养24h，取出观察结果，以无细菌生长管所含最低药物浓度作为MIC。结果见表1。
2.2 最低杀金黄色葡萄球菌浓度(MBD)测定 从以上所有无细菌生长的试管中，用灭菌接种环分别取出0.1ml，移种于无菌琼脂平板，涂匀，37℃恒温培养箱中培养24h，以菌落数少于5个的平板其最低含药物浓度作为MBD。结果见表1。
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表1 清热养阴方药及其配伍杀菌试验结果(略)
实验结果表明:清热养阴方、清热方的MIC和MBD均为7.8mg/ml，养阴方的MIC为15.68mg/ml，MBD为31.28 mg/ml。显示清热养阴方药及其配伍对金黄色葡萄球菌具有显著抗菌作用。
2.3 清热养阴方药及其配伍的抗菌作用研究(纸片法) 将金黄色葡萄球菌液稀释1000倍后，置37℃恒温培养箱中培养24h，将菌液用无菌棉签均匀涂布于普通琼脂平板表面，晾干。取直径为6mm的灭菌滤纸片，分别将清热养阴方、清热方、养阴方药液20μg滴于滤纸片上，然后将含药滤纸片平辅于已接种细菌的琼脂平皿表面，置37℃恒温培养箱中培养24h后计算抑菌环的面积。结果见表2。
表2 清热养阴方药及其配伍抗菌试验结果(略)
实验结果提示:清热养阴方和清热方的抑菌环面积分别为(3.35±0.46)cm 2 和(2.9±0.33)cm 2 ，两组相比差异有显著性(P<0.05)，清热养阴方的抗金葡菌作用强于清热方。养阴方未见明显的抑菌环。
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3 讨论
温病是外感疾病中具有明显热象的一类疾病，其发病迅速，以发热为主症，热象较甚，且易化燥伤阴。温病的致病原因是温邪，温邪的本质是病原微生物，如细菌、病毒等，采取有效的方法祛除温邪是温病治疗的基本措施。而祛除温邪的关键是抑制或杀灭侵入体内的病原微生物以及清除病原微生物所产生的毒素。清热法是祛除温邪的重要治法，养阴法注重于对受温邪损害组织器官的修复，两法是温病治疗中最为常用的治法，而且经常配合使用。本项研究的结果提示，清热养阴方、清热方和养阴方均有一定的抑杀金黄色葡萄球菌的作用，且清热养阴方的作用优于清热方和养阴方，表明清热方药与养阴方药的配伍，对金黄色葡萄球菌的抑杀具有协同增效作用。
基金项目:江苏省教育厅资助课题(编号:01KJB360008)
作者单位:210029南京中医药大学
(收稿日期:2003-10-13)
(编辑 刘娜), 百拇医药(刘涛)