克纤胶囊对小鼠T淋巴细胞亚群的影响
【摘要】 目的 观察克纤胶囊对小鼠T淋巴细胞亚群的影响。方法 以腹腔注射环磷酰胺(CY)引起免疫抑制动物模型，用克纤胶囊灌胃，并以大黄虫胶囊为阳性对照药，考察克纤胶囊对小鼠外周血T淋巴细胞亚群CD4 + 、CD8 + 的百分率以及CD4 + /CD8 + 比值。结果 克纤胶囊能提高环磷酰胺模型小鼠CD4 + 、CD8 + 的百分率以及CD4/CD8比值(P<0.05，P<0.01)。结论 克纤胶囊能增强小氧T淋巴细胞免疫水平，有效地调节免疫功能。
关键词 克纤胶囊 肝纤维化 T淋巴细胞亚群
【文献标识码】 A 【文章编号】 1726-6424(2003)09-0769-02
Effects on Kexian Capsule in mice T-lymphocyte subpopulation
, 百拇医药
Ren Jianping，Zeng Yanan，Yan Qiwei.
Wuhan Hospital of Traditional Chinese Medicine，Hu Bei430014
【Abstract】 Objective To observe the effects of Kexian Capsule in mice T-lymphocyte subpopulation.Methods The model of mice immune inhibition was established by introperitoneal medication of cyclophosphamide(CY).Conparing with control group of Dahuang Zhachong Capsule，Kexian Capsulewas introgastric injected to inspect the percentage of CD4 + ，CD8 + and the ratio of CD4 + /CD8 + .Results Kexian Capsule was of improving values of percentage to the CD4 + and CD8 + as well as the ratio.Conclusion Kexian Capsule can enhance the contents in mice T-lymphocyte so As to regulate the immune effects.
, 百拇医药
Key words Kexian Capsule hepaticfibrosis T-lymphocyte subpopulation
各种病因引起的慢性肝病及某些有毒物质所致的肝脏损伤，均可引起肝细胞炎症、坏死，并继发纤维化的病理特征，肝纤维化是向肝硬化甚至原发性肝细胞癌发展的一个中间环节。中药对机体细胞功能具有一定的调节作用，并得到证实。克纤胶囊是笔者自行研制的治疗肝纤维化的纯中药制剂。本研究考察了克纤胶囊对小鼠T淋巴细胞亚群的影响，现报告如下。
1 实验材料
1.1 动物 Balb/C种小白鼠180只，雌雄各半，体重18～22g，月龄1～2个月，均由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供。
1.2 药物 克纤胶囊:武汉市中医医院制备(批号:2001018);大黄虫胶囊:吉林省临江制药厂出品(批号:0105009);环磷酰胺(CY):上海华联制药厂出品(批号:20010908)。
, 百拇医药
1.3 试剂 CD4-PE单克隆抗体，由联科生物科技有限公司提供;CD8-PE单克隆抗体，由联科生物科技有限公司提供;溶血素，由美国BD公司提供。
1.4 仪器 FACSCalibur流式细胞仪，美国BD公司生产。
2 实验方法
2.1 小鼠免疫功能低下模型 取Balb/C小白鼠60只，雌雄各半，随机分为6组。其中，正常照组10只作为空白对照，另5组每组10只造模。造模的每组10只分别灌胃给予生理盐水、大黄虫胶囊(15g/kg)、克纤胶囊低剂量(10g/kg)、克纤胶囊中剂量(15g/kg)、克纤胶囊高剂量(20g/kg)，连续给药9天。从第5天起，每天腹腔注射环磷酰胺50mg/kg，1次/d，连续5天，造成免疫功能低下模型 [1，2] 。
2.2 测定方法 分别取10μl CD4-PE和10μl CD8-FITC单抗加入EP管中，再加入50μl抗凝的全血样品，充分混匀，置于阴暗处反应15min后，加450μl溶血素，混匀。再放于阴暗处反应15min后，上流式细胞仪检测，分析2000个以上细胞。用CellQuest软件分析CD4、CD8阳性标记细胞百分率，计算CD4、CD8的比值 [3] 。
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2.3 统计学处理 实验数据用ˉx±s表示，各组均数用t检验进行统计学处理。
3 实验结果
环磷酰胺造模后，模型组CD4 + 、CD8 + 的百分率及CD4/CD8比值均明显降低。克纤胶囊及大黄虫胶囊均能使实验组百分率及比值提高，与模型组比较，克纤胶囊大、中剂量组及阳性对照组差异均有显著性(P<0.01，P<0.05)。说明克纤胶囊能增强免疫抑制模型小鼠T淋巴细胞免疫水平，有效地调节免疫功能。结果见表1。
表1 克纤胶囊对T小鼠淋巴细胞亚群的影响略
4 讨论各种病因引起的慢性肝病，各种损肝因素所致的肝脏损伤，都可能发生肝细胞坏死、炎症并继发纤维化的病理特征。肝纤维化是指肝细胞发生坏死及炎症刺激时，肝脏中胶原蛋白等细胞外基质(ECM)的增生与降解失去平衡，进而导致肝脏内纤维结缔组织异常沉积的病理过程，轻者称为纤维化，重者进而使肝小叶结构改建、假小叶及结节形成，称肝硬化[4]
, http://www.100md.com
祖国医学虽无肝纤维化、肝硬化的概念和理论描述，但与“胁痛”、“积聚”、“鼓胀”、“黄疸”等病症有相似的症状学内涵。本虚标实是本病的病机特点，益气活血为其主要治法。中医学认为，疾病的发生、发展与变化，与机体的正气强弱和致病邪气的性质有密切的关系。一般认为，正气是包括了免疫功能在内的一切抗病能力，免疫系统及其所表达的功能是构成正气的重要因素，邪气则代表一切可导致人体功能紊乱，内环境失衡的因素。从免疫学角度考察，病原微生物和其他外来抗原物质等与由于免疫功能失调而产生的免疫复合物等均归属于邪气。外周血CD4T细胞百分率降低，CD8T细胞百分率增高，CD4/CD8比值下降，提示辅助性T细胞(T H )减少，抑制性T细胞(T S )增加和功能亢进可能是引起细胞免疫功能下降的重要因素。T细胞是一个不均质的细胞群体。按其功能和细胞表面标志可将T细胞区分为若干亚群。近年来有人用抗人T细胞单克隆抗体以流式细胞仪(FACS)检测T细胞表面分化抗原，并将人外周血和胸腺细胞区分为两个亚群，一个是CD4细胞亚群，另一个是CD8细胞亚群 [5] 。
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研究表明，丹参能抑制小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡血细胞的作用，降低小鼠腹腔巨噬细胞吞噬百分率和吞噬指数。丹参与环磷酰胺联合应用时，具有协同抑制功能，丹参能降低环磷酰胺的副作用。苦参的有效成分苦参碱和苦参槐定碱对巨噬细胞吞噬功能有抑制作用。也有人认为苦参碱对巨噬细胞有细胞毒作用，能明显降低巨噬细胞抑制P 815 细胞增殖的效应 [6] 。有人报告黄芪可显著促进骨髓造血细胞细DNA的合成，加快有核细胞分裂过程。黄芪注射液腹腔注射可防治环磷酰胺所致小鼠骨髓造血功能障碍，阻止骨髓有核细胞和外周血白细胞数明显减少，促进骨髓粒细胞 造血功能，对正常小鼠粒细胞造血也有刺激作用。黄芪的上述功能可能是由于促进细胞内cAMP的含量增加，促进了骨髓细胞的增殖分化 [7] 。黄芪茎叶总黄酮对氢化可的松模型小鼠T细胞总数和L 3 T 4 细胞有增强作用 [8] 。
克纤胶囊由丹参、黄芪、大黄、苦参等药组成，以益气化瘀，疏肝化积为法。方中丹参活血化瘀，黄芪益气健脾，大黄通里攻下，苦参清热燥湿。实验证明，克纤胶囊对实验性急、慢性肝损伤有一定保护作用;能提高机体体液免疫及细胞免疫功能 [9～11] ;尤其是能增强免疫抑制模型小鼠T淋巴细胞免疫调节作用，且存在着一定的量效关系。中药免疫调节治疗肝纤维化的研究虽取得了一定的成效，但其作用机制的研究还有许多值得继续探讨的问题，在研究广度和深度方面还应进一步加强。
, 百拇医药
参考文献
1 毕爱华，刘恭植.医学免疫学，武汉:同济医科大学出版社，1986，281-282.
2 毕爱华，王立人.谷氨酸免疫抑制作用的研究.同济医科大学学报，1985，(6):419.
3 裘法祖，武忠弼，吴在德，等.现代免疫学实验技术，武汉:湖北科学技术出版社，1998，486-487.
4 程明亮，杨长青.肝纤维化的基础研究及临床，北京:人民卫生出版社，2002，1.
5 贺新怀，席孝贤.中医药免疫学，北京:人民军医出版社，2002，121.
6 骆和生.免疫中药学———中药免疫药理与临床，北京:中国协和医科大学北京医科大学联合出版社，1999，88.
, 百拇医药
7 罗志勇.中草药及其有效成分促粒系造血的研究进展.中草药，1995，26(12):653.
8 焦艳.膜荚黄芪茎叶总黄酮对小鼠免疫功能的影响.中国中西医结合杂志，1999，19(6):356.
9 任建平，胡锡元，严启伟.克纤胶囊对急性肝损伤影响的实验研究.山西中医学院学报，2002，3(4):14-15.
10 任建平，胡锡元，陈梁，等.克纤胶囊对慢性肝损伤大鼠模型肝功能及肝纤维化指标的影响.湖北中医学院学报，2003，5(1):25-26.
11 任建平，曾亚男.克纤胶囊免疫药理的实验研究.中医药研究，2002，18(6):39-40.
作者单位:430014湖北省武汉市中医医院
(收稿日期:2003-09-19)
(编辑 李欣), http://www.100md.com
关键词 克纤胶囊 肝纤维化 T淋巴细胞亚群
【文献标识码】 A 【文章编号】 1726-6424(2003)09-0769-02
Effects on Kexian Capsule in mice T-lymphocyte subpopulation
, 百拇医药
Ren Jianping，Zeng Yanan，Yan Qiwei.
Wuhan Hospital of Traditional Chinese Medicine，Hu Bei430014
【Abstract】 Objective To observe the effects of Kexian Capsule in mice T-lymphocyte subpopulation.Methods The model of mice immune inhibition was established by introperitoneal medication of cyclophosphamide(CY).Conparing with control group of Dahuang Zhachong Capsule，Kexian Capsulewas introgastric injected to inspect the percentage of CD4 + ，CD8 + and the ratio of CD4 + /CD8 + .Results Kexian Capsule was of improving values of percentage to the CD4 + and CD8 + as well as the ratio.Conclusion Kexian Capsule can enhance the contents in mice T-lymphocyte so As to regulate the immune effects.
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Key words Kexian Capsule hepaticfibrosis T-lymphocyte subpopulation
各种病因引起的慢性肝病及某些有毒物质所致的肝脏损伤，均可引起肝细胞炎症、坏死，并继发纤维化的病理特征，肝纤维化是向肝硬化甚至原发性肝细胞癌发展的一个中间环节。中药对机体细胞功能具有一定的调节作用，并得到证实。克纤胶囊是笔者自行研制的治疗肝纤维化的纯中药制剂。本研究考察了克纤胶囊对小鼠T淋巴细胞亚群的影响，现报告如下。
1 实验材料
1.1 动物 Balb/C种小白鼠180只，雌雄各半，体重18～22g，月龄1～2个月，均由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供。
1.2 药物 克纤胶囊:武汉市中医医院制备(批号:2001018);大黄虫胶囊:吉林省临江制药厂出品(批号:0105009);环磷酰胺(CY):上海华联制药厂出品(批号:20010908)。
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1.3 试剂 CD4-PE单克隆抗体，由联科生物科技有限公司提供;CD8-PE单克隆抗体，由联科生物科技有限公司提供;溶血素，由美国BD公司提供。
1.4 仪器 FACSCalibur流式细胞仪，美国BD公司生产。
2 实验方法
2.1 小鼠免疫功能低下模型 取Balb/C小白鼠60只，雌雄各半，随机分为6组。其中，正常照组10只作为空白对照，另5组每组10只造模。造模的每组10只分别灌胃给予生理盐水、大黄虫胶囊(15g/kg)、克纤胶囊低剂量(10g/kg)、克纤胶囊中剂量(15g/kg)、克纤胶囊高剂量(20g/kg)，连续给药9天。从第5天起，每天腹腔注射环磷酰胺50mg/kg，1次/d，连续5天，造成免疫功能低下模型 [1，2] 。
2.2 测定方法 分别取10μl CD4-PE和10μl CD8-FITC单抗加入EP管中，再加入50μl抗凝的全血样品，充分混匀，置于阴暗处反应15min后，加450μl溶血素，混匀。再放于阴暗处反应15min后，上流式细胞仪检测，分析2000个以上细胞。用CellQuest软件分析CD4、CD8阳性标记细胞百分率，计算CD4、CD8的比值 [3] 。
, 百拇医药
2.3 统计学处理 实验数据用ˉx±s表示，各组均数用t检验进行统计学处理。
3 实验结果
环磷酰胺造模后，模型组CD4 + 、CD8 + 的百分率及CD4/CD8比值均明显降低。克纤胶囊及大黄虫胶囊均能使实验组百分率及比值提高，与模型组比较，克纤胶囊大、中剂量组及阳性对照组差异均有显著性(P<0.01，P<0.05)。说明克纤胶囊能增强免疫抑制模型小鼠T淋巴细胞免疫水平，有效地调节免疫功能。结果见表1。
表1 克纤胶囊对T小鼠淋巴细胞亚群的影响略
4 讨论各种病因引起的慢性肝病，各种损肝因素所致的肝脏损伤，都可能发生肝细胞坏死、炎症并继发纤维化的病理特征。肝纤维化是指肝细胞发生坏死及炎症刺激时，肝脏中胶原蛋白等细胞外基质(ECM)的增生与降解失去平衡，进而导致肝脏内纤维结缔组织异常沉积的病理过程，轻者称为纤维化，重者进而使肝小叶结构改建、假小叶及结节形成，称肝硬化[4]
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祖国医学虽无肝纤维化、肝硬化的概念和理论描述，但与“胁痛”、“积聚”、“鼓胀”、“黄疸”等病症有相似的症状学内涵。本虚标实是本病的病机特点，益气活血为其主要治法。中医学认为，疾病的发生、发展与变化，与机体的正气强弱和致病邪气的性质有密切的关系。一般认为，正气是包括了免疫功能在内的一切抗病能力，免疫系统及其所表达的功能是构成正气的重要因素，邪气则代表一切可导致人体功能紊乱，内环境失衡的因素。从免疫学角度考察，病原微生物和其他外来抗原物质等与由于免疫功能失调而产生的免疫复合物等均归属于邪气。外周血CD4T细胞百分率降低，CD8T细胞百分率增高，CD4/CD8比值下降，提示辅助性T细胞(T H )减少，抑制性T细胞(T S )增加和功能亢进可能是引起细胞免疫功能下降的重要因素。T细胞是一个不均质的细胞群体。按其功能和细胞表面标志可将T细胞区分为若干亚群。近年来有人用抗人T细胞单克隆抗体以流式细胞仪(FACS)检测T细胞表面分化抗原，并将人外周血和胸腺细胞区分为两个亚群，一个是CD4细胞亚群，另一个是CD8细胞亚群 [5] 。
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研究表明，丹参能抑制小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡血细胞的作用，降低小鼠腹腔巨噬细胞吞噬百分率和吞噬指数。丹参与环磷酰胺联合应用时，具有协同抑制功能，丹参能降低环磷酰胺的副作用。苦参的有效成分苦参碱和苦参槐定碱对巨噬细胞吞噬功能有抑制作用。也有人认为苦参碱对巨噬细胞有细胞毒作用，能明显降低巨噬细胞抑制P 815 细胞增殖的效应 [6] 。有人报告黄芪可显著促进骨髓造血细胞细DNA的合成，加快有核细胞分裂过程。黄芪注射液腹腔注射可防治环磷酰胺所致小鼠骨髓造血功能障碍，阻止骨髓有核细胞和外周血白细胞数明显减少，促进骨髓粒细胞 造血功能，对正常小鼠粒细胞造血也有刺激作用。黄芪的上述功能可能是由于促进细胞内cAMP的含量增加，促进了骨髓细胞的增殖分化 [7] 。黄芪茎叶总黄酮对氢化可的松模型小鼠T细胞总数和L 3 T 4 细胞有增强作用 [8] 。
克纤胶囊由丹参、黄芪、大黄、苦参等药组成，以益气化瘀，疏肝化积为法。方中丹参活血化瘀，黄芪益气健脾，大黄通里攻下，苦参清热燥湿。实验证明，克纤胶囊对实验性急、慢性肝损伤有一定保护作用;能提高机体体液免疫及细胞免疫功能 [9～11] ;尤其是能增强免疫抑制模型小鼠T淋巴细胞免疫调节作用，且存在着一定的量效关系。中药免疫调节治疗肝纤维化的研究虽取得了一定的成效，但其作用机制的研究还有许多值得继续探讨的问题，在研究广度和深度方面还应进一步加强。
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参考文献
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4 程明亮，杨长青.肝纤维化的基础研究及临床，北京:人民卫生出版社，2002，1.
5 贺新怀，席孝贤.中医药免疫学，北京:人民军医出版社，2002，121.
6 骆和生.免疫中药学———中药免疫药理与临床，北京:中国协和医科大学北京医科大学联合出版社，1999，88.
, 百拇医药
7 罗志勇.中草药及其有效成分促粒系造血的研究进展.中草药，1995，26(12):653.
8 焦艳.膜荚黄芪茎叶总黄酮对小鼠免疫功能的影响.中国中西医结合杂志，1999，19(6):356.
9 任建平，胡锡元，严启伟.克纤胶囊对急性肝损伤影响的实验研究.山西中医学院学报，2002，3(4):14-15.
10 任建平，胡锡元，陈梁，等.克纤胶囊对慢性肝损伤大鼠模型肝功能及肝纤维化指标的影响.湖北中医学院学报，2003，5(1):25-26.
11 任建平，曾亚男.克纤胶囊免疫药理的实验研究.中医药研究，2002，18(6):39-40.
作者单位:430014湖北省武汉市中医医院
(收稿日期:2003-09-19)
(编辑 李欣), http://www.100md.com