HBV血清学标志物不同模式与HBV-DNA含量的关系
【摘要】 目的 探讨HBV血清学标志物不同模式与HBV-DNA含量的关系，了解不同模式HBV-DNA水平，以此衡量其传染性程度，为临床诊断、治疗和预防乙型肝炎提供科学依据。方法 采用ELISA法检测乙肝五项指标，利用PCR法测定不同模式血清中HBV-DNA水平。结果在各种组合模式中，均能不同程度地检出HBV-DNA，在HBsAg阳性标本中HBV-DNA含量明显高于HBsAg阴性的标本，其中以HBsAg(+)/HBeAg(+)/抗-HBc(+)、HBsAg(+)/HBeAg(+)两种模式病毒含量最高，HBV-DNA阳性率为100%。HBsAg阳性组病毒含量与阴性对照组相比，P<0.05，差异有显著性;而HBˉsAb阳性组HBV-DNA阳性率较低，其病毒量与阴性对照组相比，P>0.05，差异无显著性。结论 HBV血清学标志物不同模式与HBV-DNA水平存在一定的关系，综合分析两者检测结果，更能准确地判断HBV是否复制及有无传染性。
关键词:乙型肝炎病毒 血清学标志物 HBV-DNA
, 百拇医药
【文献标识码】 A 【文章编号】 1680-6115(2003)11-0967-03
Study on seromarker and DNA level of HBV
Zhu Ping′an，Zhu Hongqiu，Shen Qunxi，et al.
Yantian District Hospital，Shenzhen，Guangdong518081.
【Abstract】 Objective Study on the relationship between HBV different seromarkers and HBV-DNA levels.Methods The seromarkers and DNA of HBV were determined in 739 patients by means of enzyme-linked imˉmunosorbent assay(ELISA)and polymerase chain reaction(PCR)technique respectively.Results HBV-DNA were found in all models，HBV-DNA in the patients with HBsAg positive were singnificantly higher than that with HBsAg negative，especially in the model of HBsAg(+)/HBeAg(+)/anti-HBc(+)and HBsAg(+)/HBeAg(+)，the positive rate of HBV-DNA was100%.Compared with normal control，significant differences were observed in HBˉsAg positive group(P<0.05)，whereas no significant differences were observed in HBsAg negative group(P>0.05).Conclusion These results show that seromarkers and DNA of HBV can be used to judge the replication and infectivity of hepatitis B virus，there were positive relation between the level of HBV-DNA and HBsAg(+)or HBeAg(+).
, 百拇医药
Key words hepatitis B virus seromarker HBV-DNA
我国乙型肝炎病毒血清学标志物的模式既存在常见模式，又存在许多少见模式 [1，6] 。既往一般认为HBsAg或HBeAg阳性预示着乙肝病毒DNA复制活跃。近年来，随着PCR技术在医学科学领域中应用，在部分HBsAg阴性的急性、慢性乙型肝炎和肝癌患者的肝脏及血液中发现了HBV-DNA。为了探讨HBV血清学标志物与HBV-DNA的关系，我们对739份不同血清学标志物的受检者血清进行研究。现报告如下。
1 材料和方法
1.1 标本来源 739份标本全部来源于我院门诊或病房患者，所有患者均采集静脉血，当日分离血清，4℃保存，并在一周内检测。一项或一项以上血清学标志物阳性者作为研究对象，五项血清学标志物全部阴性者作为对照组。
, 百拇医药
1.2 HBV血清学标志物检测 乙肝五项指标检测采用ELISA法，试剂盒购自上海实业科华生物技术有限公司，方法按试剂盒说明书进行。
1.3 HBV-DNA检测 HBV PCR荧光定量试剂盒购自上海复星医学科技发展有限公司，实验方法及定性实验阳性 判断标准参照试剂盒说明书。所有样本一次性检测，并设阴性对照和最大信号对照。HBV-DNA定量使用FX990荧光DNA分析仪，通过FX990分析软件直接作数据读取和HBV-DNA定量分析。当检测标本荧光值大于阴性对照荧光值1.5倍时，定性实验判为阳性。1.4 统计学处理 采用t检验
2 结果
2.1 HBV不同血清学模式HBV-DNA阳性率 对739份标本的HBV-DNA检测结果进行比较，阳性率最高的是HBˉsAg(+)/HBeAg(+)/抗-HBc(+)组与HBsAg(+)/HBeAg(+)组，阳性率为100%;最低的为抗-HBs(+)组，阳性率为9.8%;HBsAg阳性组存在HBsAg(+)/HBeAg(+)、HBsAg(+)/HBeAg(+)/HBeAb(+)/HBcAb(+)、HBsAg(+)/抗-HBs(+)/HBeAg(+)/抗-HBc(+)、HBsAg(+)/抗-HBs(+)/HBeAb(+)/抗-HBc(+)、HBsAg(+)/抗-HBe(+)5个少见模式，HBV-DNA阳性率介于50%～100%之间，结果见表1。
, 百拇医药
2.2 HBV不同血清学模式与HBV-DNA拷贝数关系 不同血清学模式的血清经PCR法定量检测，HBsAg阳性组比HBsAg阴性组病毒水平高，HBsAg阳性组与阴性对照组比较，P<0.05，差异有显著性。HBsAg阴性组与阴性对照组比较，P>0.05，差异无显著性，其结果见表1。
表1 HBV不同血清学模式的DNA检测结果 略
3 讨论
在受检者血清中存在HBsAg(+)/HBeAg(+)、HBsAg(+)/抗-HBe(+)两种HBsAg阳性而抗-HBc阴性少见模式，通过PCR法检测，HBV-DNA阳性率分别为100%和57.1%，病毒水平高。资料表明，在HBsAg(+)/HBeAg(+)模式的血清中HBV-DNA出现nt1877(前C区第62位nt)A→G变异，该变异的产生可能导致HBeAg分子结构的改变，诱导免疫耐受，导致抗-HBc缺失 [2] 。此外，宿主自身免疫应答功能低下，可能是造成抗-HBc阴性的另一个原因。HBsAg(+)/抗-HBe(+)这种模式是否存在同样的变异，还有待于进一步研究。
, 百拇医药
抗体组合模式血清中HBV-DNA阳性率介于9.6%～27.3%，表明部分HBsAg阴性或抗-HBs阳性血清中仍含有一定的病毒量，与文献 [3～5] 报道基本一致。同时发现，在HBsAg和抗-HBs同时阳性的HBsAg(+)/抗-HBs(+)/HBeAg(+)/抗-HBc(+)、HBsAg(+)/抗-HBs(+)/HBeAb(+)/抗-HBc(+)两个少见模式血清中，HBV-DNA阳性率分别为70%与50%，与单独抗-HBs阳性者相比，其抗-HBs值与HBV-DNA含量间关系存在明显的不同 [6] 。HBsAg和抗-HBs同时存在的原因是:(1)抗原-抗体的动态平衡阶段 [7] 。(2)前S/S区基因变异，从而使乙肝疫苗诱导产生的抗-HBs不能与突变的HBsAg正常结合，致使HBV-DNA在正常的抗-HBs应答的情况下继续复制 [8] 。(3)S区122位d亚型、y亚型之转换与160位w亚型、r亚型之间的转换。(4)先后感染不同亚型，出现两者共存的现象。(5)HBV-2感染 [9] 。
, 百拇医药
表1可见，抗-HBe阳性模式血清中HBV-DNA阳性率及病毒量水平仍然较高。资料表明，抗-HBe阳性的慢性活动性肝炎大多由于HBV前C区变异 [10～11] ，前C区nt83发生G→A(A85)点突变，使密码28由TGG变异为终止密码而不能编码HBeAg，而抗-HBe阳性无症状者，仅检出弱HBV-DNA，DNA序列分析未发现A83变异，提示变异病毒逃避免疫清除而继续活跃复制，与病毒持续活动有关。此外，受检者血清中还存在HBeAg和抗-HBe同时阳性模式，该模式HBV-DNA阳性率为56.0%，出现此模式的原因可能是:(1)e系统抗原抗体转换阶段。(2)前C区变异。(3)感染不同亚型。有关基因测序工作我们正在进行。
由此可见，乙型肝炎病毒感染者除存在常见模式外，还存在许多少见模式，这些少见模式中HBV-DNA是否存在变异，变异位点如何，还有待于继续探讨。因此，要想确切了解HBV是否感染及其DNA变异情况，单凭HBsAg或HBeAg是否阳性来判断肝脏中HBV复制及有无传染性是远远不够的，易造成漏诊。对于HBV感染的血清学标志物有一个或一个以上阳性者需要进一步检测血清中的HBV-DNA，必要时，对HBsAg阴性而高度怀疑有HBV感染者进行肝组织活检，证实肝组织中是否存在HBV抗原或HBV-DNA。
, http://www.100md.com
参考文献
1 孙南雄，黄祖瑚，刘雁雁，等.乙型肝炎患者957例血清学标志分析.中华医学检验杂志，1999，22:298.
2 黄利华，蒋跃明，童福易，等.乙型肝炎病毒前C/C变异对抗-HBc缺失和病毒复制的影响.中华传染病杂志，2001，19(5):309.
3 Pao CC，Yao DS，Lin CY，et al.Serum hepatitic B virus DNA in hepatiˉtis B virus seropositive and sera negative patients with normal liver funcˉtion.Am J Clin Pathol，1991，95(4):591.
4 Lao KX，Zhou R，Liang ZS.Identification of HBV infection in HBsAg-negative
, 百拇医药
chronic active hepatitis with polymerase chain reaction.Chung Hua Nei Ko Tse Chih，1991，30(1):21.
5 李娟，王春平，陈佩兰，等.415例HBV感染的血清学指标组合的HBV-DNA的检测.临床检验杂志，2001，19(3):163.
6 尹华发，卢建溪，高志良.不同血清学标志乙型肝炎病毒感染病毒水平分析.中华传染病杂志，2000，18(4):264.
7 王志刚，徐恋梅，程巧群，等.HBV标志抗原与突变的临床意义. 临床肝胆病杂志，1999，15(2):687.
8 成军，杨守纯.现代肝炎病毒分子生物学.第二版.北京:人民军医出版社，1999，176.
, http://www.100md.com 9 赵世祯，赵慧玲，赵翠林.HBV-2血清学模式回顾.临床肝脏病杂志，1992，8(4):188.
10 Carman WF，Thomas HC.Genetic variation in hepatitis B virus.Gasˉtroenterology，1993，102:711.
11 骆抗先.乙型肝炎基础和临床.第二版.北京:人民卫生出版社，2001，273.
作者单位:1 518081广东省深圳市盐田区人民医院
2 518083广东省深圳市第二人民医院
(收稿日期:2003-06-02)
(编辑 于少伟), http://www.100md.com(朱平安)
关键词:乙型肝炎病毒 血清学标志物 HBV-DNA
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【文献标识码】 A 【文章编号】 1680-6115(2003)11-0967-03
Study on seromarker and DNA level of HBV
Zhu Ping′an，Zhu Hongqiu，Shen Qunxi，et al.
Yantian District Hospital，Shenzhen，Guangdong518081.
【Abstract】 Objective Study on the relationship between HBV different seromarkers and HBV-DNA levels.Methods The seromarkers and DNA of HBV were determined in 739 patients by means of enzyme-linked imˉmunosorbent assay(ELISA)and polymerase chain reaction(PCR)technique respectively.Results HBV-DNA were found in all models，HBV-DNA in the patients with HBsAg positive were singnificantly higher than that with HBsAg negative，especially in the model of HBsAg(+)/HBeAg(+)/anti-HBc(+)and HBsAg(+)/HBeAg(+)，the positive rate of HBV-DNA was100%.Compared with normal control，significant differences were observed in HBˉsAg positive group(P<0.05)，whereas no significant differences were observed in HBsAg negative group(P>0.05).Conclusion These results show that seromarkers and DNA of HBV can be used to judge the replication and infectivity of hepatitis B virus，there were positive relation between the level of HBV-DNA and HBsAg(+)or HBeAg(+).
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Key words hepatitis B virus seromarker HBV-DNA
我国乙型肝炎病毒血清学标志物的模式既存在常见模式，又存在许多少见模式 [1，6] 。既往一般认为HBsAg或HBeAg阳性预示着乙肝病毒DNA复制活跃。近年来，随着PCR技术在医学科学领域中应用，在部分HBsAg阴性的急性、慢性乙型肝炎和肝癌患者的肝脏及血液中发现了HBV-DNA。为了探讨HBV血清学标志物与HBV-DNA的关系，我们对739份不同血清学标志物的受检者血清进行研究。现报告如下。
1 材料和方法
1.1 标本来源 739份标本全部来源于我院门诊或病房患者，所有患者均采集静脉血，当日分离血清，4℃保存，并在一周内检测。一项或一项以上血清学标志物阳性者作为研究对象，五项血清学标志物全部阴性者作为对照组。
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1.2 HBV血清学标志物检测 乙肝五项指标检测采用ELISA法，试剂盒购自上海实业科华生物技术有限公司，方法按试剂盒说明书进行。
1.3 HBV-DNA检测 HBV PCR荧光定量试剂盒购自上海复星医学科技发展有限公司，实验方法及定性实验阳性 判断标准参照试剂盒说明书。所有样本一次性检测，并设阴性对照和最大信号对照。HBV-DNA定量使用FX990荧光DNA分析仪，通过FX990分析软件直接作数据读取和HBV-DNA定量分析。当检测标本荧光值大于阴性对照荧光值1.5倍时，定性实验判为阳性。1.4 统计学处理 采用t检验
2 结果
2.1 HBV不同血清学模式HBV-DNA阳性率 对739份标本的HBV-DNA检测结果进行比较，阳性率最高的是HBˉsAg(+)/HBeAg(+)/抗-HBc(+)组与HBsAg(+)/HBeAg(+)组，阳性率为100%;最低的为抗-HBs(+)组，阳性率为9.8%;HBsAg阳性组存在HBsAg(+)/HBeAg(+)、HBsAg(+)/HBeAg(+)/HBeAb(+)/HBcAb(+)、HBsAg(+)/抗-HBs(+)/HBeAg(+)/抗-HBc(+)、HBsAg(+)/抗-HBs(+)/HBeAb(+)/抗-HBc(+)、HBsAg(+)/抗-HBe(+)5个少见模式，HBV-DNA阳性率介于50%～100%之间，结果见表1。
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2.2 HBV不同血清学模式与HBV-DNA拷贝数关系 不同血清学模式的血清经PCR法定量检测，HBsAg阳性组比HBsAg阴性组病毒水平高，HBsAg阳性组与阴性对照组比较，P<0.05，差异有显著性。HBsAg阴性组与阴性对照组比较，P>0.05，差异无显著性，其结果见表1。
表1 HBV不同血清学模式的DNA检测结果 略
3 讨论
在受检者血清中存在HBsAg(+)/HBeAg(+)、HBsAg(+)/抗-HBe(+)两种HBsAg阳性而抗-HBc阴性少见模式，通过PCR法检测，HBV-DNA阳性率分别为100%和57.1%，病毒水平高。资料表明，在HBsAg(+)/HBeAg(+)模式的血清中HBV-DNA出现nt1877(前C区第62位nt)A→G变异，该变异的产生可能导致HBeAg分子结构的改变，诱导免疫耐受，导致抗-HBc缺失 [2] 。此外，宿主自身免疫应答功能低下，可能是造成抗-HBc阴性的另一个原因。HBsAg(+)/抗-HBe(+)这种模式是否存在同样的变异，还有待于进一步研究。
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抗体组合模式血清中HBV-DNA阳性率介于9.6%～27.3%，表明部分HBsAg阴性或抗-HBs阳性血清中仍含有一定的病毒量，与文献 [3～5] 报道基本一致。同时发现，在HBsAg和抗-HBs同时阳性的HBsAg(+)/抗-HBs(+)/HBeAg(+)/抗-HBc(+)、HBsAg(+)/抗-HBs(+)/HBeAb(+)/抗-HBc(+)两个少见模式血清中，HBV-DNA阳性率分别为70%与50%，与单独抗-HBs阳性者相比，其抗-HBs值与HBV-DNA含量间关系存在明显的不同 [6] 。HBsAg和抗-HBs同时存在的原因是:(1)抗原-抗体的动态平衡阶段 [7] 。(2)前S/S区基因变异，从而使乙肝疫苗诱导产生的抗-HBs不能与突变的HBsAg正常结合，致使HBV-DNA在正常的抗-HBs应答的情况下继续复制 [8] 。(3)S区122位d亚型、y亚型之转换与160位w亚型、r亚型之间的转换。(4)先后感染不同亚型，出现两者共存的现象。(5)HBV-2感染 [9] 。
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表1可见，抗-HBe阳性模式血清中HBV-DNA阳性率及病毒量水平仍然较高。资料表明，抗-HBe阳性的慢性活动性肝炎大多由于HBV前C区变异 [10～11] ，前C区nt83发生G→A(A85)点突变，使密码28由TGG变异为终止密码而不能编码HBeAg，而抗-HBe阳性无症状者，仅检出弱HBV-DNA，DNA序列分析未发现A83变异，提示变异病毒逃避免疫清除而继续活跃复制，与病毒持续活动有关。此外，受检者血清中还存在HBeAg和抗-HBe同时阳性模式，该模式HBV-DNA阳性率为56.0%，出现此模式的原因可能是:(1)e系统抗原抗体转换阶段。(2)前C区变异。(3)感染不同亚型。有关基因测序工作我们正在进行。
由此可见，乙型肝炎病毒感染者除存在常见模式外，还存在许多少见模式，这些少见模式中HBV-DNA是否存在变异，变异位点如何，还有待于继续探讨。因此，要想确切了解HBV是否感染及其DNA变异情况，单凭HBsAg或HBeAg是否阳性来判断肝脏中HBV复制及有无传染性是远远不够的，易造成漏诊。对于HBV感染的血清学标志物有一个或一个以上阳性者需要进一步检测血清中的HBV-DNA，必要时，对HBsAg阴性而高度怀疑有HBV感染者进行肝组织活检，证实肝组织中是否存在HBV抗原或HBV-DNA。
, http://www.100md.com
参考文献
1 孙南雄，黄祖瑚，刘雁雁，等.乙型肝炎患者957例血清学标志分析.中华医学检验杂志，1999，22:298.
2 黄利华，蒋跃明，童福易，等.乙型肝炎病毒前C/C变异对抗-HBc缺失和病毒复制的影响.中华传染病杂志，2001，19(5):309.
3 Pao CC，Yao DS，Lin CY，et al.Serum hepatitic B virus DNA in hepatiˉtis B virus seropositive and sera negative patients with normal liver funcˉtion.Am J Clin Pathol，1991，95(4):591.
4 Lao KX，Zhou R，Liang ZS.Identification of HBV infection in HBsAg-negative
, 百拇医药
chronic active hepatitis with polymerase chain reaction.Chung Hua Nei Ko Tse Chih，1991，30(1):21.
5 李娟，王春平，陈佩兰，等.415例HBV感染的血清学指标组合的HBV-DNA的检测.临床检验杂志，2001，19(3):163.
6 尹华发，卢建溪，高志良.不同血清学标志乙型肝炎病毒感染病毒水平分析.中华传染病杂志，2000，18(4):264.
7 王志刚，徐恋梅，程巧群，等.HBV标志抗原与突变的临床意义. 临床肝胆病杂志，1999，15(2):687.
8 成军，杨守纯.现代肝炎病毒分子生物学.第二版.北京:人民军医出版社，1999，176.
, http://www.100md.com 9 赵世祯，赵慧玲，赵翠林.HBV-2血清学模式回顾.临床肝脏病杂志，1992，8(4):188.
10 Carman WF，Thomas HC.Genetic variation in hepatitis B virus.Gasˉtroenterology，1993，102:711.
11 骆抗先.乙型肝炎基础和临床.第二版.北京:人民卫生出版社，2001，273.
作者单位:1 518081广东省深圳市盐田区人民医院
2 518083广东省深圳市第二人民医院
(收稿日期:2003-06-02)
(编辑 于少伟), http://www.100md.com(朱平安)