灵芝胶囊质量标准的检测
【摘要】 目的 检测灵芝胶囊的质量标准。方法 采用TLC法对方中主要药味进行色谱鉴别，UV法测定灵芝多糖的含量。结果 灵芝多糖100～1000μg范围内有良好的线性关系，回收率为98.68%，RSD为1.18%。结论 本质量标准可有效地控制灵芝胶囊的质量。
关键词 灵芝胶囊 灵芝多糖 质量控制
【文献标识码】 B 【文章编号】
灵芝胶囊系由四川成都健升药业有限公司采用新工艺研究制成，具宁心安神、健脾和胃、滋补强壮之功效，主要用于失眠健忘，神经衰弱，身体虚弱以及消化道肿瘤和癌肿手术后放化疗引起的消瘦、失眠、疼痛、厌食、白细胞减少等症。灵芝多糖是灵芝的主要有效成分 [1] ，研究表明，灵芝多糖具有广泛的药理活性，能提高机体免疫力，增强机体耐、缺氧能力，消除自由基，抑制肿瘤，能使人体产生抗体和干扰素，可用于治疗免疫系统严重损伤以及免疫缺损等慢性疾病 [2] 。因此，为了更好的控制产品的内在质量，本实验采用化学方法和TLC对制剂中多糖成分和灵芝药材进行了定性鉴别，并采用紫外分光光度法对制剂中的灵芝多糖进行了含量测定。
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1 仪器与试药
Perkin Elmar Lambda35紫外分光光度计;灵芝对照药材，葡萄糖对照品均由中国药品生物制品检定所提供。灵芝胶囊(批号030801、030802、030803)由四川成教健升药业有限公司提供。所有试剂均为分析纯。
2 鉴别试验
2.1 鉴别试验
2.1.1 化学鉴别 多糖的定性鉴别:取本品1粒中的内容物，加水10ml，振摇后静置5min，滤过，去滤液2滴，点于滤纸上，干后，滴加茚三酮试液1～2滴，在100℃烘约5min，显紫色斑点，阴性制剂无干扰。
2.1.2 薄层色谱鉴别 取本品2粒中的内容物，加乙醇30ml，加热回流30min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇20ml使溶解，作为供试品溶液。另取灵芝对照药材2g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90)-甲酸乙酯-甲酸(15:5:1)的上层溶液为展开剂，展开，晾干，置紫外灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点。阴性试验无干扰。
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2.2 含量测定
2.2.1 供试品溶液的制备 取本品的内容物1g，精密称定，置研钵中，加热水少量研，转称至100ml量瓶中，热水洗涤研钵数次，洗涤液并入量瓶中，水浴加热30min，冷却;加水稀释至刻度，摇匀，滤过，精密吸取续滤液2ml，加无水乙醇8ml，搅拌，离心;取沉淀加水溶解，置50ml量瓶中，稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
2.2.2 对照品溶液的制备 精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖适量，制成每1ml含0.6mg的葡萄糖溶液，作为对照品溶液。
2.2.3 测定波长的选择 精密量取葡萄糖对照品溶液3.0ml，置50ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，作为对照品溶液稀释液。精密量取对照品稀释液2ml及供试品溶液2ml，置具塞试管中，分别加4%苯酚溶液1.0ml，混匀;迅速加入硫酸7.0ml，摇匀;于40℃水浴中保温30min，取出;置冰水浴中冷却5min，取出;以蒸馏水2ml同上操作制备空白溶液，在450～750nm波长范围内扫描。由扫描结果可知，供试品与对照品溶液均在480nm处有最大吸收，所以，我们确定480nm为测定波长。
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2.2.4 标准曲线的制备 精密吸取葡萄糖对照溶液(0.68mg/ml)0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、2.0、4.0、6.0ml分别置于50ml量瓶中，加水至刻度，摇匀。精密量取上述各溶液2ml，置10ml具塞试管中，分别加4%苯酚溶液1.0ml，混匀，迅速加入硫酸7.0ml，摇匀，于40℃水浴中保温30min，取出，置冰水浴中冷却5min，以第1份为空白，在480nm波长下，测定各管的吸收度，以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，回归方程Y=-0.06586+0.03447，r=0.9992;结果表明:葡萄糖在2.27～163.2μg/ml范围内，线性关系良好。
2.2.5 方法学考察
2.2.5.1 重现性试验 按含量测定方法，对同一批样品平行测定6份，含量分别为2.134、2.141、2.139、2.148、2.150mg/100g，RSD为0.28%。
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2.2.5.2 稳定性考察 将供试品溶液分别在0.5、1、1.5、2、2.5、3、6、24h内测定，结果表明，吸收在2h内稳定，24h吸收
值仅下降7.245，说明本测定方法稳定性较好。
2.2.5.3 回收率试验 采用加样回收法，取已知含量的灵芝软胶囊内容物适量，分别加入葡萄糖适量，按含量测定方法测定，结果测得平均回收率为98.68%，RSD为1.18%(n=6)。
2.2.5.4 含量测定 按含量测定方法分别测定3批样品，结果见表1。
表1 样品的含量测定结果 略
3 讨论
灵芝多糖为灵芝破壁孢子粉的主要成分，是以β(1-3)，β(1-4)，α(1-6)为主链，β(1-6)岩藻糖基，甘露醇为侧链的葡聚糖或以葡萄糖为主，由阿拉伯糖、木糖、甘露糖等按不同比例组成的杂多糖，故采用萘酚-硫酸法测定含量，利用糖类被硫酸氧化脱水生成糖醛衍生物在紫外区有特征吸收的性质，采用紫外分光光度法测定。该方法简便、快捷、准确，可用于灵芝胶囊的质量控制。
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参考文献
1 李荣芷，何云庆.从灵芝扶正固本有效成分灵芝多糖的发现讨论中药活性成分研究的思路和途径.北京医科大学学报，1987，19(6):431.
2 方积年.C-3NMR在多糖机构分析上的应用.国外医学·抗生素分册，1982，3(2):107.
作者单位: 1 610081四川成都铁路中心医院药剂科
2 610075成都中医药大学
(收稿日期:2003-10-22)
(编辑 梅子), http://www.100md.com(石雪蓉)
关键词 灵芝胶囊 灵芝多糖 质量控制
【文献标识码】 B 【文章编号】
灵芝胶囊系由四川成都健升药业有限公司采用新工艺研究制成，具宁心安神、健脾和胃、滋补强壮之功效，主要用于失眠健忘，神经衰弱，身体虚弱以及消化道肿瘤和癌肿手术后放化疗引起的消瘦、失眠、疼痛、厌食、白细胞减少等症。灵芝多糖是灵芝的主要有效成分 [1] ，研究表明，灵芝多糖具有广泛的药理活性，能提高机体免疫力，增强机体耐、缺氧能力，消除自由基，抑制肿瘤，能使人体产生抗体和干扰素，可用于治疗免疫系统严重损伤以及免疫缺损等慢性疾病 [2] 。因此，为了更好的控制产品的内在质量，本实验采用化学方法和TLC对制剂中多糖成分和灵芝药材进行了定性鉴别，并采用紫外分光光度法对制剂中的灵芝多糖进行了含量测定。
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1 仪器与试药
Perkin Elmar Lambda35紫外分光光度计;灵芝对照药材，葡萄糖对照品均由中国药品生物制品检定所提供。灵芝胶囊(批号030801、030802、030803)由四川成教健升药业有限公司提供。所有试剂均为分析纯。
2 鉴别试验
2.1 鉴别试验
2.1.1 化学鉴别 多糖的定性鉴别:取本品1粒中的内容物，加水10ml，振摇后静置5min，滤过，去滤液2滴，点于滤纸上，干后，滴加茚三酮试液1～2滴，在100℃烘约5min，显紫色斑点，阴性制剂无干扰。
2.1.2 薄层色谱鉴别 取本品2粒中的内容物，加乙醇30ml，加热回流30min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇20ml使溶解，作为供试品溶液。另取灵芝对照药材2g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90)-甲酸乙酯-甲酸(15:5:1)的上层溶液为展开剂，展开，晾干，置紫外灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点。阴性试验无干扰。
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2.2 含量测定
2.2.1 供试品溶液的制备 取本品的内容物1g，精密称定，置研钵中，加热水少量研，转称至100ml量瓶中，热水洗涤研钵数次，洗涤液并入量瓶中，水浴加热30min，冷却;加水稀释至刻度，摇匀，滤过，精密吸取续滤液2ml，加无水乙醇8ml，搅拌，离心;取沉淀加水溶解，置50ml量瓶中，稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
2.2.2 对照品溶液的制备 精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖适量，制成每1ml含0.6mg的葡萄糖溶液，作为对照品溶液。
2.2.3 测定波长的选择 精密量取葡萄糖对照品溶液3.0ml，置50ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，作为对照品溶液稀释液。精密量取对照品稀释液2ml及供试品溶液2ml，置具塞试管中，分别加4%苯酚溶液1.0ml，混匀;迅速加入硫酸7.0ml，摇匀;于40℃水浴中保温30min，取出;置冰水浴中冷却5min，取出;以蒸馏水2ml同上操作制备空白溶液，在450～750nm波长范围内扫描。由扫描结果可知，供试品与对照品溶液均在480nm处有最大吸收，所以，我们确定480nm为测定波长。
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2.2.4 标准曲线的制备 精密吸取葡萄糖对照溶液(0.68mg/ml)0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、2.0、4.0、6.0ml分别置于50ml量瓶中，加水至刻度，摇匀。精密量取上述各溶液2ml，置10ml具塞试管中，分别加4%苯酚溶液1.0ml，混匀，迅速加入硫酸7.0ml，摇匀，于40℃水浴中保温30min，取出，置冰水浴中冷却5min，以第1份为空白，在480nm波长下，测定各管的吸收度，以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，回归方程Y=-0.06586+0.03447，r=0.9992;结果表明:葡萄糖在2.27～163.2μg/ml范围内，线性关系良好。
2.2.5 方法学考察
2.2.5.1 重现性试验 按含量测定方法，对同一批样品平行测定6份，含量分别为2.134、2.141、2.139、2.148、2.150mg/100g，RSD为0.28%。
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2.2.5.2 稳定性考察 将供试品溶液分别在0.5、1、1.5、2、2.5、3、6、24h内测定，结果表明，吸收在2h内稳定，24h吸收
值仅下降7.245，说明本测定方法稳定性较好。
2.2.5.3 回收率试验 采用加样回收法，取已知含量的灵芝软胶囊内容物适量，分别加入葡萄糖适量，按含量测定方法测定，结果测得平均回收率为98.68%，RSD为1.18%(n=6)。
2.2.5.4 含量测定 按含量测定方法分别测定3批样品，结果见表1。
表1 样品的含量测定结果 略
3 讨论
灵芝多糖为灵芝破壁孢子粉的主要成分，是以β(1-3)，β(1-4)，α(1-6)为主链，β(1-6)岩藻糖基，甘露醇为侧链的葡聚糖或以葡萄糖为主，由阿拉伯糖、木糖、甘露糖等按不同比例组成的杂多糖，故采用萘酚-硫酸法测定含量，利用糖类被硫酸氧化脱水生成糖醛衍生物在紫外区有特征吸收的性质，采用紫外分光光度法测定。该方法简便、快捷、准确，可用于灵芝胶囊的质量控制。
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参考文献
1 李荣芷，何云庆.从灵芝扶正固本有效成分灵芝多糖的发现讨论中药活性成分研究的思路和途径.北京医科大学学报，1987，19(6):431.
2 方积年.C-3NMR在多糖机构分析上的应用.国外医学·抗生素分册，1982，3(2):107.
作者单位: 1 610081四川成都铁路中心医院药剂科
2 610075成都中医药大学
(收稿日期:2003-10-22)
(编辑 梅子), http://www.100md.com(石雪蓉)