乳腺癌bFGF、F8因子图像分析的临床意义
【摘要】 目的 研究bFGF及F8因子在乳腺癌检测与临床病理的关系。方法 采用免疫组化、图像分析和临床随访等方法，观察100例乳腺癌及9例正常乳腺标本。结果 bFGF在正常乳腺和乳腺癌中的实质和间质都存在，表达水平较高，呈胞浆显色，在乳腺癌的实质和间质高表达。F8因子与组织学分级、淋巴结转移、肿瘤大小和生存期高度相关。结论 bFGF测定和微血管密度结合可判定患者预后。
关键词 bFGF 乳腺癌 微血管 预后
【文献标识码】 A 【文章编号】 1606-8106(2003)12-1787-02
Clinical significance of basic fibroblast growth
factor and F8in breast cancer
, http://www.100md.com Han Yu，Sun Jing，Cai Li，et al.
Jilin Provincial Cancer Hospital，Changchun132000.
【Abstract】 Objective To study the relation of basic fibroblast growth factor F8and clinical pathology in breast cancer.Methods We observed100breast cancer，9normal breast by immunohistochemistry，image analysis.Results bFGF were positively stained，located predominantly in the proper and stroma of both normal breast and breast cancer and overexpression highly.bFGF being seen in the cytoplasm.There was correlation between F8and tuˉmor grade，stage，lymph node metastasis，tumor size and survival term.Conclusion bFGF and microvessel density are an important and independent prognostic parameter for breast cancer.
, 百拇医药
Key words basic fibroblast growth factor breast cancer microvessel prognosis
多年来有关肿瘤预后及转移能力的判定研究，一直针对肿瘤实质，而肿瘤浸润和转移与其间质微血管密度不可分的事实却常被忽视。本文要解决的关键问题是通过乳腺癌bFGF及F8因子在肿瘤的检测，进一步通过所形成的微血管密度与转移和转移时间的关系，为判定肿瘤预后提供更为先进的指标。
1 材料与方法
1.1 标本选择 附属医院1993～1998年有随访结果，临床和病理资料完整的乳腺癌患者100例，其中浸润性导管癌80例，9例正常乳腺标本，确保术前未做任何治疗。其中50例有腋下淋巴结转移，转移淋巴结数为1～9只。患者年龄在30～76岁，均为女性。肿块直径为2～8cm。组织学分级(SB)方法，1级25例，2级24例，3级31例。随访1～5年，50例健在，带癌生存18，死亡12例。标本取癌中心、癌旁及正常区3块经10%甲醛固定，石蜡包埋，4μm连续切片6张，免疫组化和HE染色复查。
, http://www.100md.com
1.2 免疫组化 所有标本均在同一条件下进行免疫组化染色。bFGF为Santa Cruz公司产品，F8因子为Sigma公司产品，SP试剂盒为Dako公司产品。免疫组化方法:切片常规脱蜡至水，0.3%H 2 O 2 中和内过氧化物酶15min，0.1%胰蛋白酶37℃消化10min，10%山羊血清室温15min。一抗(1:50)置4℃过夜，二抗和三抗分别置37℃40min，下控制DAB 显色，脱水、透明、封片。应用磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗和二抗作为阴性对照。
1.3 结果判定及图像分析 用江苏捷达图像分析系统在低倍下(10×10)寻找微血管生成最丰富的区域。然后在中倍下(0.75mm，20×10)计算三个不同视野内微血管数量。对bFGF、F8在中倍下(0.75mm，20×10)观察微血管和肿瘤区的表达。微血管的标准为毛细管和仅有1～2层平滑肌细胞围绕的薄壁细胞。
1.4 统计学方法 测定结果采用SPSS软件。分别采用卡方检验、四格表检验及Logistic多因素回归分析法。
, 百拇医药
2 结果
2.1 bFGF在乳腺癌组织的定位 bFGF在正常乳腺组织和癌组织中都有表达，上皮和间质成分均有着色。阳性颗粒分布可见于胞核、胞浆及细胞基质。bFGF在上皮主要位于细胞的胞浆，胞核着色，腺体分泌上皮和基底部均有bFGF分布。间质主要位于细胞外基质，呈线网状分布，间质细胞也有不同程度的着色。毛细血管内皮细胞均有着色。
2.2 bFGF的图像分析结果 同一标本bFGF和bFGF-R在间质和上皮的分布量大体相当，但在乳腺癌的量无论上皮还是间质均高于正常组织中的量(P<0.01)，以癌周最高。bFGF在正常乳腺组织和乳腺癌组织上，上皮和间质的含量差异无显著性(P>0.05)，见表1。
2.3 微血管密度 经F8标记的乳腺浸润性导管癌和良性对照组的微血管密度，见表2。
经统计检验肿瘤内微血管密度在组织学分级、淋巴结转移、术后生存期等差异有非常显著性(P<0.01)。
, 百拇医药
表1 bFGF的表达结果 (略)
表2 内皮细胞bFGF的表达，微血管密度与乳腺癌的临床病理关系 (略)
(1)组织学分级:bFGF:F=0.85，P>0.05，微血管密度:F=16.13，P<0.01;①:②q=3.17，P<0.05;①:③q=7.95，P<0.015;②:③q=4.53，P<0.01。(2)肿瘤大小:bFGF:F=0.51，P>0.05，微血管密度:F=2.94，P>0.05。(3)淋巴结bFGF:t=0.51，P>0.05，微血管密度:t=12.86，P<0.001。(4)术后生存期:bFGF:F=0.41，P>0.05，微血管密度:F=5.20，P<0.05;①:③q=4.12，P<0.05。
3 讨论
3.1 乳腺癌间质血管内皮细胞bFGF免疫反应强度和bFGF在细胞内定位研究 碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)是近年研究的热点，有报道bFGF与多种实体癌的生长和转移有关 [1，2] 。Colomer等报道血液及组织中低水平bFGF是和预后和复发有关的非独立的预后指标 [3] 。碱性成纤维细胞生长因子是一种重要的细胞有丝分裂促进因子和形态发生及分化的诱导因子。我们利用免疫组化方法对bFGF在正常乳腺和乳腺癌中间质血管内皮细胞的分布情况进行了研究。bFGF在正常乳腺组织和癌组织中的都有表达，上皮和间质成分均有着色。阳性颗粒分布可见于胞核、胞浆及细胞基质。bFGF在上皮主要位于细胞的胞浆，胞核着色，腺体分泌上皮和基底部均有bFGF分布。间质主要位于细胞外基质，呈线网状分布，间质细胞也有不同程度的着色。毛细血管内皮细胞均有着色。可见在乳腺癌中bFGF是一种含量较多的细胞因子。
, http://www.100md.com
bFGF是由146个氨基酸组成的多肽生长因子，体内存在分子量分别为18000、22000和24000等数种同种异构体 [4] 。bFGF是成纤维细胞生长因子家族原型，分布于体内许多组织，是细胞生长、分化和血管生成重要因子 [5] 。
本研究结果表明正常乳腺标本中bFGF为阳性表达，乳腺癌组织中bFGF呈阳性表达，两者相比差异有显著性，P<0.001，说明在乳腺癌的发生发展过程中，bFGF起一定作用。Hasebe等用免疫组化方法检测149例乳腺癌标本，发现硬癌的癌细胞和基底部的成纤维细胞在纤维灶的形成中起作用，其机制可能是肿瘤细胞分泌的bFGF因子和成纤维细胞受体作用而成 [6] 。Colomer等用放免分析方法测定140例乳腺癌患者细胞浆中的bFGF水平，结果发现126例早期癌患得bFGF水平低，与肿瘤的大小和临床分期关系密切，提示乳腺癌患者bFGF低水平是一种预后不良和复发的非独立指标 [3] 。
, 百拇医药
3.2 各型乳腺癌间质微血管密度与bFGF免疫反应性的形态定量分析 多年来有关肿瘤预后及转移能力的判定研究，一直针对肿瘤实质，而肿瘤浸润和转移与其间质微血管密度不可分的事实却常被忽视，近年研究发现，肿瘤内微血管密度与肿瘤转移、复发有关，可以作为判断肿瘤预后的一项独立指标。国外乳腺癌、肺癌、前列腺癌、头颈及宫颈鳞癌及恶性黑色素瘤的研究中都有人发现，肿瘤血管生成和预后有关 [7～9] ，本文探讨bFGF在乳腺浸润性导管癌微血管形成和预后关系。阐明肿瘤间质微血管发生调控机制，在进一步通过所形成的微血管密度与转移和转移时间的关系，为判定肿瘤预后提供更为先进的指标。
参考文献
1 Nanus DM，Schmitz-Drager BJ，Motzer RJ，et al.Expression of basic fiˉbroblast growth facter in primary human renal tumors:correlation with poor survival.J Natl Cancer Inst，1993，85:1597-1599.
, http://www.100md.com
2 Zimering MB，Katsumata N，Sato Y，et al.Increased basic fibroblast growth factor in plasma frommultiple endocrine neoplasia type l:relation to pituitary tumor.J Clin Endocrinol Metab，1993，76:1182-1187.
3 Colomer R，Aparicio J，Montero S，et al.Low levels of basic fibroblast growth factor are associated with a poor prognosis in human breast carciˉnoma.British Journal of Cancer，1997，76(9):1215-1220.
4 Rennko M，Quarto N，Morimoto T，et al.Nuclaer and cytoplasmic localˉization of different basic fibroblast growth factor species.J Cell Physiol，1990，144:108.
, 百拇医药
5 Hgghes SE，Hal PA.Overviewof the fibroblast growth factor and receptor families:complexity，functional diversity，and implications for future carˉdiovascular research.Cardiovascular Res，1993，27:1199.
6 Haebe T，Imoto S，Ogrua T，et al.Significance of basic fibroblast growth factor receptor protein expression in the formation of fibrotic focus in inˉvasive ductal carcinoma of the breast.Jan J Cancer Res，1997，88(9):877.
7 Ellis.L.，Fidler I.J.Angiogenesis and metastasis.Eur J Cancer，1996，32:2451-2460.
8 Zetter.B.R.Angiogenesis and tumor metastasis.Annu Rev Med，1998，49:407-424.
9 Folkman J，Shing Y.Angiogenesis.J Bio Chem，1992，267:10931-10934.
作者单位:1 132000吉林省肿瘤医院
2 250012山东大学医学院
(编辑 曲全), 百拇医药(韩雨)
关键词 bFGF 乳腺癌 微血管 预后
【文献标识码】 A 【文章编号】 1606-8106(2003)12-1787-02
Clinical significance of basic fibroblast growth
factor and F8in breast cancer
, http://www.100md.com Han Yu，Sun Jing，Cai Li，et al.
Jilin Provincial Cancer Hospital，Changchun132000.
【Abstract】 Objective To study the relation of basic fibroblast growth factor F8and clinical pathology in breast cancer.Methods We observed100breast cancer，9normal breast by immunohistochemistry，image analysis.Results bFGF were positively stained，located predominantly in the proper and stroma of both normal breast and breast cancer and overexpression highly.bFGF being seen in the cytoplasm.There was correlation between F8and tuˉmor grade，stage，lymph node metastasis，tumor size and survival term.Conclusion bFGF and microvessel density are an important and independent prognostic parameter for breast cancer.
, 百拇医药
Key words basic fibroblast growth factor breast cancer microvessel prognosis
多年来有关肿瘤预后及转移能力的判定研究，一直针对肿瘤实质，而肿瘤浸润和转移与其间质微血管密度不可分的事实却常被忽视。本文要解决的关键问题是通过乳腺癌bFGF及F8因子在肿瘤的检测，进一步通过所形成的微血管密度与转移和转移时间的关系，为判定肿瘤预后提供更为先进的指标。
1 材料与方法
1.1 标本选择 附属医院1993～1998年有随访结果，临床和病理资料完整的乳腺癌患者100例，其中浸润性导管癌80例，9例正常乳腺标本，确保术前未做任何治疗。其中50例有腋下淋巴结转移，转移淋巴结数为1～9只。患者年龄在30～76岁，均为女性。肿块直径为2～8cm。组织学分级(SB)方法，1级25例，2级24例，3级31例。随访1～5年，50例健在，带癌生存18，死亡12例。标本取癌中心、癌旁及正常区3块经10%甲醛固定，石蜡包埋，4μm连续切片6张，免疫组化和HE染色复查。
, http://www.100md.com
1.2 免疫组化 所有标本均在同一条件下进行免疫组化染色。bFGF为Santa Cruz公司产品，F8因子为Sigma公司产品，SP试剂盒为Dako公司产品。免疫组化方法:切片常规脱蜡至水，0.3%H 2 O 2 中和内过氧化物酶15min，0.1%胰蛋白酶37℃消化10min，10%山羊血清室温15min。一抗(1:50)置4℃过夜，二抗和三抗分别置37℃40min，下控制DAB 显色，脱水、透明、封片。应用磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗和二抗作为阴性对照。
1.3 结果判定及图像分析 用江苏捷达图像分析系统在低倍下(10×10)寻找微血管生成最丰富的区域。然后在中倍下(0.75mm，20×10)计算三个不同视野内微血管数量。对bFGF、F8在中倍下(0.75mm，20×10)观察微血管和肿瘤区的表达。微血管的标准为毛细管和仅有1～2层平滑肌细胞围绕的薄壁细胞。
1.4 统计学方法 测定结果采用SPSS软件。分别采用卡方检验、四格表检验及Logistic多因素回归分析法。
, 百拇医药
2 结果
2.1 bFGF在乳腺癌组织的定位 bFGF在正常乳腺组织和癌组织中都有表达，上皮和间质成分均有着色。阳性颗粒分布可见于胞核、胞浆及细胞基质。bFGF在上皮主要位于细胞的胞浆，胞核着色，腺体分泌上皮和基底部均有bFGF分布。间质主要位于细胞外基质，呈线网状分布，间质细胞也有不同程度的着色。毛细血管内皮细胞均有着色。
2.2 bFGF的图像分析结果 同一标本bFGF和bFGF-R在间质和上皮的分布量大体相当，但在乳腺癌的量无论上皮还是间质均高于正常组织中的量(P<0.01)，以癌周最高。bFGF在正常乳腺组织和乳腺癌组织上，上皮和间质的含量差异无显著性(P>0.05)，见表1。
2.3 微血管密度 经F8标记的乳腺浸润性导管癌和良性对照组的微血管密度，见表2。
经统计检验肿瘤内微血管密度在组织学分级、淋巴结转移、术后生存期等差异有非常显著性(P<0.01)。
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表1 bFGF的表达结果 (略)
表2 内皮细胞bFGF的表达，微血管密度与乳腺癌的临床病理关系 (略)
(1)组织学分级:bFGF:F=0.85，P>0.05，微血管密度:F=16.13，P<0.01;①:②q=3.17，P<0.05;①:③q=7.95，P<0.015;②:③q=4.53，P<0.01。(2)肿瘤大小:bFGF:F=0.51，P>0.05，微血管密度:F=2.94，P>0.05。(3)淋巴结bFGF:t=0.51，P>0.05，微血管密度:t=12.86，P<0.001。(4)术后生存期:bFGF:F=0.41，P>0.05，微血管密度:F=5.20，P<0.05;①:③q=4.12，P<0.05。
3 讨论
3.1 乳腺癌间质血管内皮细胞bFGF免疫反应强度和bFGF在细胞内定位研究 碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)是近年研究的热点，有报道bFGF与多种实体癌的生长和转移有关 [1，2] 。Colomer等报道血液及组织中低水平bFGF是和预后和复发有关的非独立的预后指标 [3] 。碱性成纤维细胞生长因子是一种重要的细胞有丝分裂促进因子和形态发生及分化的诱导因子。我们利用免疫组化方法对bFGF在正常乳腺和乳腺癌中间质血管内皮细胞的分布情况进行了研究。bFGF在正常乳腺组织和癌组织中的都有表达，上皮和间质成分均有着色。阳性颗粒分布可见于胞核、胞浆及细胞基质。bFGF在上皮主要位于细胞的胞浆，胞核着色，腺体分泌上皮和基底部均有bFGF分布。间质主要位于细胞外基质，呈线网状分布，间质细胞也有不同程度的着色。毛细血管内皮细胞均有着色。可见在乳腺癌中bFGF是一种含量较多的细胞因子。
, http://www.100md.com
bFGF是由146个氨基酸组成的多肽生长因子，体内存在分子量分别为18000、22000和24000等数种同种异构体 [4] 。bFGF是成纤维细胞生长因子家族原型，分布于体内许多组织，是细胞生长、分化和血管生成重要因子 [5] 。
本研究结果表明正常乳腺标本中bFGF为阳性表达，乳腺癌组织中bFGF呈阳性表达，两者相比差异有显著性，P<0.001，说明在乳腺癌的发生发展过程中，bFGF起一定作用。Hasebe等用免疫组化方法检测149例乳腺癌标本，发现硬癌的癌细胞和基底部的成纤维细胞在纤维灶的形成中起作用，其机制可能是肿瘤细胞分泌的bFGF因子和成纤维细胞受体作用而成 [6] 。Colomer等用放免分析方法测定140例乳腺癌患者细胞浆中的bFGF水平，结果发现126例早期癌患得bFGF水平低，与肿瘤的大小和临床分期关系密切，提示乳腺癌患者bFGF低水平是一种预后不良和复发的非独立指标 [3] 。
, 百拇医药
3.2 各型乳腺癌间质微血管密度与bFGF免疫反应性的形态定量分析 多年来有关肿瘤预后及转移能力的判定研究，一直针对肿瘤实质，而肿瘤浸润和转移与其间质微血管密度不可分的事实却常被忽视，近年研究发现，肿瘤内微血管密度与肿瘤转移、复发有关，可以作为判断肿瘤预后的一项独立指标。国外乳腺癌、肺癌、前列腺癌、头颈及宫颈鳞癌及恶性黑色素瘤的研究中都有人发现，肿瘤血管生成和预后有关 [7～9] ，本文探讨bFGF在乳腺浸润性导管癌微血管形成和预后关系。阐明肿瘤间质微血管发生调控机制，在进一步通过所形成的微血管密度与转移和转移时间的关系，为判定肿瘤预后提供更为先进的指标。
参考文献
1 Nanus DM，Schmitz-Drager BJ，Motzer RJ，et al.Expression of basic fiˉbroblast growth facter in primary human renal tumors:correlation with poor survival.J Natl Cancer Inst，1993，85:1597-1599.
, http://www.100md.com
2 Zimering MB，Katsumata N，Sato Y，et al.Increased basic fibroblast growth factor in plasma frommultiple endocrine neoplasia type l:relation to pituitary tumor.J Clin Endocrinol Metab，1993，76:1182-1187.
3 Colomer R，Aparicio J，Montero S，et al.Low levels of basic fibroblast growth factor are associated with a poor prognosis in human breast carciˉnoma.British Journal of Cancer，1997，76(9):1215-1220.
4 Rennko M，Quarto N，Morimoto T，et al.Nuclaer and cytoplasmic localˉization of different basic fibroblast growth factor species.J Cell Physiol，1990，144:108.
, 百拇医药
5 Hgghes SE，Hal PA.Overviewof the fibroblast growth factor and receptor families:complexity，functional diversity，and implications for future carˉdiovascular research.Cardiovascular Res，1993，27:1199.
6 Haebe T，Imoto S，Ogrua T，et al.Significance of basic fibroblast growth factor receptor protein expression in the formation of fibrotic focus in inˉvasive ductal carcinoma of the breast.Jan J Cancer Res，1997，88(9):877.
7 Ellis.L.，Fidler I.J.Angiogenesis and metastasis.Eur J Cancer，1996，32:2451-2460.
8 Zetter.B.R.Angiogenesis and tumor metastasis.Annu Rev Med，1998，49:407-424.
9 Folkman J，Shing Y.Angiogenesis.J Bio Chem，1992，267:10931-10934.
作者单位:1 132000吉林省肿瘤医院
2 250012山东大学医学院
(编辑 曲全), 百拇医药(韩雨)