冰冻红细胞洗涤方法的改良及临床应用
【摘要】 目的 改良冰冻红细胞的手工洗涤方法，使之达到理想的临床应用效果。方法 使用800ml的大容量洗涤袋，采用12%和0.9%两个梯度的盐水进行洗涤，以红细胞回收率、上清血红蛋白含量、甘油残存量、体外溶血、洗涤时间作为考核指标。结果 使用改良方法洗涤的红细胞各项考核指标较改良前均有明显改善。结论 改良方法具有快速、简便、回收率高、临床应用效果佳等优点，值得广泛推广应用。
关键词 冰冻红细胞 洗涤 临床应用
【文献标识码】 B 【文章编号】 1609-6614(2003)15-1427-02
红细胞在-80℃深低温冷冻保存过程中，甘油作为低温保护剂是减少溶血、提高回收率的重要保证，但临床应用前须经一定的程序洗涤才能去除。目前国内大多采用手工方法洗涤复苏冰冻红细胞，各地方大都根据自身特点进行了各种研究或改良，形成了多种洗涤方法 [1～3] 。我站自1999年起开展了红细胞的冷冻保存工作，起初是运用羟乙基淀粉溶液洗涤法 [2] 洗涤。经过一段时间的实践应用，我们发现使用该方法洗涤出来的红细胞经常出现溶血率高、回收率低、上清游离血红蛋白含量严重超标等现象，难以满足临床实际应用的需要。据此，我们参考了美国海军输血研究所介绍的自动洗涤方法，并对其进行了改良，应用于冰冻红细胞的复苏洗涤，取得了满意的效果。
, 百拇医药
1 材料与设备
1.1 材料 复方甘油冷冻液，聚氯乙烯采血袋，分浆袋，一次性分浆管，回输器，分浆夹，止血钳，医用剪刀，碘酒，酒精，40%甘油溶液，12%Nacl溶液，0.9%Nacl溶液。
1.2 设备 无菌间超净台，水浴箱，-80℃专用冰箱，Beckman J6-B离心机，Heidolph101振荡仪。
2 -80℃冻存红细胞的实验方法
2.1 分浆 采集的200ml全血置于Beckman F6-B离心机中，4000rpm离心5min，在无菌间超净台上用分浆夹夹紧血袋，消毒血袋接口处，插入分浆管分离血浆，得压积红细胞100ml，松开分浆夹。
2.2 甘油化 取一袋160ml复方甘油冷冻液悬于滴液架上，插入一次性回输器，向血袋内注入40%甘油溶液，3ml/min，血袋置于振荡仪上边注边摇匀，注至一半时水平静置 5min，剩余一半以6ml/min注入，注完后水平静置5min。
, 百拇医药
2.3 冷冻保存 甘油化红细胞袋上贴上标签(供者姓名，血型，血量，冷冻血编号)登记入册，放入纸盒中置-80℃冰箱保存。
3 冰冻红细胞的复苏和洗涤
3.1 解冻 从冰箱取出甘油化红细胞除去包装盒，放入37℃水浴箱中融化，不停水平摇动血袋，融化约需10min。
3.2 第1次洗涤 在无菌间超净台操作，向血袋内注入12%NaCl溶液30ml，1min内注完，血袋置于振荡仪上边注边摇匀，注完后水平静置10min;以100ml/min注入0.9%的NaCl500ml，边注边摇匀，注完后水平静置10min;热合，以2500rpm离心10min。
3.3 第2次洗涤 血袋用分浆夹夹紧，分离上清液;以100ml/min向血袋内注入0.9%NaCl500ml，边注边摇匀，注完后水平静置10min;热合，离心同上。
, 百拇医药
3.4 第3次洗涤 去上清液;以100ml/min向血袋内注入0.9%NaCl500ml，边注边摇匀，注完后水平静置10min;热合，以3000rpm离心10min，去上清。
3.5 冷冻红细胞制品 将3次洗涤后的红细胞加入0.9%NaCl100ml，摇匀，血袋倒置，让红细胞逆流至回输管内，热合一小段作配血标本，血袋贴上标签，包装好供应临床。
4 结果
4.1 根据国家质控标准 [4] 要求，我们分别对同一甘油浓度的100U冰冻红细胞进行洗涤，结果显示所有考核指标均优于改良前的洗涤方法，见表1。表1 冰冻红细胞洗涤方法改良前后的质控结果
4.2 临床应用 自2000年初起，我们运用上述洗涤方法对冰冻红细胞进行洗涤，共洗涤红细胞76U，全部发放临床，其中A型20U、B型21U、0型30U、AB型5U，共计有30人次输血，应用冰冻红细胞1～10U，平均为2.5U/人。经输血后观察检查均无不良反应发生，无血红蛋白尿出现，未见肾功能受损。
, http://www.100md.com
5 讨论
近年来，随着我市临床医生对稀有血型认识的不断提高和Rh阴性血液的广泛应用，使得稀有血型的血液需求量不断增加。为确保有充足的库存血量满足临床需求，我站自1999年起对无偿献血者进行Rh血型的筛查，至2003年6月共筛查出Rh阴性献血者286人、Rh阴性血液392U。我们采取了对献血员资料进行归档、对Rh阴性血液进行冷冻保存等措施，逐步建立起了我市的稀有血型电子档案库和血液实物库。在以往的工作中，临床需用Rh阴性血液时，我们或在电子档案库中筛选献血员即时献血，或是洗涤实物库中的冰冻红细胞，但两者都因寻找献血员时费时、费力或洗涤出来的红细胞达不到质控标准等原因难以满足临床急诊用血的需要。
为此，我们通过反复实验研究，改良了洗涤方法，运用800ml的大容量洗涤袋，增加洗涤液量，使洗涤液能更充分地与红细胞接触，从而更有效地去除甘油;同时我们只运用两个梯度的盐水进行洗涤，简化了操作步骤，节约了洗涤时间，很好地满足了临床用血的实际需要。手工法洗涤复苏冰冻红细所需仪器设备要求不高，操作方法简单，容易掌握。我国的中小型血站均有能力和条件开展此项工作，以满足本地区临床用血的需要，使临床输血的技术水平更上一个新的台阶。因此，它的推广应用必将带来良好的社会效益和经济效益。
, 百拇医药
参考文献
1 海鸥，等.冷冻红细胞制备工艺探讨.现代医药卫生，2002，18(11):1021-1022.
2 徐国泰，等.羟乙基淀粉溶液洗涤方法-快速洗涤红细胞.中国输血杂志，1988，1(4):191.
3 朱发明，等.细胞洗涤机自动洗涤解冻红细胞的探讨.临床输血与检验.2003，5(1):32-33.
4 中华人民共和国卫生部.全血及成分血质量标准(附件1).见:中华人民共和国卫生部，血站基本标准，2000.
作者单位:523920广东省东莞市中心血站
(编辑使 臻), 百拇医药(邹文涛)
关键词 冰冻红细胞 洗涤 临床应用
【文献标识码】 B 【文章编号】 1609-6614(2003)15-1427-02
红细胞在-80℃深低温冷冻保存过程中，甘油作为低温保护剂是减少溶血、提高回收率的重要保证，但临床应用前须经一定的程序洗涤才能去除。目前国内大多采用手工方法洗涤复苏冰冻红细胞，各地方大都根据自身特点进行了各种研究或改良，形成了多种洗涤方法 [1～3] 。我站自1999年起开展了红细胞的冷冻保存工作，起初是运用羟乙基淀粉溶液洗涤法 [2] 洗涤。经过一段时间的实践应用，我们发现使用该方法洗涤出来的红细胞经常出现溶血率高、回收率低、上清游离血红蛋白含量严重超标等现象，难以满足临床实际应用的需要。据此，我们参考了美国海军输血研究所介绍的自动洗涤方法，并对其进行了改良，应用于冰冻红细胞的复苏洗涤，取得了满意的效果。
, 百拇医药
1 材料与设备
1.1 材料 复方甘油冷冻液，聚氯乙烯采血袋，分浆袋，一次性分浆管，回输器，分浆夹，止血钳，医用剪刀，碘酒，酒精，40%甘油溶液，12%Nacl溶液，0.9%Nacl溶液。
1.2 设备 无菌间超净台，水浴箱，-80℃专用冰箱，Beckman J6-B离心机，Heidolph101振荡仪。
2 -80℃冻存红细胞的实验方法
2.1 分浆 采集的200ml全血置于Beckman F6-B离心机中，4000rpm离心5min，在无菌间超净台上用分浆夹夹紧血袋，消毒血袋接口处，插入分浆管分离血浆，得压积红细胞100ml，松开分浆夹。
2.2 甘油化 取一袋160ml复方甘油冷冻液悬于滴液架上，插入一次性回输器，向血袋内注入40%甘油溶液，3ml/min，血袋置于振荡仪上边注边摇匀，注至一半时水平静置 5min，剩余一半以6ml/min注入，注完后水平静置5min。
, 百拇医药
2.3 冷冻保存 甘油化红细胞袋上贴上标签(供者姓名，血型，血量，冷冻血编号)登记入册，放入纸盒中置-80℃冰箱保存。
3 冰冻红细胞的复苏和洗涤
3.1 解冻 从冰箱取出甘油化红细胞除去包装盒，放入37℃水浴箱中融化，不停水平摇动血袋，融化约需10min。
3.2 第1次洗涤 在无菌间超净台操作，向血袋内注入12%NaCl溶液30ml，1min内注完，血袋置于振荡仪上边注边摇匀，注完后水平静置10min;以100ml/min注入0.9%的NaCl500ml，边注边摇匀，注完后水平静置10min;热合，以2500rpm离心10min。
3.3 第2次洗涤 血袋用分浆夹夹紧，分离上清液;以100ml/min向血袋内注入0.9%NaCl500ml，边注边摇匀，注完后水平静置10min;热合，离心同上。
, 百拇医药
3.4 第3次洗涤 去上清液;以100ml/min向血袋内注入0.9%NaCl500ml，边注边摇匀，注完后水平静置10min;热合，以3000rpm离心10min，去上清。
3.5 冷冻红细胞制品 将3次洗涤后的红细胞加入0.9%NaCl100ml，摇匀，血袋倒置，让红细胞逆流至回输管内，热合一小段作配血标本，血袋贴上标签，包装好供应临床。
4 结果
4.1 根据国家质控标准 [4] 要求，我们分别对同一甘油浓度的100U冰冻红细胞进行洗涤，结果显示所有考核指标均优于改良前的洗涤方法，见表1。表1 冰冻红细胞洗涤方法改良前后的质控结果
4.2 临床应用 自2000年初起，我们运用上述洗涤方法对冰冻红细胞进行洗涤，共洗涤红细胞76U，全部发放临床，其中A型20U、B型21U、0型30U、AB型5U，共计有30人次输血，应用冰冻红细胞1～10U，平均为2.5U/人。经输血后观察检查均无不良反应发生，无血红蛋白尿出现，未见肾功能受损。
, http://www.100md.com
5 讨论
近年来，随着我市临床医生对稀有血型认识的不断提高和Rh阴性血液的广泛应用，使得稀有血型的血液需求量不断增加。为确保有充足的库存血量满足临床需求，我站自1999年起对无偿献血者进行Rh血型的筛查，至2003年6月共筛查出Rh阴性献血者286人、Rh阴性血液392U。我们采取了对献血员资料进行归档、对Rh阴性血液进行冷冻保存等措施，逐步建立起了我市的稀有血型电子档案库和血液实物库。在以往的工作中，临床需用Rh阴性血液时，我们或在电子档案库中筛选献血员即时献血，或是洗涤实物库中的冰冻红细胞，但两者都因寻找献血员时费时、费力或洗涤出来的红细胞达不到质控标准等原因难以满足临床急诊用血的需要。
为此，我们通过反复实验研究，改良了洗涤方法，运用800ml的大容量洗涤袋，增加洗涤液量，使洗涤液能更充分地与红细胞接触，从而更有效地去除甘油;同时我们只运用两个梯度的盐水进行洗涤，简化了操作步骤，节约了洗涤时间，很好地满足了临床用血的实际需要。手工法洗涤复苏冰冻红细所需仪器设备要求不高，操作方法简单，容易掌握。我国的中小型血站均有能力和条件开展此项工作，以满足本地区临床用血的需要，使临床输血的技术水平更上一个新的台阶。因此，它的推广应用必将带来良好的社会效益和经济效益。
, 百拇医药
参考文献
1 海鸥，等.冷冻红细胞制备工艺探讨.现代医药卫生，2002，18(11):1021-1022.
2 徐国泰，等.羟乙基淀粉溶液洗涤方法-快速洗涤红细胞.中国输血杂志，1988，1(4):191.
3 朱发明，等.细胞洗涤机自动洗涤解冻红细胞的探讨.临床输血与检验.2003，5(1):32-33.
4 中华人民共和国卫生部.全血及成分血质量标准(附件1).见:中华人民共和国卫生部，血站基本标准，2000.
作者单位:523920广东省东莞市中心血站
(编辑使 臻), 百拇医药(邹文涛)