血清乙肝病毒表面抗原和抗体共存模式分析
【摘要】 目的 了解血清乙肝病毒表面抗原和抗体(HBsAg和抗HBs)同时阳性的特征。方法 采用微粒子酶免疫分析技术测定3502例HBsAg阳性病例的血清HBsAg、抗HBs、乙肝病毒e抗原及其e抗体(HBeAg、抗HBe)，并分析相关乙肝病毒(HBV)血清标志物模式。结果3502例HBsAg阳性血清中，有92例(2.63%)HBsAg和抗HBs同时阳性。这92例中HBeAg阳性占52.17%(48/92)，抗HBe阳性占42.39%(39/92)。抗HBs和HBsAg同时阳性可发生于HBV感染的不同临床类型患者的血清中。结论 HBsAg阳性者即使有抗HBs的存在，也需要密切观察。
关键词 乙肝表面抗原 乙肝表面抗体 免疫酶技术
【文献标识码】 A 【文章编号】 1609-6614(2003)06-0494-02
Analysis on the positiveness for HBsAg and anti-HBs
, http://www.100md.com
in the HBV serologic markers
Liao Yunzhen，Ye Xiaoguang，Yu Xian
Department of Infectious Diseases，The Second Affiliated Hospital of Guangzhou Medical College，Guangzhou 510260.
【Abstract】 Objective To investigate the characteristics of positiveness for HBsAg and anti-HBs in the HBV serologic markers.Methods We detected HBsAg，anti-HBs，HBeAg，anti-HBe in the serum samples from3502cases with positiveness for HBsAg by using AxSyMMEIA system.Results 92(2.63%)patients with positiveness for anti-HBs and HBsAg of3502HBsAg positivenessin their sera included48(52.17%)and39(42.39%)with posiˉtiveness for HBeAg and anti-HBe.The positiveness for anti-HBs and HBsAg occurred in their sera of HBV infecˉtious different clinical types.Conclusion The patients with HBsAg positiveness，even if anti-HBs were present，must be taken in seriously.
, http://www.100md.com
Key words hepatitis B surface antigen hepatitis B surface antibody immunoenzyme techniques
乙型肝炎病毒血清学标志物显示模式及其检测是目前临床分析和判断乙肝患者病情、传染性大小和疗效分析的主要依据之一，我们尝试应用灵敏度和准确度较高的ABˉBOTT检测系统定量检测HBV血清标志物，以寻找其中的规律，为临床处理乙型病毒性肝炎提供较为准确的依据。我们在检测3502例HBV感染者中发现有多种不同的血清学标志模式，其中发现92例HBsAg与抗HBs同时阳性特殊血清学模式，现就此进行分析。
1 资料与方法
1.1 病例选择 对自2001年2月～2002年11月我科门诊及住院乙肝患者的血清样本共3502例，在检出HBsAg阳性的同时检测抗HBs，共检出HBsAg/抗HBs同时阳性者92例，其中男51例，女41例，年龄5～72岁。其中13例为住院患者，均有反复肝功能异常病史。除3例尚有HDsAg阳性外，其余患者甲、丙、丁、戊、庚型标志均阴性，并已排除酒精性、药物性、中毒性肝炎及脂肪肝。诊断符合2000年西安第十次全国病毒性肝炎学术会议修订的病毒性肝炎的诊断分型标准。
, 百拇医药
1.2 实验方法
1.2.1 标本收集 抽晨空腹静脉血3ml，分离血清后于当天进行HBV血清学检测。
1.2.2 HBV血清标志物的检测 采用美国Abbott公司生产的AxSyM全自动免疫荧光分析仪及配套Abbott试剂，检测HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBe四个项目，均采用微粒子酶免疫分析法(MEIA)检测，操作及质控均按试剂药盒操作说明规范进行。HBV-DNA检测应用荧光定量PCR法，>1.0E3copy/ml为阳性。
2 结果
3502例在检出HBsAg阳性的同时检测抗HBs，有92例(2.63%)在同一份血清样本中抗HBs和HBsAg同时阳性，HBsAg和抗HBs同时阳性的血清学模式有3种，见表1。其中12例患者在不同时间采血均获相同的模式(即一个患者多次均检出HBsAg和抗HBs同时阳性)。
, 百拇医药
表1 92例HBsAg和抗HBs同时阳性的血清学模式 (略)
92例中有住院患者13例，男12例，女1例，患乙型肝炎的病程1～26年，乙型病毒性肝炎慢性轻度4例，慢性中度2例，慢性中度重叠丁型肝炎病毒感染3例，乙肝后肝硬化肝功能失代偿期2例，肝硬化恶变2例，均伴有不同程度的肝功能异常。
92例中有9例进行HBV-DNA(PCR)检测，发现有5例HBV-DNA呈阳性。
92例中有6例为全程乙肝疫苗接种者。
3 讨论
传统观点认为，HBV感染后抗HBs的出现是HBV被宿主清除的保护性标志，此时的血清没有传染性，换言之，HBV现行感染与抗HBs是相互排斥的。但近年的文献报道抗HBs可以单独 [1，2] 和(或)HBsAg同时 [3] 存在于HBV感染相关的慢性肝病患者血清中，这些患者体内可以有HBV存在和复制。本组检测结果表明，HBsAg阳性的3502病例中，2.63%同时用微粒子免疫荧光分析技术试验可测得抗HBs阳性，这一百分比主要取决于抗HBs试验的灵敏度和特异性，因为部分抗HBs处于临界值，可能部分抗HBs反应是非特异性的，或者可能是HBsAg-抗HBs动态平衡阶段(在HBV-M模式的转换过程中)。然而，有些病例在不同时期采血重复此试验仍能测得阳性，且抗HBs水平也较高，提示抗HBs确实与HBsAg同时存在。研究证实 [4] 同时出现HBsAg/抗HBs阳性者，HBsAg和抗HBs的亚型不同，为同时或相继被不同的HBV亚型感染。此时，抗HBs仅能中和同型血清中的病毒。本研究中，少部分慢乙肝患者在病程的前几年为HBsAg阳性，近几年出现HBsAg/抗HBs同时阳性，这种现象的发生可能由于HBV具有高度变异性，前S/S区基因发生变异，引起HBsAg“a”决定簇的抗原性免疫原性发生改变，使野毒株产生的抗HBs与变异的HBsAg的结合力下降。从而导致两者共存。Wang等 [5] 发现，HBˉsAg/抗HBs共存时有前S/S基因多个点突变和少量缺失，尤其是“a”决定簇变异导致野毒株第126位异亮氨酸变为天门冬酰胺。本组资料中部分病例为HBV慢性感染者，同时存在HBsAg和抗HBs，甚至是高度感染，因为49/92例被测得HBeAg阳性，说明肝细胞中的病毒复制仍可持续，因此，抗HBs的出现并不能标志HBV复制的停止。有9例测HBV-DNA(定量PCR法)，其中5例呈阳性，也进一步说明HBV复制活跃。
, http://www.100md.com
本组资料中，6例HBsAg/抗HBs同时阳性者发生于接种乙型肝炎疫苗后，他们在接种乙肝疫苗前用酶联免疫法 检测仅抗HBc是阳性的，全程免疫接种后HBsAg/抗HBs同时阳性，考虑该部分人既往有HBV感染或血清HBsAg低水平存在，普通检测手段不能测出，接种疫苗后，在宿主免疫压力下，发生变异株感染。Lee等 [6] 报道了接种乙型肝炎疫苗后出现HBsAg肽G145R的逃逸变异。
从本文13例住院病人中可见血清HBsAg/抗HBs同时阳性可发生于慢性HBV感染的不同临床类型的病例中，基因变异与病情变化如慢性化、重症化甚至发生癌变的临床关系，需要更大样本的临床资料进一步来观察。
我们认为，慢性乙型肝炎患者血清中任何HBV抗体的出现都提示并不意味HBV存在和复制的停止，在临床上需要密切的动态观察。
参考文献
1 Kaneko S，Miller RH，Feinstone SM，et al.Detection of serumhepatitis B virus DNA in patients with chronic hepatitis using the polymerase chain reaction assay.Proc Natl Acad Sci USA，1989，86:312-316.
, 百拇医药
2 Liang TJ，Baruch Y，Ben-Porath E，et al.Hepatitis B virus infection in patients with idiopathic liver disease.Hepatology，1991，13:1044-1051.
3 Yamamoto K，Horikita M，Tsuda F，et al.Naturally occurring escape muˉtants of hepatitis B virus with various mutations in the S gene in carriers seropositive for antibody to hepatitis B surface antigen.J virol，1994，68:2671-2676.
4 李梦东.实用传染病学，第二版.北京:人民卫生出版社，1998，104.
, http://www.100md.com
5 Wang YM，Ng WC，Lo SK，et al.Detection of pre-s/s gene mutants in chronic hepatitis B carriers with concurrent hepatitis B surface antibody and hepatitis Bsurface antigen.J Gastroenterol，1999，34(5):600-606.
6 Lee KM，Kim Ys，Ko YY，et al.Emergence of vaccine-induced escape mutant ofhepatitis B virus with multiple surface gene mutations in a Koˉrean child.J Korean Med Sci，2001，16(3):359-362.
(收稿日期:2003-03-24) (编辑 晓勇), http://www.100md.com
关键词 乙肝表面抗原 乙肝表面抗体 免疫酶技术
【文献标识码】 A 【文章编号】 1609-6614(2003)06-0494-02
Analysis on the positiveness for HBsAg and anti-HBs
, http://www.100md.com
in the HBV serologic markers
Liao Yunzhen，Ye Xiaoguang，Yu Xian
Department of Infectious Diseases，The Second Affiliated Hospital of Guangzhou Medical College，Guangzhou 510260.
【Abstract】 Objective To investigate the characteristics of positiveness for HBsAg and anti-HBs in the HBV serologic markers.Methods We detected HBsAg，anti-HBs，HBeAg，anti-HBe in the serum samples from3502cases with positiveness for HBsAg by using AxSyMMEIA system.Results 92(2.63%)patients with positiveness for anti-HBs and HBsAg of3502HBsAg positivenessin their sera included48(52.17%)and39(42.39%)with posiˉtiveness for HBeAg and anti-HBe.The positiveness for anti-HBs and HBsAg occurred in their sera of HBV infecˉtious different clinical types.Conclusion The patients with HBsAg positiveness，even if anti-HBs were present，must be taken in seriously.
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Key words hepatitis B surface antigen hepatitis B surface antibody immunoenzyme techniques
乙型肝炎病毒血清学标志物显示模式及其检测是目前临床分析和判断乙肝患者病情、传染性大小和疗效分析的主要依据之一，我们尝试应用灵敏度和准确度较高的ABˉBOTT检测系统定量检测HBV血清标志物，以寻找其中的规律，为临床处理乙型病毒性肝炎提供较为准确的依据。我们在检测3502例HBV感染者中发现有多种不同的血清学标志模式，其中发现92例HBsAg与抗HBs同时阳性特殊血清学模式，现就此进行分析。
1 资料与方法
1.1 病例选择 对自2001年2月～2002年11月我科门诊及住院乙肝患者的血清样本共3502例，在检出HBsAg阳性的同时检测抗HBs，共检出HBsAg/抗HBs同时阳性者92例，其中男51例，女41例，年龄5～72岁。其中13例为住院患者，均有反复肝功能异常病史。除3例尚有HDsAg阳性外，其余患者甲、丙、丁、戊、庚型标志均阴性，并已排除酒精性、药物性、中毒性肝炎及脂肪肝。诊断符合2000年西安第十次全国病毒性肝炎学术会议修订的病毒性肝炎的诊断分型标准。
, 百拇医药
1.2 实验方法
1.2.1 标本收集 抽晨空腹静脉血3ml，分离血清后于当天进行HBV血清学检测。
1.2.2 HBV血清标志物的检测 采用美国Abbott公司生产的AxSyM全自动免疫荧光分析仪及配套Abbott试剂，检测HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBe四个项目，均采用微粒子酶免疫分析法(MEIA)检测，操作及质控均按试剂药盒操作说明规范进行。HBV-DNA检测应用荧光定量PCR法，>1.0E3copy/ml为阳性。
2 结果
3502例在检出HBsAg阳性的同时检测抗HBs，有92例(2.63%)在同一份血清样本中抗HBs和HBsAg同时阳性，HBsAg和抗HBs同时阳性的血清学模式有3种，见表1。其中12例患者在不同时间采血均获相同的模式(即一个患者多次均检出HBsAg和抗HBs同时阳性)。
, 百拇医药
表1 92例HBsAg和抗HBs同时阳性的血清学模式 (略)
92例中有住院患者13例，男12例，女1例，患乙型肝炎的病程1～26年，乙型病毒性肝炎慢性轻度4例，慢性中度2例，慢性中度重叠丁型肝炎病毒感染3例，乙肝后肝硬化肝功能失代偿期2例，肝硬化恶变2例，均伴有不同程度的肝功能异常。
92例中有9例进行HBV-DNA(PCR)检测，发现有5例HBV-DNA呈阳性。
92例中有6例为全程乙肝疫苗接种者。
3 讨论
传统观点认为，HBV感染后抗HBs的出现是HBV被宿主清除的保护性标志，此时的血清没有传染性，换言之，HBV现行感染与抗HBs是相互排斥的。但近年的文献报道抗HBs可以单独 [1，2] 和(或)HBsAg同时 [3] 存在于HBV感染相关的慢性肝病患者血清中，这些患者体内可以有HBV存在和复制。本组检测结果表明，HBsAg阳性的3502病例中，2.63%同时用微粒子免疫荧光分析技术试验可测得抗HBs阳性，这一百分比主要取决于抗HBs试验的灵敏度和特异性，因为部分抗HBs处于临界值，可能部分抗HBs反应是非特异性的，或者可能是HBsAg-抗HBs动态平衡阶段(在HBV-M模式的转换过程中)。然而，有些病例在不同时期采血重复此试验仍能测得阳性，且抗HBs水平也较高，提示抗HBs确实与HBsAg同时存在。研究证实 [4] 同时出现HBsAg/抗HBs阳性者，HBsAg和抗HBs的亚型不同，为同时或相继被不同的HBV亚型感染。此时，抗HBs仅能中和同型血清中的病毒。本研究中，少部分慢乙肝患者在病程的前几年为HBsAg阳性，近几年出现HBsAg/抗HBs同时阳性，这种现象的发生可能由于HBV具有高度变异性，前S/S区基因发生变异，引起HBsAg“a”决定簇的抗原性免疫原性发生改变，使野毒株产生的抗HBs与变异的HBsAg的结合力下降。从而导致两者共存。Wang等 [5] 发现，HBˉsAg/抗HBs共存时有前S/S基因多个点突变和少量缺失，尤其是“a”决定簇变异导致野毒株第126位异亮氨酸变为天门冬酰胺。本组资料中部分病例为HBV慢性感染者，同时存在HBsAg和抗HBs，甚至是高度感染，因为49/92例被测得HBeAg阳性，说明肝细胞中的病毒复制仍可持续，因此，抗HBs的出现并不能标志HBV复制的停止。有9例测HBV-DNA(定量PCR法)，其中5例呈阳性，也进一步说明HBV复制活跃。
, http://www.100md.com
本组资料中，6例HBsAg/抗HBs同时阳性者发生于接种乙型肝炎疫苗后，他们在接种乙肝疫苗前用酶联免疫法 检测仅抗HBc是阳性的，全程免疫接种后HBsAg/抗HBs同时阳性，考虑该部分人既往有HBV感染或血清HBsAg低水平存在，普通检测手段不能测出，接种疫苗后，在宿主免疫压力下，发生变异株感染。Lee等 [6] 报道了接种乙型肝炎疫苗后出现HBsAg肽G145R的逃逸变异。
从本文13例住院病人中可见血清HBsAg/抗HBs同时阳性可发生于慢性HBV感染的不同临床类型的病例中，基因变异与病情变化如慢性化、重症化甚至发生癌变的临床关系，需要更大样本的临床资料进一步来观察。
我们认为，慢性乙型肝炎患者血清中任何HBV抗体的出现都提示并不意味HBV存在和复制的停止，在临床上需要密切的动态观察。
参考文献
1 Kaneko S，Miller RH，Feinstone SM，et al.Detection of serumhepatitis B virus DNA in patients with chronic hepatitis using the polymerase chain reaction assay.Proc Natl Acad Sci USA，1989，86:312-316.
, 百拇医药
2 Liang TJ，Baruch Y，Ben-Porath E，et al.Hepatitis B virus infection in patients with idiopathic liver disease.Hepatology，1991，13:1044-1051.
3 Yamamoto K，Horikita M，Tsuda F，et al.Naturally occurring escape muˉtants of hepatitis B virus with various mutations in the S gene in carriers seropositive for antibody to hepatitis B surface antigen.J virol，1994，68:2671-2676.
4 李梦东.实用传染病学，第二版.北京:人民卫生出版社，1998，104.
, http://www.100md.com
5 Wang YM，Ng WC，Lo SK，et al.Detection of pre-s/s gene mutants in chronic hepatitis B carriers with concurrent hepatitis B surface antibody and hepatitis Bsurface antigen.J Gastroenterol，1999，34(5):600-606.
6 Lee KM，Kim Ys，Ko YY，et al.Emergence of vaccine-induced escape mutant ofhepatitis B virus with multiple surface gene mutations in a Koˉrean child.J Korean Med Sci，2001，16(3):359-362.
(收稿日期:2003-03-24) (编辑 晓勇), http://www.100md.com