柴胡疏肝散对实验性肝郁证小鼠胃肠功能的影响
【摘要】 目的 研究柴胡疏肝散对实验性肝郁证小鼠胃肠功能的改善作用。方法 以夹尾间接刺激小鼠建立肝郁动物模型，给模型小鼠柴胡疏肝散煎剂灌胃，并设空白对照。3周后处死小鼠，观察小鼠胃排空运动和胃肠激素的含量变化。结果 柴胡疏肝散治疗组小鼠甲基橙胃残留率显著高于模型对照组(P<0.001)，胃泌素、胃动素含量明显低于模型对照组(P<0.001，P<0.01)。结论 柴胡疏肝散可显著改善实验性肝郁证小鼠的胃肠功能，为临床治疗消化系统疾病提供了可靠依据。
关键词 柴胡疏肝散 肝郁证 小鼠 胃肠功能 实验研究
【文献标识码】 A 【文章编号】 1684-2030(2003)12-1060-02
Effect of Chaihushugan powder on the gastroenteric function
of Experimental Hepatic Qi Disorder in Mice
, 百拇医药
Miao Yulan，Guo Xiaoxia
The Second Hospital of Yinchuan，Ningxia750011.
【Abstract】 Objective To study the effect of Chaihushugan powder(CP)on the gastroenteric function of mice with experimental hepatic qi disorder.Methods Indirect excitation were used to evoke the mice to set up the mice model of hepatic qi disorder.And then the mice were treated with CP.The normal mice were set up as the conˉtrol groups.3weeks later，each group of the mice were picked off，gastrin(GAS)and motilin(MTL)and gastroenteric movementwere detected.ResultsIn the treatment group，Gastric percentage of retention of helianthin were much higher than that in the model group，the difference was notable(p<0.001)，whileGAS and MTL were lower than the model group(P<0.001，P<0.01).Conclusion CP could significantly improve the gastroenteric function of the mice model of hepatic qi disorder.This may be the reliable evidence for the clinical treatment of CPon the disgestive system disease.
, 百拇医药
Key words Chaihushugan powder experimental hepatic qi disorder mouse gastroenteric function experiˉmental study
柴胡疏肝散是疏肝理气的代表方剂，现代临床常用于治疗肝胆疾病。本项研究将其用于实验性肝郁证小鼠，观察其对实验性肝郁证小鼠胃肠功能的改善作用，旨在为临床治疗消化系统疾病提供实验依据。
1 材料
1.1 药物与试剂 柴胡疏肝散煎液:柴胡、枳壳、陈皮、川芎、芍药、香附、甘草各10g，加热煎煮2次，将药液混匀，加热浓缩至1g生药/ml。0.1%甲基橙溶液(分析纯，北京化工厂，蒸馏水配置，0.001g/ml)，5%NaHCO 3 (分析纯，北京化工厂，蒸馏水配置，0.05g/ml);胃泌素放免试剂盒(批号9809)及胃动素放免试剂盒(批号9802)，由中国人民解放军总医院科技开发中心放免研究所提供。
, 百拇医药
1.2 动物 选用健康昆明种小鼠，体重35±3g，雄性，由山西省中医药研究院实验动物室提供。
1.3 仪器 7210型分光光电比色计(上海分析仪器厂);BP211D型电子天平(Sartoriums，德国);LXJ-II型离心沉淀机(上海医用分析仪器厂);JW8312型精密微量移液管(济南电管厂)，FT464型微机免疫测量仪(北京核仪器厂)。
1.4 试剂的配制
1.4.1 0.1%甲基橙溶液的配置 精密称取甲基橙0.025g，溶解于25ml蒸馏水中，摇匀。
1.4.2 5%NaHCO 3 溶液的制备 精密称取NaHCO 3 2.5g，溶解于50ml蒸馏水中，摇匀。
2方法
, 百拇医药 2.1 动物分组及模型制备 于造型前随机分出16只为正常对照组，肝郁证模型小鼠随机分为模型对照组、柴胡疏肝组共3组。造模:参照文献方法 [1] ，每笼2只小鼠用尖端包裹纱布的止血钳夹尾部，令其与其它小鼠撕打，间接刺激全笼其它小鼠，每次刺激30min，以不破皮流血为度，每日1次，连续20天，最后将夹尾小鼠去除，其余小鼠以备实验。柴胡疏肝组灌胃给予柴胡疏肝散煎液0.7ml，正常和模型对照组灌胃等量0.7ml蒸馏水，每日1次，连续3周。
2.2 指标测定
2.2.1 甲基橙胃残留率的测定 参考文献 [2] ，实验前禁食12h，自由饮水，为了避免中药本身颜色对测量的干扰，采用皮下注射给药。给药组小鼠皮下注射柴胡疏肝散煎液(0.2μl/10g)，正常对照组与模型对照组给予同体积生理盐水。给药40min后，每只小鼠灌胃0.2ml0.1%甲基橙溶液，20min后脱臼处死小鼠，剖腹摘取胃置于试管中，加入10ml蒸馏水。用小剪刀沿胃大弯剪开胃，将胃内容物充分洗于蒸馏水中，用溶液调至pH值为6.0～6.5，倒入刻度离心管，以2000rpm离心10min，取上清液用分光光度比色计(波长420nm)比色，用蒸馏水调零，测量溶液的光密度，测得的光密度为胃中甲基橙光密度，并以0.1%甲基橙0.2ml加入10ml蒸馏水摇匀后测量其光密度作为基数甲基橙光密度，按下列公式计算甲基橙胃残留率。甲基橙残留率的高低可反映胃排空的快慢。甲基橙胃残留率(%)=胃甲基橙光密度/基数甲基橙光密度×100%
, http://www.100md.com
2.2.2 血清胃泌素的测定 空腹静脉采血1ml，用放射免疫法直接测定。
2.2.3 血浆胃动素的测定 空腹静脉采血1ml，置于含15μl的10%的EDTA二钠和15μl抑肽酶的玻璃试管中混匀，4℃离心，-20℃以下保存待测。用放射免疫法直接测定。
2.3 统计学分析 计量资料值以均数±标准差(X±SD)表示，方差不齐者用t检验。
3 结果
3.1 肝郁证及柴胡疏肝散对动物胃排空运动的影响 见表1。表1 各组小鼠甲基橙残留率的比较(X±SD)
ˇ 注:与模型对照组比较， ˇ P<0.05， ˇˇ P<0.001
实验结果表明，模型对照组甲基橙胃残留率降低，与正常对照组比较差异具有显著性(P<0.05)。给药后柴胡疏肝组甲基橙胃残留率增高，与模型对照组比较有显著性差异(P<0.001)。
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3.2 肝郁证及柴胡疏肝散对动物胃肠激素的影响 见表 2。 表2 各组小鼠胃泌素、胃动素的比较(X±SD)
注:与模型对照组比较， ˇ P<0.01， ˇˇ P<0.001
实验结果表明，模型对照组胃泌素、胃动素含量高于正常对照组(P<0.01);给药后柴胡疏肝组胃泌素、胃动素含量低于模型对照组(P<0.001，P<0.01)。
4 讨论
肝郁证是中医临床中常见的一种证候，本实验选择的证候模型，造模因素为证候的主要病因，相当于临床病因。肝脏证候的动物模型的造模途径主要以药物或物理手段改变精神活动或通过肝脏损害而改变情绪，或模拟肝郁证的主要征象 [3] 。激怒肝郁模型以植物神经功能改变及中枢神经递质研究为主，且肝郁证病理模型中，怒的一面较易模拟，故本实验选择激怒慢性造模，并以此模型作为研究对象。
, 百拇医药
目前胃肠运动和胃肠激素是反映消化系统功能的重要指标，肝郁气滞状态时常可使胃肠蠕动加快，胃泌素、胃动素分泌增加。本实验直接观察了小鼠胃排空运动及胃肠激素的含量变化。从实验结果可以看出:肝郁证模型形成时，胃肠蠕动加快，胃泌素、胃动素分泌增加。说明肝郁状态的存在;给予柴胡疏肝散治疗后胃肠蠕动减慢，胃泌素、胃动素分泌降至正常，说明治疗有效。这种确定的造模成功与药物治疗有效作用，提示调节胃肠运动及胃肠激素的分泌可能是柴胡疏肝散治疗消化系统疾病的重要机制。
参考文献
1 陈小野.实用中医证候动物模型学，北京:北京医科大学、中国协和医科大学联合出版社，1993，260.
2 陈奇.中药药理研究方法学，北京:人民卫生出版社，2000，861.
3 孟庆云.中西医结合基础理论研究方法与实验技术，北京:中医古籍出版社，1999，195.
(收稿日期:2003-12-16)
作者单位:1750011宁夏银川市第二人民医院内(3)科
2030012山西省中医药研究院
(编辑晓 勇), http://www.100md.com(苗玉兰)
关键词 柴胡疏肝散 肝郁证 小鼠 胃肠功能 实验研究
【文献标识码】 A 【文章编号】 1684-2030(2003)12-1060-02
Effect of Chaihushugan powder on the gastroenteric function
of Experimental Hepatic Qi Disorder in Mice
, 百拇医药
Miao Yulan，Guo Xiaoxia
The Second Hospital of Yinchuan，Ningxia750011.
【Abstract】 Objective To study the effect of Chaihushugan powder(CP)on the gastroenteric function of mice with experimental hepatic qi disorder.Methods Indirect excitation were used to evoke the mice to set up the mice model of hepatic qi disorder.And then the mice were treated with CP.The normal mice were set up as the conˉtrol groups.3weeks later，each group of the mice were picked off，gastrin(GAS)and motilin(MTL)and gastroenteric movementwere detected.ResultsIn the treatment group，Gastric percentage of retention of helianthin were much higher than that in the model group，the difference was notable(p<0.001)，whileGAS and MTL were lower than the model group(P<0.001，P<0.01).Conclusion CP could significantly improve the gastroenteric function of the mice model of hepatic qi disorder.This may be the reliable evidence for the clinical treatment of CPon the disgestive system disease.
, 百拇医药
Key words Chaihushugan powder experimental hepatic qi disorder mouse gastroenteric function experiˉmental study
柴胡疏肝散是疏肝理气的代表方剂，现代临床常用于治疗肝胆疾病。本项研究将其用于实验性肝郁证小鼠，观察其对实验性肝郁证小鼠胃肠功能的改善作用，旨在为临床治疗消化系统疾病提供实验依据。
1 材料
1.1 药物与试剂 柴胡疏肝散煎液:柴胡、枳壳、陈皮、川芎、芍药、香附、甘草各10g，加热煎煮2次，将药液混匀，加热浓缩至1g生药/ml。0.1%甲基橙溶液(分析纯，北京化工厂，蒸馏水配置，0.001g/ml)，5%NaHCO 3 (分析纯，北京化工厂，蒸馏水配置，0.05g/ml);胃泌素放免试剂盒(批号9809)及胃动素放免试剂盒(批号9802)，由中国人民解放军总医院科技开发中心放免研究所提供。
, 百拇医药
1.2 动物 选用健康昆明种小鼠，体重35±3g，雄性，由山西省中医药研究院实验动物室提供。
1.3 仪器 7210型分光光电比色计(上海分析仪器厂);BP211D型电子天平(Sartoriums，德国);LXJ-II型离心沉淀机(上海医用分析仪器厂);JW8312型精密微量移液管(济南电管厂)，FT464型微机免疫测量仪(北京核仪器厂)。
1.4 试剂的配制
1.4.1 0.1%甲基橙溶液的配置 精密称取甲基橙0.025g，溶解于25ml蒸馏水中，摇匀。
1.4.2 5%NaHCO 3 溶液的制备 精密称取NaHCO 3 2.5g，溶解于50ml蒸馏水中，摇匀。
2方法
, 百拇医药 2.1 动物分组及模型制备 于造型前随机分出16只为正常对照组，肝郁证模型小鼠随机分为模型对照组、柴胡疏肝组共3组。造模:参照文献方法 [1] ，每笼2只小鼠用尖端包裹纱布的止血钳夹尾部，令其与其它小鼠撕打，间接刺激全笼其它小鼠，每次刺激30min，以不破皮流血为度，每日1次，连续20天，最后将夹尾小鼠去除，其余小鼠以备实验。柴胡疏肝组灌胃给予柴胡疏肝散煎液0.7ml，正常和模型对照组灌胃等量0.7ml蒸馏水，每日1次，连续3周。
2.2 指标测定
2.2.1 甲基橙胃残留率的测定 参考文献 [2] ，实验前禁食12h，自由饮水，为了避免中药本身颜色对测量的干扰，采用皮下注射给药。给药组小鼠皮下注射柴胡疏肝散煎液(0.2μl/10g)，正常对照组与模型对照组给予同体积生理盐水。给药40min后，每只小鼠灌胃0.2ml0.1%甲基橙溶液，20min后脱臼处死小鼠，剖腹摘取胃置于试管中，加入10ml蒸馏水。用小剪刀沿胃大弯剪开胃，将胃内容物充分洗于蒸馏水中，用溶液调至pH值为6.0～6.5，倒入刻度离心管，以2000rpm离心10min，取上清液用分光光度比色计(波长420nm)比色，用蒸馏水调零，测量溶液的光密度，测得的光密度为胃中甲基橙光密度，并以0.1%甲基橙0.2ml加入10ml蒸馏水摇匀后测量其光密度作为基数甲基橙光密度，按下列公式计算甲基橙胃残留率。甲基橙残留率的高低可反映胃排空的快慢。甲基橙胃残留率(%)=胃甲基橙光密度/基数甲基橙光密度×100%
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2.2.2 血清胃泌素的测定 空腹静脉采血1ml，用放射免疫法直接测定。
2.2.3 血浆胃动素的测定 空腹静脉采血1ml，置于含15μl的10%的EDTA二钠和15μl抑肽酶的玻璃试管中混匀，4℃离心，-20℃以下保存待测。用放射免疫法直接测定。
2.3 统计学分析 计量资料值以均数±标准差(X±SD)表示，方差不齐者用t检验。
3 结果
3.1 肝郁证及柴胡疏肝散对动物胃排空运动的影响 见表1。表1 各组小鼠甲基橙残留率的比较(X±SD)
ˇ 注:与模型对照组比较， ˇ P<0.05， ˇˇ P<0.001
实验结果表明，模型对照组甲基橙胃残留率降低，与正常对照组比较差异具有显著性(P<0.05)。给药后柴胡疏肝组甲基橙胃残留率增高，与模型对照组比较有显著性差异(P<0.001)。
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3.2 肝郁证及柴胡疏肝散对动物胃肠激素的影响 见表 2。 表2 各组小鼠胃泌素、胃动素的比较(X±SD)
注:与模型对照组比较， ˇ P<0.01， ˇˇ P<0.001
实验结果表明，模型对照组胃泌素、胃动素含量高于正常对照组(P<0.01);给药后柴胡疏肝组胃泌素、胃动素含量低于模型对照组(P<0.001，P<0.01)。
4 讨论
肝郁证是中医临床中常见的一种证候，本实验选择的证候模型，造模因素为证候的主要病因，相当于临床病因。肝脏证候的动物模型的造模途径主要以药物或物理手段改变精神活动或通过肝脏损害而改变情绪，或模拟肝郁证的主要征象 [3] 。激怒肝郁模型以植物神经功能改变及中枢神经递质研究为主，且肝郁证病理模型中，怒的一面较易模拟，故本实验选择激怒慢性造模，并以此模型作为研究对象。
, 百拇医药
目前胃肠运动和胃肠激素是反映消化系统功能的重要指标，肝郁气滞状态时常可使胃肠蠕动加快，胃泌素、胃动素分泌增加。本实验直接观察了小鼠胃排空运动及胃肠激素的含量变化。从实验结果可以看出:肝郁证模型形成时，胃肠蠕动加快，胃泌素、胃动素分泌增加。说明肝郁状态的存在;给予柴胡疏肝散治疗后胃肠蠕动减慢，胃泌素、胃动素分泌降至正常，说明治疗有效。这种确定的造模成功与药物治疗有效作用，提示调节胃肠运动及胃肠激素的分泌可能是柴胡疏肝散治疗消化系统疾病的重要机制。
参考文献
1 陈小野.实用中医证候动物模型学，北京:北京医科大学、中国协和医科大学联合出版社，1993，260.
2 陈奇.中药药理研究方法学，北京:人民卫生出版社，2000，861.
3 孟庆云.中西医结合基础理论研究方法与实验技术，北京:中医古籍出版社，1999，195.
(收稿日期:2003-12-16)
作者单位:1750011宁夏银川市第二人民医院内(3)科
2030012山西省中医药研究院
(编辑晓 勇), http://www.100md.com(苗玉兰)