非协调性异种胰腺移植动物模型的建立
【摘要】 目的 建立豚鼠至大鼠异种胰腺移植的动物模型。方法 利用显微外科技术，进行豚鼠至大鼠间的门静脉与下腔静脉和腹主动脉间吻合的胰腺移植。结果 完成了豚鼠至大鼠异种胰腺移植20例，成功了17例。受体大鼠平均存活时间167.41±52.08min。结论 豚鼠至大鼠异种动物胰腺移植模型可行，但存活时间有限。
关键词 异种动物 胰腺移植
【文献标识码】 A 【文章编号】 1684-2030(2003)12-1091-02
目前制约临床广泛开展器官移植的主要原因之一，是供体器官的严重缺乏。开展异种器官移植是当今世界器官移植研究的前沿课题，非协调性异种器官移植成为研究的 新方向。本文报告了豚鼠至大鼠异种胰腺移植动物模型的建立方法，对该模型的制作进行了探讨。
1 材料和方法
, 百拇医药
1.1 动物 供、受体为近交系封闭群雄性健康荷兰豚鼠(体重280±20g)和Wistar大鼠(体重250±20g)，供、受体术前12h禁食不禁水。
1.2 移植手术 手术在放大镜下单人进行操作，乙醚开放吸入麻醉。本实验是在成功的进行了预实验，熟练的掌握大鼠、豚鼠器官组织特殊解剖关系后进行了正式实验。
1.2.1 供体手术 乙醚麻醉生效后自豚鼠阴茎背静脉注入肝素400IU(200IU/ml，2ml)，供体早期肝素化。取剑突至耻骨联合腹部正中切口，显露胃左动脉起始处，分别结扎切断胃左和胃短血管，向左游离结扎脾脏血管，沿无血管区剪开胰下缘与大网膜的连接，结扎切断胃网膜左、右血管。于幽门环下方0.5cm处结扎十二指肠，依次切断食道及十二指肠近端，弃去胃。将十二指肠推向右方，游离门静脉直到进入肝门的分支处，保护幽门静脉，分离、结扎、切断肝固有动脉和胆总管。游离十二指肠:提起横结肠，锐性分离其与小肠间的联系，分束结扎结肠中血管及分支，于胰腺下缘，胰十二指肠下动脉分支远侧结扎肠系膜上血管及系膜。游离腹主动脉:结扎并切断右肾动脉，6-0线结扎并切断腹腔动脉与肠系膜上动脉间发出的两、三根腰动脉，至此带有腹腔动脉和肠系膜上动脉的腹主动脉已完全游离开。原位低温灌注:在肠系膜上动脉开口以下的腹主动脉其远端用动脉夹暂阻断，钳夹腹腔动脉开口以上的腹主动脉，于肝门门静脉分叉处切断门静脉，立即用4℃肝素林格氏液(25IU/ml)经腹主动脉进行缓慢、低压、匀速、搏动性灌注，灌注压力以刚能见到腹腔动脉及肠系膜上动脉搏动为度。通常约需灌洗液5～8ml，直到整个胰腺和十二指肠苍白，门静脉流出澄清的灌洗液，十二指肠浆膜下边缘动静脉的积血完全洗净，血管清晰可见。结扎并切断肠系膜上动脉远端的腹主动脉，距腹腔动脉以上0.5cm处切断腹主动脉近端。在空肠与十二指肠之间形成明确分界线处切断肠管，并在肠系膜上血管结扎线远端切断系膜，完整取下移植物，包括全胰，十二指肠并连用腹主动脉及门静脉的血管蒂，迅速将移植物置入盛有4℃含肝素(25IU/ml)的复方乳酸钠林格氏液的器皿中，放于冰盘上保存。供体手术需时间40～50min。
, 百拇医药
1.2.2 移植物的准备 弧形剪除门静脉间隔，注意上下位置，分别用8-0，9-0无损伤缝合针牵吊标记腹主动脉、门静脉位置后，置于4℃冰箱中备移植用。移植物修剪需时间5min。
1.2.3 受体手术 取腹部正中剑突至耻骨联合切口。游离血管:自左肾静脉以下将腹主动脉和下腔静脉完全游离开至髂血管分叉处(约1～1.5cm)，预定吻合段血管用6-0线结扎腰背部回流至下腔静脉的细小分支。在阻断血液循环之前经阴茎背静脉注入肝素生理盐水(2～3ml)。吻合血管:血管夹—并阻断腹主动脉和下腔静脉，依移植物血管口 径在受体腹主动脉和下腔静脉表面剪一椭圆形口，肝素生理盐水冲净血管腔内积血，按供体门静脉—受体下腔静脉，供体腹主动脉—受体腹主动脉顺序自上而下分别用9-0，8-0无损伤缝合针线行两定点连续吻合，在动静脉吻合最后一针前，腔内注入肝素生理盐水冲除气泡，开放循环前仔细检查吻合口有无裂隙、不均，撤去血管夹，干棉球压迫吻合口1～2min，可见腹腔动脉，肠系膜上动脉搏动有力，门静脉充盈，移植物由苍白变红润。用6-0无损伤缝合线行供、受体十二指肠端侧单层连续缝合。移植物放置于腹腔右侧，避免动、静脉扭曲。受体手术需时间50～60min。
, 百拇医药
1.2.4 移植成活标准及存活时间 成活标准:腹主动脉和下腔静脉吻合之后撤去止血钳，吻合口无扭曲、无狭窄，且充盈、通畅，无明显渗出血。供体胰腺及十二指肠迅速由苍白转为红润，且有光泽。停止麻醉后受体可清醒。存活时间:手术结束后确定受体已经成活至受体呼吸停止时间。
2 结果
本实验完成了20只异种胰腺移植，受体存活17只(85%)，存活时间平均167.41±52.08min。有3只受体动物各因麻醉意外和血管吻合问题而死亡。血管开放后移植物灌注血液较均匀、充分，即可见组织由苍白转为红润，但移植物由红润逐渐转为充血进而变成淤血、水肿表现，且逐渐加重。逐渐出现呼吸停止而死亡。
3 讨论
近年器官移植发展突飞猛进，但是供体严重不足，限制了器官移植的发展，于是开展了各种异种器官移植的研究。目前开展比较多的是协调性异种器官移植，非协调性异种器官移植主要是心脏移植和仅有少量的肝脏移植研究报告，豚鼠、大鼠间的胰腺异种器官移植尚未见报道。豚鼠门静脉内含多量的平滑肌成分，经门静脉冷灌洗后，平滑肌收缩可导致门静脉管腔变窄而造成静脉回流受阻，有报告提出提高门静脉灌洗液的温度可减少门静脉收缩强度。豚鼠解剖结构与大鼠有着差异，豚鼠的腔动脉和门静脉管壁更薄管腔更小，血管进行分离和吻合时其手术难度更大，受体手术时在吻合血管至最后时应注意排气，以防止气栓产生。有报道认为，豚鼠至大鼠心脏异种移植发生超急性排斥反应是由于补体旁路途径直接激活该反应不需要天然抗体参与，但也有人发现随着受体体内天然抗体滴度的下降，移植器官存活时间延长。
通过本实验研究，建立了非协调性异种胰腺移植动物模型，观察了移植胰腺的病理变化和生存时间。在此成熟模型的基础上，有待进一步寻求合适的非协调性异种胰腺移植动物模型以便深入研究。
(收稿日期:2003-12-16)
作者单位:130021吉林省人民医院
(编辑晓 勇), 百拇医药(王顺利)
关键词 异种动物 胰腺移植
【文献标识码】 A 【文章编号】 1684-2030(2003)12-1091-02
目前制约临床广泛开展器官移植的主要原因之一，是供体器官的严重缺乏。开展异种器官移植是当今世界器官移植研究的前沿课题，非协调性异种器官移植成为研究的 新方向。本文报告了豚鼠至大鼠异种胰腺移植动物模型的建立方法，对该模型的制作进行了探讨。
1 材料和方法
, 百拇医药
1.1 动物 供、受体为近交系封闭群雄性健康荷兰豚鼠(体重280±20g)和Wistar大鼠(体重250±20g)，供、受体术前12h禁食不禁水。
1.2 移植手术 手术在放大镜下单人进行操作，乙醚开放吸入麻醉。本实验是在成功的进行了预实验，熟练的掌握大鼠、豚鼠器官组织特殊解剖关系后进行了正式实验。
1.2.1 供体手术 乙醚麻醉生效后自豚鼠阴茎背静脉注入肝素400IU(200IU/ml，2ml)，供体早期肝素化。取剑突至耻骨联合腹部正中切口，显露胃左动脉起始处，分别结扎切断胃左和胃短血管，向左游离结扎脾脏血管，沿无血管区剪开胰下缘与大网膜的连接，结扎切断胃网膜左、右血管。于幽门环下方0.5cm处结扎十二指肠，依次切断食道及十二指肠近端，弃去胃。将十二指肠推向右方，游离门静脉直到进入肝门的分支处，保护幽门静脉，分离、结扎、切断肝固有动脉和胆总管。游离十二指肠:提起横结肠，锐性分离其与小肠间的联系，分束结扎结肠中血管及分支，于胰腺下缘，胰十二指肠下动脉分支远侧结扎肠系膜上血管及系膜。游离腹主动脉:结扎并切断右肾动脉，6-0线结扎并切断腹腔动脉与肠系膜上动脉间发出的两、三根腰动脉，至此带有腹腔动脉和肠系膜上动脉的腹主动脉已完全游离开。原位低温灌注:在肠系膜上动脉开口以下的腹主动脉其远端用动脉夹暂阻断，钳夹腹腔动脉开口以上的腹主动脉，于肝门门静脉分叉处切断门静脉，立即用4℃肝素林格氏液(25IU/ml)经腹主动脉进行缓慢、低压、匀速、搏动性灌注，灌注压力以刚能见到腹腔动脉及肠系膜上动脉搏动为度。通常约需灌洗液5～8ml，直到整个胰腺和十二指肠苍白，门静脉流出澄清的灌洗液，十二指肠浆膜下边缘动静脉的积血完全洗净，血管清晰可见。结扎并切断肠系膜上动脉远端的腹主动脉，距腹腔动脉以上0.5cm处切断腹主动脉近端。在空肠与十二指肠之间形成明确分界线处切断肠管，并在肠系膜上血管结扎线远端切断系膜，完整取下移植物，包括全胰，十二指肠并连用腹主动脉及门静脉的血管蒂，迅速将移植物置入盛有4℃含肝素(25IU/ml)的复方乳酸钠林格氏液的器皿中，放于冰盘上保存。供体手术需时间40～50min。
, 百拇医药
1.2.2 移植物的准备 弧形剪除门静脉间隔，注意上下位置，分别用8-0，9-0无损伤缝合针牵吊标记腹主动脉、门静脉位置后，置于4℃冰箱中备移植用。移植物修剪需时间5min。
1.2.3 受体手术 取腹部正中剑突至耻骨联合切口。游离血管:自左肾静脉以下将腹主动脉和下腔静脉完全游离开至髂血管分叉处(约1～1.5cm)，预定吻合段血管用6-0线结扎腰背部回流至下腔静脉的细小分支。在阻断血液循环之前经阴茎背静脉注入肝素生理盐水(2～3ml)。吻合血管:血管夹—并阻断腹主动脉和下腔静脉，依移植物血管口 径在受体腹主动脉和下腔静脉表面剪一椭圆形口，肝素生理盐水冲净血管腔内积血，按供体门静脉—受体下腔静脉，供体腹主动脉—受体腹主动脉顺序自上而下分别用9-0，8-0无损伤缝合针线行两定点连续吻合，在动静脉吻合最后一针前，腔内注入肝素生理盐水冲除气泡，开放循环前仔细检查吻合口有无裂隙、不均，撤去血管夹，干棉球压迫吻合口1～2min，可见腹腔动脉，肠系膜上动脉搏动有力，门静脉充盈，移植物由苍白变红润。用6-0无损伤缝合线行供、受体十二指肠端侧单层连续缝合。移植物放置于腹腔右侧，避免动、静脉扭曲。受体手术需时间50～60min。
, 百拇医药
1.2.4 移植成活标准及存活时间 成活标准:腹主动脉和下腔静脉吻合之后撤去止血钳，吻合口无扭曲、无狭窄，且充盈、通畅，无明显渗出血。供体胰腺及十二指肠迅速由苍白转为红润，且有光泽。停止麻醉后受体可清醒。存活时间:手术结束后确定受体已经成活至受体呼吸停止时间。
2 结果
本实验完成了20只异种胰腺移植，受体存活17只(85%)，存活时间平均167.41±52.08min。有3只受体动物各因麻醉意外和血管吻合问题而死亡。血管开放后移植物灌注血液较均匀、充分，即可见组织由苍白转为红润，但移植物由红润逐渐转为充血进而变成淤血、水肿表现，且逐渐加重。逐渐出现呼吸停止而死亡。
3 讨论
近年器官移植发展突飞猛进，但是供体严重不足，限制了器官移植的发展，于是开展了各种异种器官移植的研究。目前开展比较多的是协调性异种器官移植，非协调性异种器官移植主要是心脏移植和仅有少量的肝脏移植研究报告，豚鼠、大鼠间的胰腺异种器官移植尚未见报道。豚鼠门静脉内含多量的平滑肌成分，经门静脉冷灌洗后，平滑肌收缩可导致门静脉管腔变窄而造成静脉回流受阻，有报告提出提高门静脉灌洗液的温度可减少门静脉收缩强度。豚鼠解剖结构与大鼠有着差异，豚鼠的腔动脉和门静脉管壁更薄管腔更小，血管进行分离和吻合时其手术难度更大，受体手术时在吻合血管至最后时应注意排气，以防止气栓产生。有报道认为，豚鼠至大鼠心脏异种移植发生超急性排斥反应是由于补体旁路途径直接激活该反应不需要天然抗体参与，但也有人发现随着受体体内天然抗体滴度的下降，移植器官存活时间延长。
通过本实验研究，建立了非协调性异种胰腺移植动物模型，观察了移植胰腺的病理变化和生存时间。在此成熟模型的基础上，有待进一步寻求合适的非协调性异种胰腺移植动物模型以便深入研究。
(收稿日期:2003-12-16)
作者单位:130021吉林省人民医院
(编辑晓 勇), 百拇医药(王顺利)